肖海霞，托乎提·阿及德，石國(guó)慶，張莉，李海（1.石河子大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院，新疆石河子83000；.新疆畜牧科學(xué)院畜牧研究所，新疆烏魯木齊830000；3.新疆農(nóng)墾科學(xué)院，新疆石河子83000；4.中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院北京畜牧獸醫(yī)研究所，北京100193；.昭蘇縣畜牧獸醫(yī)局，新疆昭蘇83600）

斷奶應(yīng)激對(duì)母馬血液生化和激素的影響

肖海霞1，2，托乎提·阿及德2，石國(guó)慶1，3*，張莉4*，李海5
（1.石河子大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院，新疆石河子832000；2.新疆畜牧科學(xué)院畜牧研究所，新疆烏魯木齊830000；3.新疆農(nóng)墾科學(xué)院，新疆石河子832000；4.中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院北京畜牧獸醫(yī)研究所，北京100193；5.昭蘇縣畜牧獸醫(yī)局，新疆昭蘇835600）

為研究斷奶應(yīng)激對(duì)母馬血液生化和激素的影響，選擇15匹斷奶馬駒的英純血母馬，測(cè)定母馬斷奶前、斷奶當(dāng)天和斷奶后10個(gè)血液指標(biāo)。根據(jù)斷奶馬駒月齡和母馬年齡分別對(duì)母馬測(cè)定指標(biāo)進(jìn)行R2.14.2語(yǔ)言分析。結(jié)果表明：斷奶當(dāng)天所有母馬葡萄糖（GLU）含量都顯著高于斷奶前（P＜0.05）；斷奶當(dāng)天，7月齡和8月齡斷奶馬駒的母馬游離脂肪酸（FFA）含量顯著低于斷奶前（P＜0.05），而6月齡斷奶馬駒的母馬斷奶前后差異不顯著；6～9歲母馬在斷奶當(dāng)天白蛋白（ALB）含量最高，游離脂肪酸（FFA）和皮質(zhì)醇（COR）含量最低，其中游離脂肪酸（FFA）與斷奶前差異顯著，皮質(zhì)醇（COR）和白蛋白（ALB）與斷奶后差異顯著（P＜0.05），而10～13歲母馬的白蛋白（ALB）、游離脂肪酸（FFA）和皮質(zhì)醇（COR）含量在斷奶前后差異都不顯著。由此可知在馬駒斷奶時(shí)應(yīng)重點(diǎn)關(guān)注6月齡斷奶馬駒的母馬和10～13歲母馬。

血液生化指標(biāo)；激素；斷奶；母馬

近年來(lái)動(dòng)物福利問(wèn)題日益成為人們關(guān)注的熱點(diǎn)。一般認(rèn)為在良好福利條件下，動(dòng)物的生產(chǎn)表現(xiàn)較好，生理生化指標(biāo)也比較正常。在生產(chǎn)實(shí)踐中，馬駒斷奶會(huì)使母馬產(chǎn)生應(yīng)激，其生產(chǎn)性能、血液生理生化和行為指標(biāo)都會(huì)產(chǎn)生波動(dòng)，并對(duì)母馬機(jī)體造成危害，降低母馬的動(dòng)物福利，經(jīng)濟(jì)效益受損。血液的生化和激素成分是家畜生命活動(dòng)的物質(zhì)基礎(chǔ)，是機(jī)體生理功能和代謝過(guò)程的內(nèi)在反映，也是評(píng)價(jià)動(dòng)物健康狀況和判斷家畜應(yīng)激程度的參考依據(jù)［1］。因此，了解家畜血液生化和激素指標(biāo)對(duì)提高家畜生產(chǎn)性能和家畜的動(dòng)物福利，減少應(yīng)激對(duì)家畜的影響以及指導(dǎo)生產(chǎn)者對(duì)應(yīng)激采取相應(yīng)的措施具有重要的實(shí)際意義。用于評(píng)價(jià)家畜應(yīng)激狀態(tài)的血液指標(biāo)通常有葡萄糖［2-3］、總蛋白和球蛋白［3-4］、β-羥丁酸［3］、尿素氮［5］、肌酸激酶［6］、游離脂肪酸［7-8］、皮質(zhì)醇［2，9］和去氫表雄酮［10］等。目前，在仔豬、羔羊和犢牛上都已開(kāi)展斷奶應(yīng)激的研究［1，4，6，11-13］，但關(guān)于母馬斷奶應(yīng)激的研究鮮有報(bào)道。本試驗(yàn)采用突然斷奶法將英純血母馬和馬駒完全分離，根據(jù)斷奶馬駒月齡和母馬年齡分別分析斷奶前后測(cè)定的10個(gè)血液指標(biāo)的變化，為實(shí)際生產(chǎn)中提高母馬的健康福利、制定母馬斷奶應(yīng)激監(jiān)測(cè)技術(shù)和改進(jìn)飼養(yǎng)管理技術(shù)措施等方面提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)時(shí)間和地點(diǎn)試驗(yàn)于2013年11月18日—12月10日在新疆伊犁哈薩克自治州昭蘇縣新疆伊犁馬研究繁育中心進(jìn)行。

1.2 試驗(yàn)動(dòng)物和分組選擇健康的15匹斷奶馬駒的英純血母馬進(jìn)行試驗(yàn)，母馬的年齡在6～13歲，均為經(jīng)產(chǎn)胎次，其中2胎次8匹，6胎次7匹。根據(jù)馬駒的斷奶月齡將母馬分成3組，第1組：6月齡斷奶馬駒的母馬5匹；第2組：7月齡斷奶馬駒的母馬5匹；第3組：8月齡斷奶馬駒的母馬5匹。根據(jù)母馬的年齡分成2組：A組為6～9歲母馬7匹，B組為10～13歲母馬8匹。

1.3 斷奶方法及飼養(yǎng)管理

1.3.1 斷奶方法斷奶前母馬與馬駒一起單廄飼喂；采用突然斷奶的方法，將母馬和馬駒先驅(qū)趕到對(duì)應(yīng)馬圈里，然后將馬駒單獨(dú)放置在馬駒圈內(nèi)，使母馬和馬駒完全隔離。

1.3.2 飼養(yǎng)管理斷奶前母馬和馬駒單廄飼喂，斷奶后母馬單廄飼喂。母馬斷奶前后的飼喂方式相同：每匹母馬每天飼喂2次混合飼料，每次1 kg；每天3次苜蓿，每次3 kg；每天2次干草，每次3 kg。使其充足飲水并自由采食定量分配的飼草。

1.4 樣品采集與處理

1.4.1 采血時(shí)間母馬血樣分別于斷奶前第10天（以下簡(jiǎn)稱斷奶前）、斷奶當(dāng)天和斷奶后第12天（以下簡(jiǎn)稱斷奶后）晨飼2 h后采集。

1.4.2 采血和處理方法由頸靜脈采血10 mL，傾斜放置4℃冰箱靜置一夜析出血清后，以3 000 r/min離心20 min，收集血清于-20℃低溫冰箱保存?zhèn)溆?，?～5 mL送北京華英生物技術(shù)研究所檢測(cè)。

1.5 血液生化和激素指標(biāo)測(cè)定方法總蛋白（TP）：雙縮脈法；白蛋白（ALB）：溴甲酚綠法；球蛋白（GLB）：總蛋白一白蛋白；尿素氮（BUN）：兩點(diǎn)動(dòng)力法；葡萄糖（GLU）：葡萄糖氧化酶法；肌酸激酶（CK）：采用連續(xù)監(jiān)測(cè)法（N-乙酰半胱氨酸法）；游離脂肪酸（FFA）：改良比色法；β-羥丁酸（β-HB）：酶法；皮質(zhì)醇（COR）：放射免疫測(cè)定；去氫表雄酮（DHEA-S）：放射免疫測(cè)定。

1.6 統(tǒng)計(jì)分析由于在試驗(yàn)過(guò)程中1匹母馬意外死亡，3匹母馬出現(xiàn)腸扭轉(zhuǎn)未能采樣，因此只有11匹母馬有檢測(cè)結(jié)果。根據(jù)斷奶馬駒月齡和母馬年齡分別進(jìn)行整理分析，整理統(tǒng)計(jì)分析工具主要采用Excel軟件、R2.14.2語(yǔ)言、Duncan′s多重比較法，試驗(yàn)結(jié)果用平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤表示。

2 結(jié)果與分析

有研究表明，斷奶應(yīng)激會(huì)導(dǎo)致血液葡萄糖（GLU）［11］、β-羥丁酸（β-HB）［11］、肌酸激酶（CK）［6，12］、游離脂肪酸（FFA）［13］和皮質(zhì)醇濃度升高［14-15］；而總蛋白（TP）、球蛋白（GLB）［16-17］、尿素氮（BUN）［12］和去氫表雄酮（DHEA）濃度下降［10］。這些指標(biāo)的變化不利于家畜機(jī)體的生理功能及代謝過(guò)程，會(huì)對(duì)家畜機(jī)體造成危害，損害家畜的動(dòng)物福利，降低經(jīng)濟(jì)效益。因此，在生產(chǎn)實(shí)際中可以參考這些指標(biāo)來(lái)判斷家畜應(yīng)激程度，并盡可能避免應(yīng)激或?qū)?yīng)激降至最小。

2.1 不同時(shí)期所有母馬血清生化和激素指標(biāo)變化由表1可見(jiàn)，所有母馬的GLU、FFA和COR在不同時(shí)期發(fā)生顯著的變化，其中，斷奶當(dāng)天GLU含量最高，并且與斷奶前差異顯著（P＜0.05）。斷奶當(dāng)天FFA和COR含量最低，其中FFA與斷奶前差異顯著（P＜0.05），而COR與斷奶后差異顯著（P＜0.05）。

表1 所有母馬不同斷奶時(shí)期血液生化和激素指標(biāo)的測(cè)定結(jié)果

2.2 不同斷奶月齡馬駒的母馬斷奶前后血液生化和激素指標(biāo)變化

2.2.1 具體時(shí)期不同斷奶月齡馬駒的母馬血清生化和激素指標(biāo)的影響由表2可知，在斷奶前、斷奶當(dāng)天和斷奶后3個(gè)時(shí)期，6、7、8月齡斷奶馬駒的母馬所測(cè)定的10個(gè)血清指標(biāo)之間都沒(méi)有明顯的變化（P＞0.05）。

2.2.2 具體斷奶月齡馬駒的母馬在不同時(shí)期的血清生化和激素指標(biāo)變化由表3可見(jiàn)，F(xiàn)FA濃度在7月齡和8月齡斷奶馬駒的母馬斷奶前后發(fā)生了顯著變化，其中斷奶當(dāng)天7月齡和8月齡的FFA濃度最低，并且它們都與斷奶前差異顯著（P＜0.05），而6月齡斷奶馬駒的母馬的FFA濃度在斷奶前后差異不顯著（P＞0.05）。其余9個(gè)指標(biāo)在不同月齡斷奶馬駒的不同時(shí)期之間差異都不顯著（P＞0.05）。

2.2.3 不同胎次斷奶月齡馬駒的母馬血清生化和激素指標(biāo)變化由表4可知，對(duì)于不同斷奶月齡馬駒的母馬，不同胎次只在DHEA-S水平上表現(xiàn)明顯的變化，6胎次DHEA-S濃度顯著高于2胎次的DHEA-S，其他9個(gè)指標(biāo)之間差異不顯著（P＞0.05）。

2.3 不同年齡母馬斷奶前后的血液生化和激素指標(biāo)變化

2.3.1 具體時(shí)期不同年齡母馬血清生化和激素指標(biāo)的變化由表5可知，6～9歲母馬和10～13歲母馬在斷奶前、斷奶當(dāng)天和斷奶后3個(gè)時(shí)期的10個(gè)血清生化和激素指標(biāo)之間都沒(méi)有明顯的變化（P＞0.05）。

2.3.2 不同年齡母馬在不同時(shí)期的血清生化和激素變化由表6可見(jiàn)，ALB、FFA和COR濃度在6～9歲母馬的斷奶前后發(fā)生了顯著變化，GLU濃度在10～13歲母馬的斷奶前后發(fā)生了顯著變化，其中斷奶當(dāng)天6～9歲母馬的ALB濃度最高并且與斷奶后差異顯著（P＜0.05）；斷奶當(dāng)天FFA和COR濃度最低，其中FFA與斷奶前差異顯著（P＜0.05），COR與斷奶后差異顯著（P＜0.05）。10～13歲母馬斷奶當(dāng)天的GLU最高并且與斷奶前差異顯著（P＜0.05），其余指標(biāo)差異都不顯著（P＞0.05）。

表2 具體時(shí)期不同斷奶月齡馬駒母馬的血液生化和激素指標(biāo)測(cè)定結(jié)果

表3 不同月齡斷奶馬駒母馬在不同時(shí)期的血液生化和激素指標(biāo)的變化

表4 不同胎次斷奶月齡馬駒母馬的血液生化和激素指標(biāo)

2.3.3 不同胎次母馬的血清生化和激素指標(biāo)變化由表7可知，不同胎次母馬所測(cè)定的10個(gè)指標(biāo)之間差異不顯著（P＞0.05）。

3 討論

3.1 不同時(shí)期所有母馬血清生化和激素指標(biāo)變化本試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)馬駒斷奶前后，所有母馬的GLU、FFA和COR含量都發(fā)生顯著變化。血液中的GLU是糖在體內(nèi)的運(yùn)輸形式，是測(cè)定機(jī)體能量平衡的一個(gè)重要指標(biāo)，與家畜生產(chǎn)性能密切相關(guān)。應(yīng)激是對(duì)擾亂機(jī)體正常生理功能所作出的反應(yīng)，大多家畜應(yīng)激時(shí)血清GLU濃度會(huì)升高，因?yàn)榘l(fā)生應(yīng)激時(shí)，胰高血糖素和兒茶酚胺能促進(jìn)糖原降解提供葡萄糖供能，同時(shí)增強(qiáng)了淋巴、肌肉和結(jié)締組織中的糖異生作用。斷奶應(yīng)激會(huì)影響母馬的生理、健康和營(yíng)養(yǎng)福利。楊培歌等［8］報(bào)道地面溫度過(guò)低使生長(zhǎng)豬產(chǎn)生應(yīng)激并且體內(nèi)血糖含量顯著升高。

本研究結(jié)果表明，斷奶當(dāng)天所有組別的母馬GLU含量都顯著高于斷奶前，這與Lynch［11］對(duì)犢牛的斷奶應(yīng)激研究結(jié)果一致，說(shuō)明馬駒斷奶會(huì)導(dǎo)致所有母馬產(chǎn)生斷奶應(yīng)激。與6月齡和7月齡斷奶馬駒的母馬相比，8月齡斷奶馬駒的母馬GLU含量在斷奶當(dāng)天和斷奶后都是最低的，說(shuō)明8月齡斷奶馬駒的母馬所產(chǎn)生的斷奶應(yīng)激低于7月齡和6月齡斷奶馬駒的母馬。而在斷奶當(dāng)天和斷奶后，6～9歲母馬比10～13歲母馬的GLU含量低，從而說(shuō)明在GLU水平上所反映的應(yīng)激程度是6～9歲母馬小于10～13歲母馬。

表5 具體時(shí)期不同年齡母馬血液生化和激素指標(biāo)

表6 不同年齡母馬在不同時(shí)期的血液生化和激素指標(biāo)的變化

表7 不同胎次母馬的血液生化和激素指標(biāo)

3.2 不同斷奶月齡馬駒的母馬斷奶前后的血液生化和激素指標(biāo)變化在應(yīng)激、饑餓、長(zhǎng)時(shí)間運(yùn)動(dòng)等生理?xiàng)l件下，脂肪組織中脂肪的動(dòng)員都會(huì)加強(qiáng)，此時(shí)下丘腦一垂體一腎上腺軸的激活會(huì)導(dǎo)致血漿中游離脂肪酸增加［13］。與程發(fā)祥［13］研究結(jié)果相反。本試驗(yàn)中斷奶當(dāng)天，7月齡和8月齡斷奶馬駒的母馬FFA含量顯著低于斷奶前，而6月齡斷奶馬駒的母馬斷奶前后差異不顯著，從而說(shuō)明7月齡和8月齡斷奶馬駒的母馬在FFA水平上所反映的斷奶應(yīng)激反應(yīng)程度上低于6月齡斷奶馬駒的母馬。

3.3 不同年齡母馬斷奶前后的血液生化和激素指標(biāo)變化血清總蛋白、白蛋白、球蛋白含量是評(píng)價(jià)血清蛋白質(zhì)營(yíng)養(yǎng)重要指標(biāo)之一。應(yīng)激條件下，家畜體內(nèi)皮質(zhì)醇分泌增多，蛋白分解加快，從而使血清蛋白含量降低［16］。冷靜等［17］發(fā)現(xiàn)不同日齡斷奶仔豬在斷奶后7 d內(nèi)的TP、ALB和GLB均會(huì)迅速降低。與冷靜等［17］結(jié)果相反，本研究發(fā)現(xiàn)6～9歲母馬在斷奶當(dāng)天ALB含量最高，并且與斷奶前差異顯著，而10～13歲母馬的ALB含量在斷奶前后差異不顯著從而說(shuō)明6～9歲母馬在ALB水平上所表現(xiàn)的斷奶應(yīng)激程度小于10～13歲母馬。與程發(fā)祥［13］研究結(jié)果相反，本研究中的6～9歲母馬在斷奶當(dāng)天FFA含量最低，并且與斷奶前差異顯著，從而說(shuō)明6～9歲母馬在FFA水平上所表現(xiàn)的斷奶應(yīng)激程度較小。

應(yīng)激時(shí)家畜的下丘腦分泌促腎上腺皮質(zhì)激素釋放激素，促進(jìn)垂體分泌促腎上腺皮質(zhì)激素，使腎上腺皮質(zhì)激素合成和釋放增加，從而使體內(nèi)皮質(zhì)醇濃度上升。湯繼順等［14］研究發(fā)現(xiàn)，26日齡的杜長(zhǎng)×大×三元雜交仔豬在斷奶后1周內(nèi)血清皮質(zhì)醇含量極顯著升高。Erber等［15］研究發(fā)現(xiàn)，斷奶當(dāng)天采用突然斷奶法、代乳母馬法和逐步斷奶的馬駒在斷奶當(dāng)天的皮質(zhì)醇顯著增加。本試驗(yàn)中斷奶當(dāng)天，6～9歲母馬COR濃度顯著低于斷奶后，而10～13歲母馬COR濃度斷奶當(dāng)天和斷奶后均有上升的趨勢(shì)，從而說(shuō)明不同年齡母馬在皮質(zhì)醇濃度水平上反映出斷奶應(yīng)激程度是10～13歲母馬高于6～9歲的母馬。

3.4 不同胎次母馬血清生化和激素指標(biāo)的變化去氫表雄酮（DHEA-S）濃度的下降已經(jīng)被作為應(yīng)激反應(yīng)的指標(biāo)［10］。本試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，不同斷奶月齡馬駒的母馬的6胎次DHEA-S濃度顯著高于2胎次的母馬，說(shuō)明對(duì)于不同斷奶月齡馬駒的母馬胎次小的母馬應(yīng)激程度較高；而不同胎次在6～9歲和10～13歲母馬之間差異不顯著，這個(gè)可能是由于年齡越大，生產(chǎn)胎次相對(duì)越多，分析不同斷奶月齡馬駒的母馬時(shí)，不同的斷奶馬駒年齡組中既有胎次高的又有胎次低的，因此之間會(huì)存在差異，而不同年齡母馬的胎次基本與母馬年齡的變化趨勢(shì)一致，因此導(dǎo)致不同年齡母馬胎次間差異不顯著。

綜上所述，除了GLU、FFA和COR外，其余7個(gè)測(cè)定指標(biāo)在斷奶前后都沒(méi)有顯著變化，但是從顯著差異的指標(biāo)變化可以發(fā)現(xiàn)6月齡斷奶馬駒的母馬斷奶應(yīng)激程度較高，可能是因?yàn)轳R駒的斷奶月齡小，斷奶前6月齡馬駒對(duì)母馬的依賴性高于7月齡和8月齡馬駒，斷奶后6月齡斷奶馬駒的母馬所表現(xiàn)的念親性就高于其他兩組，從而導(dǎo)致應(yīng)激反應(yīng)大。而從母馬年齡分組的比較分析發(fā)現(xiàn)，10～13歲母馬的應(yīng)激程度略高于6～9歲母馬可能是因?yàn)?0～13歲母馬在代謝水平和免疫力上低于6～9歲母馬。

4 結(jié)論

6月齡斷奶馬駒的母馬和10～13歲母馬在馬駒斷奶時(shí)所表現(xiàn)的斷奶應(yīng)激程度較高，因此在馬駒斷奶實(shí)際生產(chǎn)中應(yīng)予以重點(diǎn)關(guān)注，盡量避免和減少斷奶應(yīng)激對(duì)母馬的影響，從而提高母馬的健康福利。同時(shí)可以將血液葡萄糖（GLU）、游離脂肪酸（FFA）和皮質(zhì)醇（COR）的含量作為母馬是否處于應(yīng)激狀態(tài)的輔助性檢測(cè)指標(biāo)，這對(duì)生產(chǎn)者采取應(yīng)對(duì)應(yīng)激措施具有一定指導(dǎo)意義。

致謝：本試驗(yàn)得到了新疆伊犁馬研究繁育中心居馬洪、江阿努爾和努爾蘭以及石河子大學(xué)毋狀元的大力支持，在此表示衷心地感謝！

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：0258-7033（2015）19-0075-05

2015-03-09；

2015-04-20

國(guó)家公益性行業(yè)（農(nóng)業(yè)）科研專項(xiàng)（201003075）；自治區(qū)重大專項(xiàng)項(xiàng)目（201230116—8）；自治區(qū)高新項(xiàng)目（201411106）作者簡(jiǎn)介：肖海霞（1975-），女，在職博士，副研究員，主要從事動(dòng)物遺傳育種與繁殖的研究，E-mail：xhxqzp@163.com

*通訊作者：石國(guó)慶，博士，研究員，E-mail：nkkxyxms@163.com