韓 飛， 楊致邦， 李建英， 周 政， 彭方毅， 姜海蓉， 杜紅心△

(1重慶三峽中心醫(yī)院檢驗科，重慶404100； 2重慶醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院病原生物學(xué)教研室，重慶 400016；3重慶理工大學(xué)藥學(xué)與生物工程學(xué)院制藥工程專業(yè)，重慶 400054； 4重慶市江津區(qū)中心醫(yī)院科教部，重慶 402260)

?

HP1188-IgY對感染幽門螺桿菌BALB/c小鼠的治療作用*

韓 飛1， 楊致邦2， 李建英1， 周 政1， 彭方毅3,4， 姜海蓉3， 杜紅心1△

(1重慶三峽中心醫(yī)院檢驗科，重慶404100；2重慶醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院病原生物學(xué)教研室，重慶 400016；3重慶理工大學(xué)藥學(xué)與生物工程學(xué)院制藥工程專業(yè)，重慶 400054；4重慶市江津區(qū)中心醫(yī)院科教部，重慶 402260)

目的： 評價抗幽門螺桿菌(Helicobacterpylori，H.pylori) HP1188 蛋黃抗體(HP1188-immunoglobulin yolk，HP1188-IgY)對 BALB/c 小鼠胃內(nèi)H.pylori感染的治療效果。方法: 建立H.pylori感染BALB/c 小鼠的動物模型，將建模成功的80只小鼠隨機(jī)分為8組，每組10只。第1組(抗生素治療組)、第2組(1 mg HP1188-IgY)、第3組(1 mg HP1188-IgY+ 30% 硫糖鋁)、第4組(5 mg HP1188-IgY)、第5組(5 mg HP1188-IgY+30%硫糖鋁)、第6組(PBS 對照組)和第7組(30% 硫糖鋁對照組)分別連續(xù)治療10 d，每天1次;第8組間隔48 h 皮下注射2.5 mg HP1188-IgY，共2次;另10只正常小鼠為第9組(健康對照組)。處理完成 2周后取各組小鼠胃組織作H.pylori培養(yǎng)、快速尿素酶試驗、PCR 檢測H.pylori特異性vacA和cagA及病理組織學(xué)檢查，觀察H.pylori清除情況并進(jìn)行評分。結(jié)果: 在小鼠體內(nèi)，灌胃(1 mg HP1188-IgY+ 30%硫糖鋁)即可有效治療H.pylori感染引起的胃黏膜損害，其治療效果與抗生素相似。結(jié)論: 成功構(gòu)建了H.pylori感染的BALB/c 小鼠模型，選擇30% 硫糖鋁為抗體保護(hù)劑，經(jīng)口服HP1188-IgY 可抑制小鼠胃內(nèi)H.pylori感染。

幽門螺桿菌； HP1188蛋黃抗體； 硫糖鋁

幽門螺桿菌(Helicobacterpylori，H.pylori)是引起慢性胃炎和胃潰瘍的最常見原因[1-2]。H.pylori在胃內(nèi)的黏附定居是其致病的首要步驟，黏附素是由H.pylori表達(dá)并參與其對胃黏膜上皮黏附定植的一種外膜蛋白，它能與胃上皮細(xì)胞表面的受體發(fā)生特異性結(jié)合，使細(xì)菌定居于胃黏膜上。HP1188 蛋白是2005 年Rubinsztein-Dunlop等[3]利用鎳珠模型法從H.pylori中篩選到一種新的黏附素蛋白，研究表明HP1188 蛋白在H.pylori表面表達(dá)量很高，免疫原性強(qiáng)，有黏附功能。目前抗生素治療H.pylori感染存在藥物毒副作用大、細(xì)菌耐藥和治愈率不高等問題[4]。故尋求高效廉價、毒副作用少，患者易接受的抑殺H.pylori的抗生素替代方法成為醫(yī)學(xué)研究中的關(guān)注點。受到雞蛋黃抗體(immunoglobulin yolk，IgY)抗胃腸道感染研究的啟發(fā)[5]，IgY 在防治H.pylori方面的應(yīng)用也受到國內(nèi)外學(xué)者關(guān)注[6]。由于正常胃內(nèi)存在高酸性和蛋白酶的生態(tài)環(huán)境，提高IgY 對酸和蛋白酶的穩(wěn)定性對口服IgY 的應(yīng)用具有重要意義。硫糖鋁(sucralfate)[7]具有顯著的黏附性，可與大分子物質(zhì)如黏液、糖脂蛋白以及它蛋白等結(jié)合，也可與胃黏膜表面的黏液結(jié)合形成復(fù)合的膠狀物，起到黏膜保護(hù)作用。本研究已在前期工作中獲得了抗H.pyloriHP1188 蛋黃抗體[8](即HP1188-IgY)，參照文獻(xiàn)[9]建立無特定病原體(specific-pathogen free, SPF)BALB/c 小鼠感染胃炎模型，參照文獻(xiàn)[10]選擇30% 硫糖鋁作為胃黏膜保護(hù)劑，以質(zhì)子泵抑制劑(proton pump inhibitors，PPI)奧美拉唑加上阿莫西林和替硝唑的“三聯(lián)”療法[11]為抗生素對照組，分別檢測直接灌胃HP1188-IgY、HP1188-IgY+30% 硫糖鋁和皮下注射HP1188-IgY 對H.pylori感染小鼠的治療效果，評價HP1188-IgY 治療H.pylori感染的可行性，為進(jìn)一步研究H.pylori的致病機(jī)制，制備防治H.pylori感染的口服制劑奠定基礎(chǔ)。

材 料 和 方 法

1 動物及主要試劑

HP1188-IgY 為我室制備并保存；H.pylori悉尼株1(Sydney strain 1，SS1)來源于重慶醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院病原生物學(xué)教研室；SPF級BALB/c小鼠，4～8周齡雌性，體重17～20 g，購自重慶醫(yī)科大學(xué)實驗動物中心；布氏肉湯為北京陸橋商檢新技術(shù)公司產(chǎn)品；抗生素混合液(20 g/L氨芐青霉素0.25 mL，4 g/L慶大霉素0.15 mL，50 g/L阿奇霉素0.1 mL)購自本院藥劑科；舒可捷(硫糖鋁混懸液)購自上海旭東海普制藥公司；PPI加上阿莫西林和替硝唑的“三聯(lián)”抗生素合劑1.0 mL(每100 mL中含奧美拉唑 2 mg，阿莫西林100 mg，替硝唑50 mg)購自本院藥劑科。

2 方法

2.1 灌胃用H.pylori菌液制備 布氏選擇性培養(yǎng)基上收集新鮮H.pylori菌落于pH 7.0的布氏肉湯成混懸液，分光光度計比濁法調(diào)整菌懸液終濃度為2×1012CFU/L(A660=2，菌液濃度相當(dāng)于2×1012/L)備用。

2.2 建立BALB/c 小鼠感染H.pylori的動物模型 參照文獻(xiàn)[9]的方法，第1～3 天，每天用抗生素混合液0.5 mL給小鼠灌胃，每天1次，用于清除鼠胃內(nèi)雜菌。第4 天 起，小鼠禁食禁水24 h 后，用無菌3% NaHCO30.3 mL灌胃中和胃酸，20 min 后新鮮 2×1012CFU/LH.pyloriSS1 菌液0.5 mL灌胃，4 h 后恢復(fù)進(jìn)食和進(jìn)水。同法隔天灌胃1 次，共5次；于末次灌胃的4、6周后隨機(jī)分批麻醉處死5只小鼠，取胃組織做H.pylori培養(yǎng)、快速尿素酶試驗(rapid urease test，RUT)、PCR 檢測H.pylori特異性vacA和cagA以及病理組織學(xué)檢查觀察小鼠感染情況。

2.3 PCR 檢測H.pylori特異性vacA和cagA待測胃組織標(biāo)本DNA 模板的提取參照文獻(xiàn)[12]進(jìn)行，同時抽提新鮮H.pylori基因組DNA作為陽性對照。PCR 反應(yīng)按試劑盒說明書進(jìn)行，反應(yīng)完畢后瓊脂糖凝膠電泳觀察擴(kuò)增片段，vacA和cagA在各自相應(yīng)分子量位置均出現(xiàn)目的條帶，判定為H.pyloriPCR 陽性。PCR 引物設(shè)計：在GenBank中查出H.pylorivacA和cagA的DNA 序列，用Primer Premier 5.0 軟件設(shè)計引物，由Invitrogen 公司合成，見表1。

表1 引物序列

2.4 動物分組 將建模成功的80只小鼠隨機(jī)分為8組，每組10只；另5只正常小鼠為第9組(健康對照組)。具體分組方案見表2。第1組(復(fù)合抗生素組)：“三聯(lián)”抗生素合劑1 mL。第2～5 組：將HP1188-IgY 用pH 7.0的PBS分別配制成濃度1 g/L和5 g/L，在IgY 液中分別加入30% 硫糖鋁作為第3組和第5組。第6組為PBS對照，第7組為30% 硫糖鋁對照。第1～7組分別于早上9 時在小鼠進(jìn)食前用灌胃液1 mL 給感染組小鼠灌胃，之后再禁食3～4 h ，每天1次，連續(xù)10 d。第8組經(jīng)皮下注射5 g/L HP1188-IgY 0.5 mL，間隔48 h 做第2次注射，以后不再注射。各組在處理方案完成的2周后麻醉處死小鼠，取胃組織作H.pylori培養(yǎng)、RUT、PCR 檢測H.pylori特異性vacA和cagA以及病理組織學(xué)檢查，觀察H.pylori清除情況并進(jìn)行評分。

表2 實驗小鼠分組和治療方案

2.5 HP1188-IgY 治療H.pylori感染的保護(hù)作用評價 先麻醉后頸椎脫位法處死小鼠，取出鼠胃置于消毒濾紙上，沿胃大彎剖開，用無菌生理鹽水輕輕洗掉胃內(nèi)殘留食物。將胃縱切為3份，每一份均含胃底、胃體和胃竇部分。一份用于H.pylori培養(yǎng)和RUT;一份用于PCR 檢測H.pylori特異性vacA和cagA；另一份用10%中性福爾馬林固定，石蠟包埋后切片，改良Giemsa 染色后鏡檢觀察H.pylori定植情況。(1) 培養(yǎng)H.pylori的鑒定：包括菌落形態(tài)、涂片革蘭染色和生化實驗。(2) RUT：黃色為陰性(0分)，紫紅色為強(qiáng)陽性(4+)，記為4分，根據(jù)顏色深淺以1～4不同程度評分。(3) PCR 產(chǎn)物經(jīng)1% 瓊脂糖電泳分析可見在720 bp 左右有一條帶即vacA，在820 bp 左右有一條帶即cagA。(4) 組織學(xué)檢查：觀察10個視野胃小凹H.pylori的定植，按下法進(jìn)行半定量評分：0分，無H.pylori定植；1分，部分胃小凹有1～2 條H.pylori；2分，多數(shù)胃小凹有3～10 條H.pylori；3分，多數(shù)胃小凹有超過 10條H.pylori。

H.pylori感染陽性判斷：以H.pylori培養(yǎng)、RUT、PCR和組織切片Giemsa 染色檢查4 項中至少3 項陽性為H.pylori感染陽性。H.pylori根除標(biāo)準(zhǔn)：治療停止后2周做H.pylori培養(yǎng)、RUT、PCR和組織切片Giemsa 染色檢查4 項均為陰性為H.pylori根除。

2.6 實驗小鼠胃黏膜組織病理學(xué)檢查 小鼠胃組織用4%甲醛固定，石蠟包埋后切片，HE 染色，高倍鏡下觀察 10個視野固有層淋巴細(xì)胞和中性粒細(xì)胞的浸潤情況，以判斷慢性炎癥程度。慢性炎癥評分標(biāo)準(zhǔn)：0分，固有層偶見淋巴細(xì)胞浸潤；1分，固有層散在淋巴細(xì)胞和中性粒細(xì)胞浸潤；2分，固有層有中等量淋巴細(xì)胞和中性粒細(xì)胞浸潤；3分，固有層大量淋巴細(xì)胞和中性粒細(xì)胞浸潤。

3 統(tǒng)計學(xué)處理

用SPSS 13.0 統(tǒng)計軟件進(jìn)行分析。計數(shù)資料進(jìn)行Fisher 精確檢驗；計量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(mean±SD)表示，各組之間比較進(jìn)行t檢驗；以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

結(jié) 果

1H.pylori感染BALB/c 小鼠的動物模型構(gòu)建情況

健康對照組小鼠胃黏膜H.pylori培養(yǎng)、RUT、PCR 檢測vacA和cagA以及組織學(xué)檢查結(jié)果全為陰性，顯示所有小鼠均無H.pylori感染；HE 染色鏡檢胃黏膜組織全層未見明顯炎癥細(xì)胞浸潤等病理改變，排除了BALB/c 小鼠自然感染的存在。BALB/c 小鼠在灌喂H.pylori6周后，胃黏膜各項實驗結(jié)果均為陽性，感染率均達(dá)到100%，感染情況見圖1～2和表3。感染小鼠胃組織經(jīng)Giemsa 染色，鏡下可清楚地顯示H.pylori菌體呈S 形或彎曲桿狀典型形態(tài)，多位于胃小凹及胃腺腔內(nèi)。HE 染色可見感染小鼠胃內(nèi)出現(xiàn)與人感染H.pylori相同的病理變化，即胃黏膜呈現(xiàn)中度到重度炎癥改變，可見充血水腫，固有層炎癥細(xì)胞浸潤，胃上皮糜爛和潰瘍形成，說明在本實驗中構(gòu)建的H.pylori感染BALB/c 小鼠的動物模型是成功的。

Figure 1.Detection of H.pylori vacA and cagA gene fragments by PCR.M: DNA marker; 1: vacA of H.pylori in infected BALB/c stomach; 2: vacA of H.pylori; 3: vacA of H.pylori in uninfected BALB/c stomach; 4: cagA of H.pylori in uninfected BALB/c stomach; 5: cagA of H.pylori in infected BALB/c stomach; 6: cagA of H.pylori.

Figure 2.H. pylori colonization (Giemsa staining, ×1 000) and inflammation (HE staining, ×400)from gastric mucosa of control group.2.1～2.2 : negative control group; 2.3～2.4: positive control group.

表3 對照組BALB/c 小鼠感染H.pylori 情況

2 HP1188-IgY根除H.pylori的效果

各處理組小鼠實驗結(jié)果見圖3、表4、PBS對照組小鼠胃黏膜有大量H.pylori定植，黏膜發(fā)生嚴(yán)重潰爛脫落，輪廓消失。第2組(1 mg HP1188-IgY)、第7組(30%硫糖鋁對照組)、第8 組(皮下注射2.5 mg HP1188-IgY)分別與PBS對照組結(jié)果比較未見顯著差異(P>0.05)，表明單獨低劑量HP1188-IgY、單獨30%硫糖鋁和皮下注射2.5 mg HP1188-IgY對H.pylori感染不能起到治療作用。第1、3、4、5 組與PBS對照組小鼠結(jié)果比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，表明選擇用復(fù)合抗生素、1 mg HP1188-IgY+ 30%硫糖鋁、5 mg HP1188-IgY或5 mg HP1188-IgY+ 30%硫糖鋁分別治療H.pylori感染小鼠，均能明顯降低H.pylori定植。第3、4、5組與第1組(抗生素治療組)檢測結(jié)果比較無顯著差異(P>0.05)，表明選擇1 mg HP1188-IgY+ 30%硫糖鋁、5 mg HP1188-IgY或5 mg HP1188-IgY+ 30%硫糖鋁分別治療H.pylori感染小鼠能達(dá)到與抗生素治療組同樣的效果。

3 HP1188-IgY改善實驗小鼠胃黏膜組織病理學(xué)變化

PBS對照組小鼠胃黏膜呈中度到重度炎癥改變，HE 染色可見黏膜下層有大量淋巴細(xì)胞浸潤，且存在中性粒細(xì)胞浸潤及腺體破壞，甚至形成潰瘍，見圖3、表4。第1、3、4、5組小鼠胃黏膜慢性炎癥評分均明顯低于PBS對照組，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；而第3、4、5組分別與第1組(抗生素治療組)比較，小鼠胃黏膜慢性炎癥程度評分比較均未見顯著差異(P>0.05)，表明選擇用復(fù)合抗生素、1 mg HP1188-IgY+ 30%硫糖鋁、5 mg HP1188-IgY或5 mg HP1188-IgY+ 30%硫糖鋁分別治療H.pylori感染小鼠，不僅能減少H.pylori定植，而且能減輕因H.pylori感染引起的胃黏膜慢性炎癥反應(yīng)程度。

討 論

H.pylori在胃內(nèi)的黏附定居是其致病的首要步驟。H.pylori培養(yǎng)是檢測H.pylori感染的金標(biāo)準(zhǔn)之一，但有假陰性的可能。RUT 敏感性高，特異性受雜菌影響較大。PCR 易產(chǎn)生假陽性，所以我們擴(kuò)增H.pylorivacA和cagA兩個基因片段，以雙陽性結(jié)果作為PCR 陽性結(jié)果判斷。在實驗中我們選擇H.pylori培養(yǎng)、RUT、PCR 檢測再聯(lián)合病理組織學(xué)觀察各組H.pylori感染及病理變化，這幾項實驗?zāi)芷鸬絻?yōu)勢互補(bǔ)作用，對結(jié)果評價更客觀。

目前抗生素療法弊端較多，尤其是耐藥菌株出現(xiàn)不僅導(dǎo)致治療失敗，并且還會發(fā)生抗生素使用后有益微生物也被一起殺死引起繼發(fā)反應(yīng)的現(xiàn)象。因此研究抗生素替代生物制品有重要臨床意義。用IgY 來防治H.pylori的報道較多[13]，本實驗針對黏附這一H.pylori感染的關(guān)鍵環(huán)節(jié)，在成功建立H.pylori感染小鼠模型基礎(chǔ)上，以常用抗生素治療為對照，分別觀察了經(jīng)口灌胃HP1188-IgY、HP1188-IgY+30% 硫糖鋁以及經(jīng)皮下注射HP1188-IgY 對胃內(nèi)H.pylori感染的治療效果，結(jié)果發(fā)現(xiàn)經(jīng)皮下注射HP1188-IgY 組小鼠胃內(nèi)H.pylori清除率為30%，其結(jié)果評分與抗生素治療組比較差異顯著(P<0.05)，分析其原因可能為H.pylori主要定植于胃黏膜表面和腺腔內(nèi)，注射來源的抗體對黏膜表面的細(xì)菌抑制作用較弱。而經(jīng)口灌胃1 mg HP1188-IgY+ 30%硫糖鋁即可有效治療H.pylori感染引起的胃黏膜損害，其治療效果與抗生素相似(P>0.05)，說明HP1188-IgY 需經(jīng)口服被動免疫途徑才能有效發(fā)揮其生物學(xué)活性，作用機(jī)理可能是口服后HP1188-IgY 能直接到達(dá)胃部，能直接黏附于H.pylori的細(xì)胞壁上，抑制其定植在胃黏膜上；并且30% 硫糖鋁能增強(qiáng) HP1188-IgY 對低 pH 和胃蛋白酶的耐受能力，表現(xiàn)在單獨用1 mg HP1188-IgY 治療組鼠胃內(nèi)的H.pylori清除率僅為20%，而1 mg HP1188-IgY+ 30% 硫糖鋁清除率提高到60%，與郭麗媛等[10]的研究結(jié)論相一致。在本實驗中還發(fā)現(xiàn)HP1188-IgY 配合硫糖鋁口服，連續(xù)應(yīng)用10 d，能使小鼠胃內(nèi)H.pylori的數(shù)量明顯減少，H.pylori清除率可達(dá)到60%～70%，并且能減輕H.pylori造成的小鼠胃組織的局部慢性炎癥反應(yīng)，使炎癥細(xì)胞浸潤減少。本實驗提示口服HP1188-IgY 具有較好的體內(nèi)抗感染作用，由于其作用對象直接準(zhǔn)確，細(xì)菌不會產(chǎn)生抗藥性，有望成為防治H.pylori感染的口服免疫治療生物制劑。在進(jìn)一步的研究中我們將如何提高HP1188-IgY 效價、口服后在胃內(nèi)活性的保持等方面作探索。

Figure 3.H.pylori colonization (Giemsa staining, ×1 000) and inflammation (HE staining, ×400) from gastric mucosa of treatment groups.3.1～3.2: PBS; 3.3～3.4: antibiotics; 3.5～3.6: 1 mg HP1188-IgY plus 30% sucralfate; 3.7～3.8: 5 mg HP1188-IgY plus 30% sucralfate.

表4 各組小鼠感染H.pylori 情況及胃黏膜炎癥程度評分

*P<0.05vsgroup 6.

[1] 謝 勇，龔燕鋒，周南進(jìn)，等. 以殼聚糖為佐劑的Hp疫苗誘導(dǎo)的體液免疫應(yīng)答及其免疫保護(hù)效應(yīng)[J]. 中國病理生理雜志, 2007, 23(3):438-443.

[2] 周俊偉.幽門螺桿菌感染與胃癌的相關(guān)性[J].中華醫(yī)院感染學(xué)雜志, 2012, 22(21):4799-4800.

[3] Rubinsztein-Dunlop S, Guy B, Lissolo L, et al. Identification of two newHelicobacterpylorisurface proteins involved in attachment to epithelial cell lines[J]. J Med Microbiol, 2005, 54(Pt 5):427-434.

[4] 許健波，朱以軍，單小云. 幽門螺桿菌臨床分離株的耐藥性分析[J]. 中華醫(yī)院感染學(xué)雜志, 2013, 23(10):2507-2508.

[5] 朱思思，趙肅清，李月明，等. 抗腸道病毒71型特異性卵黃抗體的制備及鑒定[J]. 中國免疫學(xué)雜志, 2011, 27(10):913-916, 921.

[6] Yang YH, Park D, Yang G, et al. Anti-Helicobacterpylorieffects of IgY from egg york of immunized hens[J]. Lab Anim Res, 2012, 28(1):55-60.

[7] Tarnawski A, Ahluwalia A, Jones MK. Gastric cytoprotection beyond prostaglandins: cellular and molecular mechanisms of gastroprotective and ulcer healing actions of anta-cids[J]. Curr Pharm Des, 2013, 19(1):126-132.

[8] 韓 飛，楊致邦，王長本，等. 抗幽門螺桿菌HP1188 蛋黃抗體的研究[J].國際檢驗醫(yī)學(xué)雜志, 2013, 34(4):390-392.

[9] 夏麗君，楊致邦，黃 偉，等. HpaA-VacA IgY 對小鼠胃內(nèi)感染幽門螺桿菌的預(yù)防作用[J]. 中國生物制品學(xué)雜志, 2011, 24(1):34-36.

[10]郭麗媛，吳金英，黃 偉，等. 硫糖鋁對幽門螺桿菌VacA IgY的保護(hù)作用的動物實驗評價[J]. 中國微生態(tài)學(xué)雜志, 2010, 22(11):988-992.

[11]鄭力搏，張曉嵐. 質(zhì)子泵抑制劑預(yù)防非甾體類抗炎藥相關(guān)性胃病的研究進(jìn)展[J]. 中國病理生理雜志, 2010, 26(11):2274-2278, 2283.

[12]馬學(xué)軍，舒躍龍，顏子穎，等. 精編分子生物學(xué)實驗指南[M].第4版.北京:科學(xué)出版社, 1998：22-435.

[13]Malekshahi ZV, Gargari SL, Rasooli I, et al. Treatment ofHelicobacterpyloriinfection in mice with oral administration of egg yolk-driven anti-UreC immunoglobulin[J]. Microb Pathog, 2011, 51(5):366-372.

胃腺癌的詳細(xì)分子特征鑒定

胃癌是癌癥死亡的主要原因之一，但其分子和臨床特征的分析由于組織學(xué)和病原學(xué)的異質(zhì)性而變得錯綜復(fù)雜。作為癌癥基因組圖集(The Cancer Genome Atlas, TCGA)計劃的一部分，科學(xué)家們對295位原發(fā)性胃腺癌患者進(jìn)行了詳細(xì)的分子鑒定。他們提出一種分子分類方法，將胃癌分為四種亞型：(1) EB病毒陽性型腫瘤，其分子特征表現(xiàn)為周期性的PIK3CA基因突變、極度DNA甲基化，以及JAK2、CD274(又稱PD-L1)和PDCDILG2(又稱PD-L2)基因擴(kuò)增；(2) 微衛(wèi)星不穩(wěn)定型腫瘤，顯示出較高的基因突變率，其中包括編碼靶向致癌信號蛋白的基因突變；(3) 基因組穩(wěn)定型腫瘤，富含廣泛的組織學(xué)變異和RHOA基因突變，或者是涉及與RHO家族GTP酶活性蛋白的融合；(4) 染色體不穩(wěn)定型腫瘤，表現(xiàn)出顯著的非整倍體和酪氨酸激酶受體的局部擴(kuò)增。胃癌亞型鑒定為胃癌患者分期和實驗性靶向治療指明了方向。

Nature, 2014, 513(7517):202-209(周 晗)

Treatment ofHelicobacterpylori-infected gastritis in BALB/c mice by HP1188-IgY

HAN Fei1, YANG Zhi-bang2, LI Jian-ying1, ZHOU Zheng1, PENG Fang-yi3,4, JIANG Hai-rong3, DU Hong-xin1

(1DepartmentofMedicalLaboratory,ChongqingThreeGorgesCentralHospital,Chongqing404100,China;2DepartmentofPathogenBiology,SchoolofBasicMedicine,ChongqingMedicalUniversity,Chongqing400016,China;3PharmaceuticalEngineeringSpecialty,SchoolofPharmacyandBioengineering,ChongqingUniversityofTechnology,Chongqing400054,China;4DepartmentofScienceandEducation,JiangjinCentralHospital,Chongqing402260,China.E-mail:hanfei2006@126.com)

AIM: To evaluate the effects of treatment with HP1188-immunoglobulin yolk (HP1188-IgY) on Helicobacter pylori (H.pylori)-infected gastritis in BALB/c mice. METHODS: BALB/c mice were used to establish an animal model ofH.pylori-infected gastritis, and the mice were divided into 8 groups (10 mice per group). Oral antibiotics were used in group 1, 1 mg HP1188-IgY in group 2, 1 mg HP1188-IgY plus 30% sucralfate in group 3, 5 mg HP1188-IgY in group 4, 5 mg HP1188-IgY plus 30% sucralfate in group 5, PBS in group 6, and 30% sucralfate in group 7 with the treatment once per day for 10 d; and 2.5 mg HP1188-IgY was injected hypodermically twice with a 48-h interval in group 8. Another 10 mice were used as normal control in group 9. The planting of bacteria in the stomach was assayed by bacterial culture, rapid urease test, PCR and pathological sectioning. RESULTS: Intragastric administration with 1 mg HP1188-IgY plus 30% sucralfate per day effectively cured the injury of gastric mucosa caused byH.pyloriinfection, and the effect has no significant difference compared with antibiotics (P>0.05). CONCLUSION: We establish a BALB/c mouse model infected withH.pylorisuccessfully. Sucralfate (30%) is an ideal protectant for HP1188-IgY, which might decreaseH.pyloriinfection in the stomach of BALB/c mice by oral inoculation.

Helicobacterpylori; HP1188-immunoglobulin yolk; Sucralfate

1000- 4718(2015)01- 0148- 06

2014- 05- 21

2014- 07- 21

重慶市萬州區(qū)科委重點科技計劃(No.201203006)

△通訊作者 Tel: 023-58103187； E-mail: hanfei2006@126.com

R378.99

A

10.3969/j.issn.1000- 4718.2015.01.028