周繼春，魏偉峰，劉方洲

(1.河南省食品藥品檢驗(yàn)所， 河南 鄭州 450003；2.河南省中醫(yī)藥研究院，河南 鄭州 450004)

補(bǔ)腎調(diào)經(jīng)中藥復(fù)方對(duì)排卵障礙模型大鼠NE、 FSH及E2的調(diào)節(jié)作用*

周繼春1，魏偉峰2，劉方洲2

(1.河南省食品藥品檢驗(yàn)所， 河南 鄭州 450003；2.河南省中醫(yī)藥研究院，河南 鄭州 450004)

目的：觀察補(bǔ)腎調(diào)經(jīng)中藥復(fù)方對(duì)排卵障礙模型大鼠的治療作用，探索補(bǔ)腎法調(diào)節(jié)下丘腦-垂體促性腺功能、促生長(zhǎng)的作用機(jī)制。方法：以排卵障礙模型大鼠為研究對(duì)象，將同一批次清潔級(jí)SD雌性成年大鼠80只隨機(jī)分為正常對(duì)照組、模型對(duì)照組、補(bǔ)腎調(diào)經(jīng)高劑量組、補(bǔ)腎調(diào)經(jīng)低劑量組4組。雄激素致排卵障礙大鼠模型參照俞瑾等方法[1]建立，灌胃給藥5周后，采用放免法檢測(cè)血中雌二醇(E2)、卵泡刺激素(FSH)水平，用熒光分析法測(cè)定下丘腦去甲腎上腺素(NE)含量。結(jié)果：補(bǔ)腎調(diào)經(jīng)中藥復(fù)方能增加血清中的E2含量(P<0.05)、FSH含量(P<0.05)，提高排卵障礙大鼠動(dòng)情前期下丘腦內(nèi)NE水平(P<0.01)。結(jié)論：補(bǔ)腎調(diào)經(jīng)中藥復(fù)方可能是通過NE調(diào)節(jié)GnRH的時(shí)相，使腦片GnRH釋放增加，從而使卵巢周期中排卵前LH分泌峰出現(xiàn)，促進(jìn)排卵。

不孕癥；補(bǔ)腎調(diào)經(jīng)中藥復(fù)方/藥效學(xué)；排卵障礙模型/藥物作用；大鼠；雌二醇；下丘腦

中醫(yī)認(rèn)為不孕癥的發(fā)生與腎-天癸-沖任-胞宮生殖軸密切相關(guān)。腎主生殖藏精。腎氣旺盛，腎精充實(shí)，氣血調(diào)和，則任通沖盛，經(jīng)調(diào)子嗣。腎在月經(jīng)產(chǎn)生及調(diào)節(jié)女性生殖方面有重要作用，治療女性不孕癥的重點(diǎn)就在于補(bǔ)腎、調(diào)理氣血和月經(jīng)，因此，補(bǔ)腎化瘀、養(yǎng)血調(diào)經(jīng)是婦科治療無排卵性疾病的常用治法。下丘腦-垂體-卵巢軸互相調(diào)節(jié)促使婦女正常排卵[1]。去甲腎上腺素(NE)可能控制下丘腦基底部和視前區(qū)的GnRH神經(jīng)元活動(dòng)，調(diào)節(jié)GnRH的時(shí)相，使排卵前LH分泌高峰出現(xiàn)，最后導(dǎo)致排卵[2]。因此,本研究通過檢測(cè)血清中卵泡刺激素(FSH )、雌二醇(E2)含量及下丘腦部位去甲腎上腺素(NE)含量的變化探討補(bǔ)腎調(diào)經(jīng)中藥復(fù)方的調(diào)節(jié)作用。

1 材料與方法

1.1 動(dòng) 物

出生9日齡SD雌性大鼠80只，體質(zhì)量15 g，由河南省動(dòng)物實(shí)驗(yàn)提供，合格證號(hào)為11400700042310。

1.2 藥品、試劑與儀器

補(bǔ)腎調(diào)經(jīng)中藥由當(dāng)歸、熟地黃各14 g，川芎10 g，香附 10 g， 淫羊藿、菟絲子、淫羊藿、枸杞子各30 g ，甘草 5 g組成。中藥材由河南中醫(yī)學(xué)院第三附屬醫(yī)院中藥房提供，由河南省中醫(yī)藥研究院藥理實(shí)驗(yàn)室制備，批號(hào)20140316；再配制成5.5 g生藥/mL和2.8 g生藥/mL兩種質(zhì)量分?jǐn)?shù)的藥液， 4 ℃冰箱，密封保存。丙酸睪丸酮注射液，天津金耀氨基酸有限公司產(chǎn)品，批號(hào)0303232；E2放射免疫分析藥盒，由北京尚柏生物科技有限公司提供，批號(hào)20131020；促卵泡生成素放射免疫分析藥盒，由北京尚柏生物科技有限公司提供，批號(hào)20130224。20PR-52D型離心機(jī)， 日立公司產(chǎn)品；GC-1200V型放免分析儀，科大創(chuàng)新有限公司產(chǎn)品。

1.3 分組、模型的建立與給藥

將大鼠隨機(jī)分成正常對(duì)照組、模型對(duì)照組、補(bǔ)腎高劑量組、補(bǔ)腎低劑量組4組，每組20只。參照文獻(xiàn)方法[3]造模,從大鼠出生第9天開始，除正常對(duì)照組外，其他3組頸背部皮下注射丙酸睪丸酮注射液1.25 mg/只(0.05 mL/只)；正常對(duì)照組不做特殊處理。自第70天，連續(xù)陰道涂片兩個(gè)性周期(一個(gè)性周期是5 d)，觀察陰道上皮細(xì)胞變化。以陰道上皮無性周期變化為造模成功。第80天起，補(bǔ)腎高、低劑量組分別給予補(bǔ)腎調(diào)經(jīng)中藥5.5，2.8g/mL，相當(dāng)于臨床劑量的20，10倍；模型對(duì)照組和正常對(duì)照組灌服蒸餾水10 μL/g體質(zhì)量，連續(xù)灌胃35 d。

1.4 檢測(cè)指標(biāo)

灌胃結(jié)束前10天開始進(jìn)行陰道脫落細(xì)胞涂片，在顯微鏡下判斷大鼠性周期，連續(xù)兩個(gè)性周期。選擇相同動(dòng)情周期(動(dòng)情后期)，最后一次給藥后禁食8 h，股動(dòng)脈取血并斷頭處死。無菌操作下，在冰盤上迅速開顱，切取下丘腦，用熒光分析法測(cè)定NE水平。取出的血樣在室溫下靜置2 h，以3 000 r/min轉(zhuǎn)速離心10 min，取上清液，用放射免疫法測(cè)定血清中E2和FSH水平。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié) 果

與模型對(duì)照組對(duì)比，補(bǔ)腎調(diào)經(jīng)高、低劑量組下丘腦NE 水平均增高，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。大鼠E2水平補(bǔ)腎調(diào)經(jīng)高劑量組和補(bǔ)腎低劑量組比模型對(duì)照組有顯著提高P<0.05)。大鼠FSH水平補(bǔ)腎調(diào)經(jīng)高劑量組和低劑量組比模型對(duì)照組有顯著提高(P<0.05)。見表1。

分 組nNE/(ng·g-1)E2/(ng·L-1)FSH/(μg·L-1)正常對(duì)照組202.26±0.39**49.43±6.42**2.08±0.22**模型對(duì)照組201.20±0.3932.20±5.201.18±0.28補(bǔ)腎調(diào)經(jīng)低劑量組201.48±0.34*36.12±5.71*1.39±0.25*補(bǔ)腎調(diào)經(jīng)高劑量組201.51±0.36*37.17±7.02*1.43±0.29*

注：與模型對(duì)照組對(duì)比，*P<0.05， **P<0.01。

3 討 論

腎藏精，主生殖，為先天之本，元?dú)庵?，在機(jī)體的整個(gè)生命活動(dòng)中起到主導(dǎo)作用。腎精又被稱為元精、元陰，為胚胎發(fā)育的原始物質(zhì)，并能促進(jìn)生殖功能的成熟。腎中精氣充盈到一定程度時(shí)可產(chǎn)生具有促進(jìn)人體生殖器官成熟并維持生殖功能的物質(zhì)。天癸是人體腎中精氣充盈到一定年齡階段時(shí)產(chǎn)生的一種精微物質(zhì)，古人謂之“無形之水”，能促使女子任脈通，太沖脈盛，月經(jīng)按時(shí)來潮，可以懷孕；能促使男子精氣溢瀉，有正常的生殖功能。由此可見,天癸與現(xiàn)代醫(yī)學(xué)所指的調(diào)節(jié)生殖功能的神經(jīng)內(nèi)分泌激素相類似[4]。腎-天癸-沖任-胞宮與下丘腦-垂體-卵巢-子宮軸的功能類似。腎精的先天不足或者后天虧損，沖任空虛，胞失濡養(yǎng)，可導(dǎo)致月經(jīng)后期、閉經(jīng)、不孕等[5]。

去甲腎上腺素能系統(tǒng)是下丘腦GnRH釋放和垂體LH分泌的重要激活因素，NE可調(diào)節(jié)下丘腦基底部和視前區(qū)的GnRH神經(jīng)元活動(dòng)，調(diào)節(jié)GnRH的時(shí)相，使腦片GnRH釋放增加，從而使卵巢周期中排卵前LH分泌峰出現(xiàn)，最后導(dǎo)致排卵[6]。E2參與卵泡發(fā)育的各個(gè)環(huán)節(jié)的調(diào)節(jié)，能刺激顆粒細(xì)胞的有絲分裂，促進(jìn)顆粒細(xì)胞的增殖。近年來研究發(fā)現(xiàn)：E2可以明顯抑制卵巢顆粒細(xì)胞的凋亡，減緩卵泡的閉鎖，促進(jìn)卵泡的生長(zhǎng)、發(fā)育及排出[7]?，F(xiàn)代藥理研究認(rèn)為：補(bǔ)腎藥能提高垂體對(duì)下丘腦的反應(yīng)，促進(jìn)卵泡發(fā)育成熟。FSH是由垂體細(xì)胞合成和分泌的促性腺激素，能直接和卵巢上的受體結(jié)合，促進(jìn)卵泡的發(fā)育和排卵。無FSH則卵泡發(fā)育不能超過竇生長(zhǎng)階段，卵泡不發(fā)育，E2水平低，生殖器官的生長(zhǎng)和促性腺激素受負(fù)反饋影響[8]。在接近排卵時(shí)，F(xiàn)SH刺激顆粒細(xì)胞蛋白溶解酶原活化因子，在其作用下卵泡排出。研究表明：導(dǎo)致FSH水平下降的原因是E2，隨著卵泡發(fā)育顆粒細(xì)胞產(chǎn)生大量的E2，通過負(fù)反饋抑制垂體的FSH分泌[9]。在本研究中，補(bǔ)腎調(diào)經(jīng)中藥復(fù)方對(duì)排卵障礙模型大鼠的NE 、FSH及E2水平有明顯升高作用，從而調(diào)節(jié)GnRH的時(shí)相，使腦片GnRH釋放增加，從而使卵巢周期中排卵前LH分泌峰出現(xiàn)，并能直接作用于垂體，提高大鼠生殖內(nèi)分泌功能，促進(jìn)卵泡發(fā)育和排卵。

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(編輯 陶 珠)

1001-6910(2015)07-0051-03 ·實(shí)驗(yàn)研究·

R22

B

10.3969/j.issn.1001-6910.2015.07.26

河南省基礎(chǔ)與前沿(132300310281)

2014-12-01；

2015-05-14