王治秀

(黑龍江省穆棱市畜牧獸醫(yī)局,黑龍江穆棱 157500)

鴨病毒性肝炎的診斷及防制措施

王治秀

(黑龍江省穆棱市畜牧獸醫(yī)局,黑龍江穆棱 157500)

鴨病毒性肝炎是由鴨肝炎病毒所引起的雛鴨的一種急性、高度致死性的傳染病。其特征是發(fā)病急,傳播迅速,病程短和死亡率高。其臨診癥狀特點為角弓反張,病理變化特征為肝臟腫大和出血性斑點。

鴨病毒性肝炎;診斷;防制措施

1 流行病學

本病主要侵害5周齡以內，尤其是2周齡以內的雛鴨，常突然發(fā)病，傳播迅速，病程短而病死率高，一般為10～60%，在新疫區(qū)高達90%以上。本病一年四季都有發(fā)生，但多數在冬季和早春爆發(fā)。在自然情況下，雛鴨是本病毒天然易感動物，成年鴨是本病毒的帶毒者，雞和火雞在自然情況下一般不被感染。雛鴨病毒性肝炎的傳播，主要是通過與病鴨的直接接觸，糞便、食具、墊料和車輛等都可能傳播此病，甚至人也有可能成為病毒攜帶者，但不能通過鴨蛋垂直傳播。在飼養(yǎng)中由于管理不良、維生素和礦物質缺乏、鴨舍潮濕、鴨群擁擠等，均可促進本病的發(fā)生。

2 臨診癥狀

本病的潛伏期短（一般為2～4d），發(fā)病突然，病程進展迅速。起初病鴨呈現呆滯、厭食、縮頸、垂翅、離群、眼半閉呈昏迷狀態(tài)，有時出現腹瀉，發(fā)病半日至一日即出現特異性神經癥狀。病鴨全身抽搐，身體傾向一側，仰脖，頭彎向背部。死時大多頭向背仰，呈角弓反張姿態(tài)，故本病俗虧“背脖病”，這是本病死亡時的典型特征。

3 病理變化

主要病變在肝臟和膽囊。肝腫大、質脆，表面有大小不等的出血斑點，肝臟顏色變淡，表面斑駁；膽囊腫脹并充滿膽汁，膽汁呈褐色、淡茶色或淡綠色；脾腫大呈斑駁狀；多數病例可見腎臟腫大并充血，呈灰紅色，血管明顯呈暗紫色樹枝狀。有的病鴨出現脂肪腎綜合征和胰腺局部壞死的。

4 實驗室檢驗

鴨病毒性肝炎檢疫的檢驗方法有雞（鴨）胚中和試驗、微量血清中和試驗。微量血清中和試驗是應用固定病毒稀釋血清的方法，在單層鴨肝細胞上進行中和試驗，用于鴨病毒性肝炎中和抗體測定。

（1）器材準備：用具為24孔或96孔平底帶蓋塑料培養(yǎng)板。剪刀、鑷子、平皿、燒杯、注射器等經120℃高壓滅菌后烘干備用?？乖区啿《拘愿窝撞《荆ㄈ醵荆?，標準陰、陽性血清由指定單位提供。選用14～16日齡鴨胚。平衡鹽溶液：按常規(guī)方法配制。胰酶消化液：用無鈣無鎂平衡鹽溶液配制成0.0625%胰酶溶液，濾菌后分裝，存放于－20℃?zhèn)溆?。細胞培養(yǎng)液：199培養(yǎng)液加入20%犢牛血清和1%抗菌素溶液。細胞維持液：以199培養(yǎng)液加入1%抗菌素溶液配成。抗菌素溶液：選用慶大霉素，用滅菌的雙蒸水配制成1萬單位/ml，4℃保存。

（2）實驗方法：①鴨胚肝細胞的制備。用碘酒和酒精消毒蛋殼表面，打開氣室，取出鴨胚肝臟（除去膽囊），放在燒杯里，用平衡鹽溶液沖洗三次，剪碎，再用該液沖洗三次（除去血液）。加入5～10倍于組織碎塊量的胰酶消化液，37℃水浴消化20min，吸去胰酶消化液。加入細胞培養(yǎng)液清洗2次，輕輕吹打，直到肉眼看不見組織碎塊為止。移入刻度離心管，以500轉/min離心1min，取沉淀物，用細胞培養(yǎng)液按1：400～600的比例稀釋，加入培養(yǎng)板內，每孔0.8～1ml，加蓋后置含有5%二氧化碳培養(yǎng)箱37℃培養(yǎng)。48h后在倒置顯微鏡下觀察，培養(yǎng)板內長成細胞單層，可供試驗。②鴨病毒性肝炎病毒毒價的測定。用維持液將病毒進行10－3～10－7的10倍系列稀釋（每一個稀釋度換一支吸管）。吸去長有單層細胞的培養(yǎng)板內細胞培養(yǎng)液。培養(yǎng)板縱向每4孔為一列，每列分別加入1個稀釋度的病毒液0.1ml/孔，每孔補加細胞維持液0.9ml。設正常細胞對照。置含有5%二氧化碳培養(yǎng)箱37℃培養(yǎng)，48～72h記錄細胞病變（CPE）情況。根據Reed-Muench的方法計算病毒的組織細胞培養(yǎng)半數感染量，配制每0.1ml含100個組織組胞培養(yǎng)半數感染量的病毒液。③中和試驗。先在第一板（不含有細胞的培養(yǎng)板）上，加維持液0.1ml/孔。于每排第一孔分別加入被檢血清0.1ml/孔（每份血清做2排），混合后吸0.1ml加入第二孔，如此依次由左至右進行1：2～1：32倍連續(xù)稀釋至第六孔（每一個稀釋度換一支吸管）；棄去最后1孔混合液0.1ml。每個血清稀釋孔加入0.1ml病毒液（100個組織細胞培養(yǎng)半數感染量/ml），加蓋后置37℃培養(yǎng)箱中30～60min。再用第二板（長有單層細胞的培養(yǎng)板），吸去培養(yǎng)液后將前一板各孔的血清病毒中和液全部移入第二板相應各孔，然后每孔補加維持液0.8ml。同時設置病毒回歸試驗。加蓋后置5%二氧化碳培養(yǎng)箱中37℃培養(yǎng)，48～72h后在倒置顯微鏡下觀察，判定結果。④病毒回歸試驗。將配好的100個組織細胞培養(yǎng)半數感染量的病毒液作10倍梯度稀釋至10－1～10－3；于第二板上每一列（4孔）加入1個稀釋度的病毒液0.1ml/孔，每孔補加維持液0.9ml。

（3）結果判定：當細胞對照正常；陰性血清對照在1：2以上的各孔細胞都出現細胞病變；陽性血清對照誤差在原效價±1個對數值以內；病毒回歸的毒價應再現原有的毒價，或誤差在原效價±0.5的對數值以內，本試驗有效。陽性反應：被檢血清稀釋度在1：4及以上的兩個細胞孔都沒有出現細胞病變；可疑反應：被檢血清稀釋度在1：4有一個孔的細胞出現細胞病變；陰性反應：被檢血清稀釋度在1：2以上的各孔細胞都出現細胞病變。

5 防制措施

目前尚未證實本病可以經蛋傳播。本病的爆發(fā)多系從疫區(qū)購進帶毒雛鴨而致其他敏感雛鴨發(fā)病，也有的是由于孵化房污染所致，因此不從疫區(qū)購進雛鴨，孵化房堅持經常消毒是控制本病的前提條件。免疫預防目前主要采用雞胚化弱毒苗或鴨瘟-鴨病毒性肝炎二聯弱毒疫苗接種，雛鴨出殼后每羽0.3～0.5ml肌肉或皮下注射。一旦發(fā)病可采用高免血清（或卵黃）或康復血清作緊急預防，平時采取嚴格的綜合防制措施是必要的。

[1] 陳建紅，辛朝安，張洛培，等.鴨病毒性肝炎診斷與防制要點[J].中國家禽，2000，（11）：37-39.

王治秀（1977—），女，大學本科，副高級獸醫(yī)師，研究方向為動物常見病臨床診治。