宋忠旭　雷　彬　李良華　孫　華　彭先文　梅書(shū)棋李明波　劉貴生

湖北省農(nóng)業(yè)科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所，武漢430064

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膠體金免疫層析試紙條與ELISA檢測(cè)豬瘟抗體的比對(duì)試驗(yàn)

宋忠旭雷彬李良華孫華彭先文梅書(shū)棋*李明波劉貴生

湖北省農(nóng)業(yè)科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所，武漢430064

摘要膠體金免疫層析試紙條檢測(cè)豬瘟抗體陽(yáng)性檢出率94.69%，ELISA法檢測(cè)豬瘟抗體合格率95.58%，兩者符合率為99.07%；膠體金免疫層析試紙條強(qiáng)陽(yáng)性率為86.73%，ELISA檢測(cè)豬瘟抗體阻斷率≥60%為89.38%，檢測(cè)線顯色強(qiáng)度與抗體水平呈正相關(guān)。

關(guān)鍵詞豬瘟；膠體金免疫層析試紙條；ELISA；抗體比對(duì)

古典豬瘟（classical swine fever，CSF）早稱“豬瘟”（hog cholera，HC），是一種高度接觸性傳染病，遍布于全世界，世界動(dòng)物衛(wèi)生組織（OIE）將此病列為A類傳染病之一[1]。

為了從根本上解決豬瘟對(duì)養(yǎng)豬業(yè)的危害，我國(guó)開(kāi)展了豬瘟等動(dòng)物疫病凈化的研究和實(shí)踐工作，目前，ELISA、PCR、熒光法等常規(guī)的檢測(cè)豬瘟抗原（或抗體）方法需要必要的儀器設(shè)備和試劑，費(fèi)時(shí)費(fèi)力，在基層獸醫(yī)部門(mén)由于不具備工作條件和技術(shù)力量，很難開(kāi)展[2]。

膠體金免疫層析試紙條是利用抗原抗體反應(yīng)，在試紙條硝酸纖維素膜上預(yù)先固定好特異性抗原（或抗體）和第二抗體2種捕獲劑，分別作為檢測(cè)線（Test line）和質(zhì)控線（Control line）[3]。以豬瘟病毒特異性抗原融合膠體金與膜免疫層析技術(shù)，檢測(cè)豬血清中豬瘟抗體，檢測(cè)樣品順加樣孔上移，血清中的豬瘟抗體與金標(biāo)抗原結(jié)合，形成的抗原-抗體-膠體金復(fù)合物被檢測(cè)線攔截，呈現(xiàn)紅色檢測(cè)線（T），質(zhì)控線攔截金標(biāo)抗原后呈現(xiàn)紅色質(zhì)控線（C）；當(dāng)被檢血清中不含豬瘟特異抗體時(shí)，檢測(cè)線不顯色，只呈現(xiàn)紅色質(zhì)控線?，F(xiàn)將膠體金免疫層析試紙條與ELISA法檢測(cè)豬瘟抗體的比對(duì)試驗(yàn)結(jié)果報(bào)告如下。

1　材料與方法

1.1血清樣本的采集

抽樣113頭，免疫豬瘟疫苗6周后的成年種豬，前腔靜脈采血，血液離心，將同1頭豬的血清分成2份，1份用于膠體金免疫層析試紙條檢測(cè)豬瘟抗體，另1份用于ELISA法檢測(cè)豬瘟抗體。

1.2膠體金免疫層析試紙條檢測(cè)豬瘟抗體

1）膠體金免疫層析試紙條由河南省農(nóng)業(yè)科學(xué)院動(dòng)物免疫學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室提供，密封、干燥、4℃保存。

2）將冷藏的試紙條從冰箱中取出，待其恢復(fù)至室溫再打開(kāi)密封使用。

3）根據(jù)已編號(hào)的待檢血清樣品份數(shù)取出稀釋杯，每杯加入200 μL（約7滴）的稀釋液，取1 μL的待檢樣品加入對(duì)應(yīng)的稀釋杯中混勻，1∶200稀釋樣品，取出試紙卡編號(hào)、平放，取稀釋好的樣品溶液100 μL（約4滴）加入相應(yīng)的試紙卡樣品中，靜置5～10 min后觀察結(jié)果。

4）結(jié)果判定。對(duì)照樣品：陽(yáng)性對(duì)照應(yīng)出現(xiàn)2條紅線（檢測(cè)線和質(zhì)控線），檢測(cè)線強(qiáng)于質(zhì)控線；陰性對(duì)照檢測(cè)線明顯弱于質(zhì)控線。

被檢樣品：視窗區(qū)出現(xiàn)兩條紅色線（檢測(cè)線和質(zhì)控線），檢測(cè)線明顯強(qiáng)于質(zhì)控線時(shí)判為強(qiáng)陽(yáng)性，可記為“+++”；檢測(cè)線與質(zhì)控線顯色強(qiáng)度相當(dāng)時(shí)判為陽(yáng)性，可記為“+”；檢測(cè)線明顯弱于質(zhì)控線，或只出現(xiàn)一條紅色質(zhì)控線時(shí)判為陰性，可記為“-”；質(zhì)控線不顯紅色時(shí)，表示操作有誤或試紙失效。

1.3 ELISA檢測(cè)豬瘟抗體

將用于ELISA檢測(cè)的血清，冷藏送至華中農(nóng)業(yè)大學(xué)，用IDEXX公司CSFV- Ab- ELISA試劑盒進(jìn)行檢測(cè)，依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)為GB/T 16551- 2008，阻斷率≥40%判定為陽(yáng)性，表示抗體合格；阻斷率﹤40%判定為陰性，表示抗體不合格。

2　結(jié)果

1）膠體金免疫層析試紙條檢測(cè)豬瘟抗體陽(yáng)性檢出率94.69%，ELISA法檢測(cè)豬瘟抗體合格率95.58%，結(jié)果如表1。

2）試紙條強(qiáng)陽(yáng)性率為86.73%，ELISA阻斷率≥60%為89.38%，結(jié)果如表2。

表1　 ELISA法檢測(cè)豬瘟抗體結(jié)果

表2　試紙條強(qiáng)陽(yáng)性率

3　討論

1）膠體金免疫層析試紙條檢測(cè)豬瘟抗體陽(yáng)性檢出率94.69%，ELISA法檢測(cè)豬瘟抗體合格率95.58%，ELISA法比膠體金免疫層析試紙條檢測(cè)豬瘟抗體靈敏，與金顏輝等的結(jié)果一致[4]，兩者符合率為99.07%，膠體金免疫層析試紙條可以用于臨床檢測(cè)豬瘟抗體。

2）試紙條強(qiáng)陽(yáng)性率為86.73%，ELISA阻斷率≥60%為89.38%，檢測(cè)線顯色強(qiáng)度與抗體水平呈正相關(guān)。

3）檢測(cè)線強(qiáng)于或等于質(zhì)控線即為陽(yáng)性；檢測(cè)線明顯弱于質(zhì)控線，或只出現(xiàn)一條紅色質(zhì)控線即為陰性，通過(guò)比色方法肉眼判定檢測(cè)結(jié)果，5～10 min后觀察結(jié)果，試紙條可以在溫度4～30℃的條件保存，可以在工作條件和技術(shù)力量較差的基層獸醫(yī)部門(mén)開(kāi)展，無(wú)需苛刻的應(yīng)用條件。

4）產(chǎn)品包含試紙條、樣品稀釋液、稀釋杯、滴管、陽(yáng)性對(duì)照和陰性對(duì)照，操作簡(jiǎn)便。

4　結(jié)　論

膠體金免疫層析試紙條檢測(cè)豬瘟抗體具有簡(jiǎn)便、快速、敏感、特異等優(yōu)點(diǎn)，可以用于豬血清中豬瘟抗體的定性檢測(cè)。

參考文獻(xiàn)

[1]斯特勞（Straw B E）等.豬病學(xué)[M].9版.北京：中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)出版社，2008：325- 335.

[2]楊明，陳伯祥，孫曉林，等.豬瘟膠體金快速診斷試紙條的研制[J].甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，2010，45（2）：34- 37.

[3]黃芬，葉紹輝，龔振明.免疫層析快速診斷試紙條的制備及其應(yīng)用[J].當(dāng)代畜牧，2006（8）：20- 22.

[4]金顏輝，黃印堯，張長(zhǎng)弓，等.應(yīng)用金免疫層析技術(shù)檢測(cè)豬瘟抗體的研究[J].中國(guó)動(dòng)物檢疫，2004，21（5）：26- 27.

*通訊作者宋忠旭，男，1969年生，高級(jí)畜牧師，研究方向：豬育種及生產(chǎn)管理。

基金項(xiàng)目：國(guó)家科技支撐計(jì)劃項(xiàng)目（2011BAD28B01- 3）；國(guó)家生豬產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系項(xiàng)目（CARS- 36）；湖北省農(nóng)業(yè)科技創(chuàng)新中心創(chuàng)新團(tuán)隊(duì)項(xiàng)目（2011- 620- 001- 003）；湖北省重大人才工程高端人才引領(lǐng)培養(yǎng)計(jì)劃

收稿日期：2015- 08- 06