馬景蕃， 劉喜明， 吳 程

(1.龍巖學(xué)院生命科學(xué)學(xué)院，福建 龍巖 364012;2.福建省預(yù)防獸醫(yī)學(xué)與獸醫(yī)生物技術(shù)重點實驗室，福建 龍巖 364012;3.龍巖學(xué)院藝術(shù)與設(shè)計學(xué)院，福建 龍巖 364012)

不結(jié)球白菜(Brassica campestris ssp.chinensis Makino)是長江中下游地區(qū)主栽蔬菜品種之一，中醫(yī)認為不結(jié)球白菜微寒味甘，具有養(yǎng)胃生津、利尿通便、除煩解渴、清熱解毒的功效［1］。國內(nèi)外學(xué)者已從不結(jié)球白菜中分離到一系列復(fù)雜的化學(xué)成分，其中相當(dāng)一部分具有重要的生理活性［2］。日本科學(xué)家發(fā)現(xiàn)，不結(jié)球白菜提取物抗氧化銹蝕的效果很好，其中尤其是未完全成熟，葉形舒展的嫩株提取物抗氧化效果更好［3］。在美國國立癌癥研究所發(fā)表的防癌食品排行榜中，不結(jié)球白菜排在大蒜的后面，位列第二［4］。最新的研究還發(fā)現(xiàn)，不結(jié)球白菜提取物能提升血清中雌激素代謝物——2羥雌酮的水平，對預(yù)防乳腺癌有益處［5］。經(jīng)現(xiàn)代藥理學(xué)研究結(jié)果表明不結(jié)球白菜具有很好的免疫調(diào)節(jié)作用。Meyer等［6］報道，飼糧中添加不結(jié)球白菜提取物可提高小鼠血清抗氧化活性，龍盛京等［7］研究結(jié)果表明不結(jié)球白菜和百里香提取物可以提高雞肉和雞蛋的氧化穩(wěn)定性及更有效地延緩肉仔雞脂質(zhì)氧化。本試驗通過在日糧中添加不同比例的不結(jié)球白菜提取物(NCCE)，運用現(xiàn)代技術(shù)來研究其對肉雞生產(chǎn)性能、屠宰性能、免疫器官指數(shù)、血清免疫指標(biāo)及血清抗氧化水平的影響，旨在探討NCCE對AA肉雞免疫功能及抗氧化功能的影響，為NCCE添加劑在肉雞生產(chǎn)上應(yīng)用提供理論參考。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

同一批出雛，體質(zhì)健壯的1日齡AA肉仔雞240羽，購自森寶(龍巖)公司。

不結(jié)球白菜品種蘇州青由龍巖學(xué)院生物技術(shù)課題組提供，定植30 d后進行采收，用聚乙烯膜真空包裝后迅速于液氮中冷凍，經(jīng)真空冷凍干燥，粉碎過60目篩。稱取100 g粉末，用75%的乙醇500 ml超聲提取35 min，再進行回流提取3 h后抽濾，濾渣重復(fù)以上操作1次，合并2次的濾液。經(jīng)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮至近干，即為不結(jié)球白菜的粗提物。粗提物用蒸餾水溶解，得到水懸液，轉(zhuǎn)入500 ml分液漏斗中，用等體積乙酸乙酯萃取4次，合并萃取液，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮后真空冷凍干燥至恒質(zhì)量，即為不結(jié)球白菜提取物(NCCE)，主要組分為黃酮和多酚類等生物活性物質(zhì)［6］，將其置于4℃冰箱冷藏保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2 試驗動物分組處理與飼養(yǎng)管理

試驗用雞隨機分為4組，每組3個重復(fù)，每個重復(fù)20羽，試驗期35 d，4組雞飼養(yǎng)條件一致，均采用地面平養(yǎng)，自由采食及飲水，給24 h光照。對照組飼喂基礎(chǔ)日糧(玉米-豆粕型)，配制參照NRC 1994《家禽的營養(yǎng)需要量》，基礎(chǔ)日糧組成及營養(yǎng)水平見表1。試驗Ⅰ組、Ⅱ組、Ⅲ組為分別在基礎(chǔ)日糧中添加100 mg/kg、500 mg/kg、900 mg/kg的NCCE。按常規(guī)免疫程序?qū)λ性囼炿u進行免疫接種。

表1 基礎(chǔ)日糧組成及營養(yǎng)水平Table 1 Composition and nutrient levels of basal diets

1.3 測定指標(biāo)及檢測方法

1.3.1 生產(chǎn)性能的測定 分別在肉雞21、35日齡時，將每組肉雞個體空腹稱質(zhì)量，統(tǒng)計耗料量，計算各階段平均日增質(zhì)量及料肉比。

1.3.2 屠宰性能及免疫器官指數(shù)的測定 肉雞在35日齡時，每組隨機選取體質(zhì)量相近的健康雞9羽，早晨空腹12 h，稱質(zhì)量，采用頸外放血致死，分別測定其屠體質(zhì)量、全凈膛質(zhì)量、腹脂質(zhì)量和屠宰性能［8］，取胸腺、法氏囊及脾臟，剔出脂肪并用濾紙吸干血液后稱質(zhì)量，計算免疫器官指數(shù)，免疫器官指數(shù)(g/kg)=器官質(zhì)量/體質(zhì)量。

1.3.3 血清抗體和補體C3、C4的測定 肉雞在35日齡時，每組隨機選取體質(zhì)量相近的健康雞9羽，早晨空腹12 h，心臟采血，3 000 r/min離心10 min，取血清采用免疫比濁法測定抗體IgG、IgM、IgA及補體C3、C4，按試劑盒操作說明進行試驗，試驗試劑盒均購自南京建成生物有限公司。

1.3.4 血清抗氧化水平的測定 血清SOD活性采用黃嘌呤氧化物酶法測定，T-AOC采用比色法測定，GSH-Px采用二硫代二硝基苯甲酸法測定，MDA含量采用硫巴比妥酸法(TBA)測定。試劑盒均購自南京建成生物有限公司。

1.4 數(shù)據(jù)處理與統(tǒng)計分析

采用SPSS 19.0軟件One-way ANOVA方法進行統(tǒng)計分析，并采用LSD法多重比較。

2 結(jié)果與分析

2.1 不結(jié)球白菜提取物(NCCE)對肉雞生產(chǎn)性能的影響

由表2可知，在肉雞飼養(yǎng)前期(0～21 d)，各試驗組與對照間的日增質(zhì)量與料肉比差異均不顯著;但在飼養(yǎng)后期(22～35 d)，各試驗組與對照相比，日增質(zhì)量均有所提高，其中，試驗Ⅰ組和試驗Ⅱ組較對照分別提高了4.92%和7.88%，達到顯著性差異水平。飼養(yǎng)后期各試驗組與對照相比，料肉比均有所下降，其中，試驗Ⅱ組與對照相比，料肉比降低了9.92%，達到顯著性差異水平。

2.2 NCCE對肉雞屠宰性能的影響

由表3可知，各試驗組與對照相比，肉雞活質(zhì)量均有所增加，試驗Ⅰ組和試驗Ⅱ組較對照分別增加了3.23%和4.48%，達到顯著性差異水平;各試驗組與對照相比，肉雞的屠宰率均有所增加，但增加不顯著;各試驗組與對照相比，肉雞的全凈膛率均有所增加，其中，試驗Ⅲ組比對照增加了3.59%，達到顯著性差異水平;各試驗組與對照相比，肉雞的腹脂率均有所下降，試驗Ⅰ組、試驗Ⅱ組和試驗Ⅲ組較對照分別下降18.26%、21.58%和23.65%，達到顯著性差異水平。

表2 NCCE對肉雞日增質(zhì)量和料肉比的影響Table 2 Effects of NCCE on the growth performance and feed conversion of broilers

表3 NCCE對肉雞屠宰性能的影響Table 3 Effects of NCCE on slaughter performance of broilers

2.3 NCCE對肉雞免疫器官指數(shù)的影響

由表4可知，試驗Ⅰ組和試驗Ⅱ組與對照相比，肉雞的脾臟指數(shù)均有所增加，但增加不顯著;各試驗組與對照相比，法氏囊指數(shù)均顯著增加;各試驗組與對照相比，胸腺指數(shù)也有增加趨勢，其中試驗Ⅱ組和試驗Ⅲ與對照相比差異顯著。

2.4 NCCE對肉雞血清免疫指標(biāo)的影響

由表5可見，與對照組相比，試驗Ⅰ組和Ⅱ組均能不同程度地提高肉雞血清的免疫水平。其中血清IgG含量分別提高49.9%(P＜0.05)和63.8%(P＜0.05);血清IgM含量分別提高21.0%(P＞0.05)和68.0%(P＜0.05);血清IgA含量分別提高6.4%(P＞0.05)和0.4%(P＞0.05);血清補體C3含量分別提高0.2%(P＞0.05)和38.7%(P＜0.05);試驗Ⅰ組血清補體C4含量比對照提高27.2%(P＜0.05)，但試驗Ⅱ組和試驗Ⅲ組的含量呈下降趨勢;另外，試驗Ⅲ組的血清IgG、IgM和補體C3均呈下降趨勢，但與對照無顯著性差異。

表4 NCCE對肉雞免疫器官指數(shù)的影響Table 4 Effect of NCCE on immune organ index of broilers

2.5 NCCE對肉雞血清抗氧化水平的影響

由表6可以看出，對照肉雞血清SOD活性最低，試驗Ⅰ組次之，試驗Ⅱ組最高，試驗Ⅱ組比對照提高18.4%(P＜0.05)，對照、試驗Ⅰ組和試驗Ⅲ組的SOD活性無顯著差異;血清T-AOC活性Ⅱ組最高，對照最低，試驗Ⅱ組比對照提高了21.2%(P＜0.05)，添加NCCE各試驗組間差異不顯著(P＞0.05);添加NCCE各試驗組血清GSH-Px活性均高于對照(P＞0.05)，其中試驗Ⅱ組最高，比對照提高2.6%(P＞0.05);各試驗組肉雞血清MDA含量均低于對照，但無顯著差異。

表5 NCCE對肉雞血清免疫球蛋白及補體C3、C4的影響Table 5 Effects of NCCE on immunoglobulins，complements C3 and C4 in broilers sera

表6 NCCE對肉雞血清抗氧化水平的影響Table 6 Effects of NCCE on antioxidant levels in broilers sera

3 討論

3.1 NCCE對肉雞生產(chǎn)性能和屠宰性能的影響

試驗結(jié)果表明添加500 mg/kg的NCCE能顯著提高肉雞后期日增質(zhì)量和飼料轉(zhuǎn)化率，顯著增加肉雞活質(zhì)量，降低肉雞腹脂率。各試驗組與對照相比，肉雞的屠宰率有所增加，全凈膛率有所增加(P＜0.05)。可見NCCE對肉雞的產(chǎn)肉性能具有良好的促進作用，其機制可能與NCCE具有的廣泛生物學(xué)活性有關(guān)，NCCE含有黃酮及多酚類等活性物質(zhì)，Afolabi研究結(jié)果［9］表明，黃酮類物質(zhì)能明顯改變小鼠胃黏膜的損傷，對其具有保護作用;Yakubu等研究結(jié)果［10］表明，添加0.08%的十字花科植物西蘭花提取物(主要成分為黃酮及多酚類物質(zhì))對AA肉雞具有一定的促生長作用，這與本試驗的結(jié)果相類似?？梢娞砑覰CCE后，可能使肉雞的胃黏膜得到了保護，進而提高了營養(yǎng)物質(zhì)的消化率和肉雞的生長速度。

3.2 NCCE對肉雞免疫指標(biāo)的影響

免疫器官是動物有機體執(zhí)行免疫功能的組織，是淋巴細胞和其他免疫細胞發(fā)生、分化、增殖和產(chǎn)生免疫應(yīng)答的場所［11］。動物有機體免疫功能的強弱與免疫器官的發(fā)育有著密切的關(guān)系。本試驗結(jié)果表明，試驗組與對照相比能提高免疫器官指數(shù)，這說明NCCE可以有效提高肉雞免疫器官的發(fā)育，從而提高免疫器官指數(shù)，最終使機體的免疫力提高。Pattanaik等［12］報道，添加植物黃酮類物質(zhì)，可顯著提高肉雛雞免疫器官指數(shù)。Fasscas等［13］報道，植物多酚可增加正常小鼠和免疫抑制小鼠的脾臟和胸腺質(zhì)量?？梢姡唤Y(jié)球白菜活性提取物可以促進免疫器官的發(fā)育，抑制其細胞凋亡，提高機體抵抗力。

免疫球蛋白質(zhì)是執(zhí)行體液免疫，具有抗體活性的蛋白質(zhì)，是衡量動物有機體免疫功能的重要指標(biāo)［14］。本試驗結(jié)果表明，試驗組肉雞血清中IgG、IgM、IgA及補體C3、C4水平都有一定的提高，Milos等［15］通過研究五味子黃酮對小鼠免疫生成細胞的影響，發(fā)現(xiàn)五味子黃酮可使免疫球蛋白數(shù)量明顯增多;Sato等［16］報道黨參主要活性成分黨參多酚具有明顯的增強雛雞免疫功能的作用。NCCE可顯著提高肉雞血清中免疫球蛋白含量，從而使機體免疫力增強。本試驗高劑量組(試驗Ⅲ組)并未顯示顯著的促進作用甚至還有降低的趨勢，這可能與機體對NCCE的適應(yīng)性有關(guān)。

3.3 NCCE對肉雞血清抗氧化能力的影響

SOD、GSH-Px是防御體系中清除H2O2的主要物質(zhì)［17］，血清中SOD、GSH-Px活力間接反映了動物有機體清除自由基的能力，其活性越高，越有利于動物機體健康［18］。添加NCCE在一定程度上提高了血清中SOD、GSH-Px活力，可能是由于含有黃酮和多酚類等生物活性物質(zhì)阻礙過氧化物的形成［19］。T-AOC可反映血清抗氧化系統(tǒng)功能情況，本試驗結(jié)果表明，各試驗組血清T-AOC活性均顯著高于對照，說明添加NCCE能提高肉雞血清的總抗氧化能力。有學(xué)者對NCCE進行體外抗氧化試驗，發(fā)現(xiàn)其多酚類物質(zhì)有很強的抗氧化作用，而其他次要成分發(fā)揮著重要的協(xié)同作用［20］。MDA含量可反映機體脂質(zhì)過氧化的程度即機體氧化損傷的程度［21］，本試驗中各試驗組肉雞血清MDA含量均低于對照，這可能是NCCE多種抗氧化成分進入循環(huán)系統(tǒng)最終在血清中表現(xiàn)出抗氧化活性的結(jié)果。

［1］ 侯喜林.不結(jié)球白菜育種研究新進展［J］.南京農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報，2003，26(4):111-115.

［2］ MA J F，HOU X L，XIAO D，et al.Cloning and characterization of the BcTuR3 gene related to resistance to Turnip Mosaic Virus (TuMV)from non-heading Chinese cabbage［J］.Plant Mol Biol Rep，2010，28:588-596.

［3］ ROJO E，SOLANO R，SANCHEZ-SERRANO J J.Interactions between signaling compounds involved in plant defense［J］.J Plant Growth Regul，2003，22:82-98.

［4］ JONATHAN D G J，JEFFERY L D.The plant immune system［J］.Nature，2006，444:323-329.

［5］ LIU T K，LI Y，ZHANG C W，et al.Basic helix-loop-helix transcription factor BcbHLHpol functions as a positive regulator of pollen development in non-heading Chinese cabbage［J］.Funct Integr Genomics，2014，14:731-739.

［6］ MEYER U，WEIGEL K，SCHONE F.Effect of dietary iodine on growth and iodine status of growing fattening bulls［J］.Livestock Science，2008，115:219-225.

［7］ 龍盛京，負佩舊，覃日昌.17種清熱中藥抗氧化活性的研究［J］.中草藥，1999，30(1):40.

［8］ SELSTED M E，OUELLETIE A J.Mammalian defensins in the antinicrobial immune responses［J］.Nature Inmumology，2005，6: 551-557.

［9］ AFOLABI F E.Chemical composition and antibacterial activity of-Gongronema latifolium［J］.Journal of Zhejiang University Science B，2007，8(5):352.

［10］ YAKUBU M B，ODAMA L E，NANDITA B D E.Studies on theantibacterial activity of the extract of Stachytarpheta angustifolia［J］.Journal of Nanjing Medical University，2003，17(3):116.

［11］張訓(xùn)海，王德云，胡元亮，等.黃茂多糖對雞體液免疫增強作用［J］.中國獸醫(yī)學(xué)報，2009，29(3):312-314.

［12］PATTANAIK A K，KHAN S A，VARSHNEY V P，et al.Effect of iodine level in mustard(Brassica juncea)cake-based concentrate supplement on nutrient utilization and serum thyroid hormones of goats［J］.Small Ruminant Research，2001，41:51-59.

［13］FASSCAS M K，MOUNTZOURIS K C，TARANTILIS P A，et al.Antioxidant activity in meat treated with oregano and stage essential oils［J］.Food Chem，2007，1006:1188-1194.

［14］MARCIN A K S，SOKOL J，BYSTRICKY P，et al.Determination of lipid oxidation level in broiler meat by liquid chromatography［J］.J Aoac Int，2004，87(5):1148-1152.

［15］MILOS T，KULISIC A，RADONIC V，et al.Use of different methods for testing antioxidative activity of oregano essential oil［J］.Food Chem，2004，85:633-640.

［16］SATO K，CHO Y，TACHIBANA S，et al.lmpairment of VLDL secretion by medium-chain fatty acids in chicken primary hepatocytes is affected by the chain length［J］.The Jouurmal of Nutrition，2005，135(7):1636-1641.

［17］雷 紅，祁成年，郭世寧.幾種中藥方劑對雞血清免疫球蛋白和補體的影響［J］.中國獸醫(yī)雜志，2007，43(1):33-34.

［18］范京輝，錢利純，孫建義，等.植物源乳化劑對肉雞生產(chǎn)性能及脂肪代謝的影響［J］.中國獸醫(yī)學(xué)報，2010，10(30): 1390-1393.

［19］YAN H J，LEE E J，NAM K C，et al.Dietary functional ingredients:performance of animals and quality and storage stability of irradiated raw turkey breast［J］.Poult Sci，2006，85:1829-1837.

［20］YUSUF K，F(xiàn)IGEM K，METIN C.Effects of dietary ascorbic acid on blood haematological profile，serum biochemical components and tonic immobility reaction of male turkeys under summer condition［J］.Journal Poultry Science，2009，46:105-111.

［21］ WANG J P，KIM H J，CHEN Y J，et al.Effects of delta-aminolewlinic acid and vitamin C supplementation on feed intake，backfat，and iron status in sows［J］.Journal of Animal Science，2009，87(11):3589-3595.