秦泗佳 張曉紅 金海威 高璐 王福

1.西安醫(yī)學(xué)院口腔醫(yī)學(xué)系口腔解剖生理學(xué)教研室，西安 710021；2.大連醫(yī)科大學(xué)口腔醫(yī)學(xué)院口腔基礎(chǔ)教研室，大連 116044

三叉神經(jīng)痛或稱痛性痙攣（抽搐），是指三叉神經(jīng)所支配的區(qū)域發(fā)生的強(qiáng)烈的陣發(fā)性疼痛。發(fā)病率約8/10萬(wàn)[1]，多見(jiàn)于中老年人，平均發(fā)病年齡為（62.7±15.8）歲[2]，女性多于男性。隨著人口老齡化，其發(fā)病率亦有增高趨勢(shì)。盡管學(xué)者們已進(jìn)行了大量的臨床和動(dòng)物模型的研究，相繼提出了許多新的觀點(diǎn)和治療手段[3-4]，但其發(fā)病機(jī)制尚不清楚。因此，建立一種操作簡(jiǎn)單且穩(wěn)定可靠的動(dòng)物模型就顯得十分必要。在眾多的發(fā)病機(jī)制學(xué)說(shuō)中有解剖學(xué)依據(jù)且被多數(shù)學(xué)者認(rèn)可的是微血管壓迫學(xué)說(shuō)，動(dòng)物模型的建立多以此為基礎(chǔ)。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)結(jié)扎SD大鼠眶下神經(jīng)建立三叉神經(jīng)痛模型，觀察大鼠的行為反應(yīng)和疼痛閾值及膠質(zhì)細(xì)胞源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子（glial cell line-derived neurotrophic factor，GDNF）在不同時(shí)間點(diǎn)的變化，探討GDNF與疼痛的關(guān)系，對(duì)進(jìn)一步探究三叉神經(jīng)痛的病因機(jī)制具有一定的指導(dǎo)意義。

1 材料和方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料和分組

選擇健康成年清潔級(jí)SD大鼠36只，體重180 g±20 g。隨機(jī)選取6只作為空白對(duì)照組，手術(shù)組和假手術(shù)組各15只。手術(shù)組采用經(jīng)口內(nèi)右側(cè)眶下神經(jīng)慢性壓迫性損傷（chronic constriction injury to the infraorbital nerve，CCI-ION）法建立三叉神經(jīng)痛樣動(dòng)物模型，假手術(shù)組只分離暴露右側(cè)的眶下神經(jīng)而不結(jié)扎，空白對(duì)照組不暴露也不結(jié)扎眶下神經(jīng)。

1.2 方法

1.2.1 建立模型 10%水合氯醛（0.004 mL·g-1）腹腔內(nèi)注射麻醉，取仰臥位，固定頭和四肢，將舌牽出并拉向一側(cè)，在大鼠口內(nèi)第一磨牙水平沿右側(cè)齦頰邊緣縱向切開(kāi)約1 cm，逐層鈍性分離周圍組織，暴露眶下神經(jīng)，在眶下神經(jīng)近、遠(yuǎn)心端分別用4-0鉻腸線疏松結(jié)扎，兩線之間的距離約為2 mm，結(jié)扎要松緊適度，要求在顯微鏡下見(jiàn)僅減少神經(jīng)的直徑，但仍然保持神經(jīng)表層血循環(huán)的通暢，且不阻斷神經(jīng)沖動(dòng)傳導(dǎo)，4-0尼龍線縫合手術(shù)創(chuàng)口。假手術(shù)組除不結(jié)扎眶下神經(jīng)外，其余的操作均與手術(shù)組一樣。空白對(duì)照組只進(jìn)行麻醉、固定和消毒。所有手術(shù)操作都在無(wú)菌條件下展開(kāi)，術(shù)前及術(shù)后未用抗生素。動(dòng)物清醒后給予一般飼養(yǎng)。

1.2.2 痛閾測(cè)定 術(shù)前及術(shù)后1～12周每周觀察并記錄大鼠疼痛閾值及行為反應(yīng)。在大鼠適應(yīng)實(shí)驗(yàn)環(huán)境后進(jìn)行感覺(jué)測(cè)試。感覺(jué)測(cè)試器刺激的位置是眶下神經(jīng)在面部的支配區(qū)（觸須墊）。采用自制的大鼠固定籠固定大鼠，讓大鼠適應(yīng)一段時(shí)間，然后手持測(cè)試器緩慢接近大鼠，先在左側(cè)刺激3次，再刺激右側(cè)3次，兩次之間間隔10 s，測(cè)試過(guò)程中要使細(xì)絲彎曲；每一個(gè)強(qiáng)度共刺激6次，刺激過(guò)程中要保證測(cè)試器的強(qiáng)度由低到高依次增大。陽(yáng)性反應(yīng)的表現(xiàn)為：1）不對(duì)稱性搔抓面部，至少連續(xù)3次搔抓刺激區(qū)。2）攻擊行為，表現(xiàn)為快速抓咬測(cè)試器。3）快速的后退、躲避動(dòng)作，將身體倦縮靠向籠壁、頭面部藏于身下或?qū)㈩^轉(zhuǎn)向?qū)?cè)以避開(kāi)刺激。出現(xiàn)上述的任意1項(xiàng)或多項(xiàng)即可判為陽(yáng)性，當(dāng)3次刺激中有2次或以上為陽(yáng)性時(shí)，此時(shí)所對(duì)應(yīng)的細(xì)絲強(qiáng)度（克數(shù)）即為大鼠面部機(jī)械痛閾值，若此強(qiáng)度大于或等于26 g，將26 g作為該次測(cè)定的閾值。將手術(shù)側(cè)與對(duì)側(cè)和對(duì)照組結(jié)果進(jìn)行比較和統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。

1.2.3 取材及固定 分別于手術(shù)后1、2、4、6、12周隨機(jī)選取手術(shù)組和假手術(shù)組各3只大鼠處死，加上6只空白對(duì)照組大鼠共計(jì)36只，取三叉神經(jīng)節(jié)組織標(biāo)本。具體操作為：10%水合氯醛腹腔內(nèi)注射麻醉后開(kāi)胸，依次灌注0.9%氯化鈉溶液和4%多聚甲醛溶液，體式鏡下游離獲取雙側(cè)三叉神經(jīng)節(jié)，4%多聚甲醛溶液固定24 h后，放入0.1 mol·L-1PBS，備用。

1.2.4 三叉神經(jīng)節(jié)標(biāo)本GDNF免疫組織化學(xué)染色 將固定后的三叉神經(jīng)節(jié)標(biāo)本經(jīng)梯度乙醇脫水、二甲苯透明、浸蠟、包埋。石蠟標(biāo)本連續(xù)切片（厚5 μm），經(jīng)脫蠟、水化、抗原修復(fù)，冷卻至室溫后行免疫組織化學(xué)染色：1）0.01 mol·L-1PBS沖洗，3%H2O2去離子水室溫下孵育10 min；2）PBS沖洗，滴加50 μL山羊血清工作液，室溫下孵育10 min；3）加入一抗（GDNF抗體，稀釋度1︰200），搖勻后，4 ℃過(guò)夜；4）PBS沖洗，滴加50 μL生物素化二抗工作液，室溫下孵育10 min；5）PBS沖洗，滴加50 μL辣根酶標(biāo)志鏈酶卵白素工作液，室溫下孵育10 min；6）PBS沖洗，滴加50 μL新配制的DAB顯色劑顯色；7）自來(lái)水充分沖洗后，蘇木素染液復(fù)染，梯度乙醇脫水，二甲苯透明，中性樹(shù)膠封片。光鏡下觀察GDNF在三叉神經(jīng)節(jié)中的表達(dá)和分布情況并拍照。在手術(shù)組及假手術(shù)組每只大鼠標(biāo)本的切片中按先后次序隔10張選取1張，共選10張，每張切片在400倍鏡下分別隨機(jī)選取10個(gè)視野拍照，將所得的照片導(dǎo)入到Image-Pro Plus 6.0軟件中，然后進(jìn)行石蠟組織切片免疫組織化學(xué)染色結(jié)果的半定量分析，計(jì)算出每個(gè)視野的累積光密度值（integrated optical density，IOD）與面積（S），然后用總的累積光密度值除以總面積，就可以得出每張切片的平均光密度值（optical density，OD）。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)軟件的重復(fù)測(cè)量資料的方差分析和t檢驗(yàn)對(duì)所得實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。計(jì)量資料的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)都用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，以P＜0.05為差異具有顯著性。

2 結(jié)果

2.1 各組大鼠的疼痛閾值及行為反應(yīng)變化

2.1.1 手術(shù)組 術(shù)前術(shù)后不同時(shí)間大鼠的痛覺(jué)反應(yīng)閾值見(jiàn)圖1。由圖1可見(jiàn)，術(shù)后1周刺激大鼠右側(cè)眶下神經(jīng)在面部的感覺(jué)支配區(qū)域后，出現(xiàn)低反應(yīng)期，疼痛閾值明顯增高，大鼠反應(yīng)遲鈍。術(shù)后2周，閾值急劇下降為0.75 g±0.04 g，大鼠易激惹，表現(xiàn)為受極低強(qiáng)度的刺激，即可出現(xiàn)上述陽(yáng)性反應(yīng)，持續(xù)至術(shù)后6周，然后閾值緩慢增高，在術(shù)后10～12周恢復(fù)到手術(shù)前的水平。左側(cè)疼痛閾值變化趨勢(shì)與手術(shù)側(cè)相似，術(shù)后1周亦出現(xiàn)短暫的高閾值反應(yīng)遲鈍期，但不如右側(cè)明顯。術(shù)后2周閾值最低，為1.00 g±0.05 g，低閾值持續(xù)至第5周，然后緩慢升高至正常水平。經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)t檢驗(yàn)分析表明：在術(shù)前、術(shù)后1周和10～12周，左右兩側(cè)疼痛閾值相比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；在術(shù)后2～9周，左右兩側(cè)疼痛閾值相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

圖1 手術(shù)組和假手術(shù)組術(shù)前術(shù)后不同時(shí)間大鼠的痛覺(jué)反應(yīng)閾值Fig 1 The pain threshold of rats in operative and sham-operative group at different time before and after operation

2.1.2 空白對(duì)照組與假手術(shù)組 術(shù)前及術(shù)后各時(shí)間點(diǎn)刺激空白對(duì)照組和假手術(shù)組大鼠左、右側(cè)眶下神經(jīng)在面部的感覺(jué)支配區(qū)域后大鼠反應(yīng)正常，兩組大鼠兩側(cè)疼痛閾值無(wú)明顯變化（圖1）。經(jīng)統(tǒng)計(jì)分析，同組及兩組大鼠之間各時(shí)間點(diǎn)左右兩側(cè)疼痛閾值比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2.2 各組大鼠右側(cè)疼痛閾值變化比較

術(shù)后1周手術(shù)組右側(cè)疼痛閾值明顯高于另兩組，而術(shù)后2～9周疼痛閾值明顯低于另兩組。術(shù)后1～9周手術(shù)組右側(cè)的疼痛閾值與另兩組右側(cè)的疼痛閾值相比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。術(shù)前及術(shù)后10～12周，手術(shù)組右側(cè)與假手術(shù)組、空白對(duì)照組右側(cè)相比，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

2.3 大鼠三叉神經(jīng)節(jié)中GDNF的表達(dá)變化和分布情況

各組三叉神經(jīng)節(jié)組織切片經(jīng)GDNF免疫組織化學(xué)染色，均可見(jiàn)免疫陽(yáng)性細(xì)胞，該陽(yáng)性細(xì)胞多數(shù)呈橢圓形、圓形和多角形，手術(shù)組三叉神經(jīng)節(jié)中陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)要多于空白對(duì)照組。免疫陽(yáng)性物質(zhì)大多呈現(xiàn)棕黃色，主要分布在細(xì)胞質(zhì)及細(xì)胞核中，細(xì)胞核著色較深，但核仁沒(méi)有陽(yáng)性著色（圖2）。手術(shù)組大鼠術(shù)后三叉神經(jīng)節(jié)中GDNF的表達(dá)量增高，且表達(dá)量隨著時(shí)間的推移而改變。數(shù)據(jù)經(jīng)統(tǒng)計(jì)分析表明：與術(shù)前及假手術(shù)組相比，術(shù)后1、2、4周手術(shù)組GDNF的OD值明顯升高（P＜0.01），術(shù)后6周恢復(fù)至術(shù)前水平（P＞0.05）。假手術(shù)組和空白對(duì)照組術(shù)前術(shù)后的OD值相比，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）（圖3）。

圖2 手術(shù)組GDNF在大鼠三叉神經(jīng)節(jié)中的表達(dá) 免疫組織化學(xué)染色× 400Fig 2 The expression of GDNF in operative group trigeminal ganglia immunohistochemistry× 400

圖3 術(shù)前術(shù)后大鼠三叉神經(jīng)節(jié)中GDNF的變化Fig 3 The changes of GDNF in trigeminal ganglia before and after surgery

3 討論

3.1 建立CCI-ION動(dòng)物模型的理論基礎(chǔ)

目前三叉神經(jīng)痛的臨床治療方法有很多種，但臨床效果并非理想，究其原因是對(duì)三叉神經(jīng)痛的發(fā)病原因和機(jī)制尚不明確。目前提出的有關(guān)三叉神經(jīng)痛發(fā)病機(jī)制的學(xué)說(shuō)主要可分為中樞病因?qū)W說(shuō)和周圍病因?qū)W說(shuō)兩大類。中樞學(xué)說(shuō)認(rèn)為是大腦皮質(zhì)與丘腦過(guò)多的神經(jīng)電活動(dòng)導(dǎo)致的癲癇樣發(fā)作或三叉神經(jīng)脊束核與感覺(jué)核控制異常痛覺(jué)傳入信號(hào)的能力下降而產(chǎn)生疼痛。主要的解釋是閘門(mén)學(xué)說(shuō)。周圍學(xué)說(shuō)則認(rèn)為三叉神經(jīng)根、節(jié)受到壓迫導(dǎo)致的三叉神經(jīng)脫髓鞘是三叉神經(jīng)痛的主要病因和病理改變，其后眾多學(xué)者都證實(shí)了這一觀點(diǎn)。目前提出的主要解釋有串?dāng)_學(xué)說(shuō)和點(diǎn)燃學(xué)說(shuō)。造成神經(jīng)壓迫的原因可以歸結(jié)為血管壓迫和硬膜鞘、帶和骨性壓迫。此后眾多的學(xué)者先后建立了許多相關(guān)的動(dòng)物模型：慢性縮窄環(huán)模型[5-6]、三叉神經(jīng)末梢致痛模型[7]、三叉神經(jīng)根埋植模型[8]、牙髓灌注模型[9]、經(jīng)顳下窩暴露三叉神經(jīng)節(jié)模型[10]、經(jīng)枕骨下暴露三叉神經(jīng)根和顳下暴露三叉神經(jīng)節(jié)模型[11]。

本次實(shí)驗(yàn)建立和采用的眶下神經(jīng)慢性壓迫性縮窄環(huán)模型就是模擬了血管壓迫學(xué)說(shuō)，對(duì)神經(jīng)造成壓迫，觀察術(shù)前術(shù)后大鼠的行為反應(yīng)、疼痛閾值和神經(jīng)微循環(huán)的變化。結(jié)果顯示：術(shù)后1周出現(xiàn)一個(gè)短暫的遲鈍反應(yīng)期，估計(jì)可能的原因是結(jié)扎后阻礙了神經(jīng)信號(hào)傳入通路的通暢。術(shù)后2周大鼠處于超敏反應(yīng)期，對(duì)較低的非疼痛性刺激即可產(chǎn)生疼痛反應(yīng)和自發(fā)性疼痛。對(duì)于手術(shù)組左側(cè)在術(shù)后2周也出現(xiàn)了三叉神經(jīng)痛樣反應(yīng)的機(jī)制目前尚不十分清楚，有的學(xué)者[12]認(rèn)為是由于“交叉興奮”的原因而引起的疼痛反應(yīng)，也有的學(xué)者[13]認(rèn)為與三叉神經(jīng)中樞核團(tuán)中的P物質(zhì)和酸性磷酸酶的活性增強(qiáng)有關(guān)系，還有的學(xué)者[14]認(rèn)為是慢性壓迫所導(dǎo)致的神經(jīng)干的病變引起了高位神經(jīng)中樞的病變，也有可能是動(dòng)物模型的條件反射，到底是什么機(jī)制還有待于進(jìn)一步研究。該方法能夠有效地模擬臨床上的三叉神經(jīng)痛，具有操作簡(jiǎn)單、重復(fù)性好、貼近臨床和成功率高等優(yōu)點(diǎn)。通過(guò)該模型的建立可更進(jìn)一步深入探究三叉神經(jīng)痛的病因機(jī)制和采用不同方式的治療觀察其療效。

3.2 大鼠三叉神經(jīng)節(jié)中GDNF的表達(dá)與三叉神經(jīng)痛

GDNF屬于轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子超家族，是靶源性的神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子，能夠促進(jìn)神經(jīng)元的生長(zhǎng)發(fā)育、存活及再生，還能夠延長(zhǎng)軸索的長(zhǎng)度，使其朝靶器官的方向生長(zhǎng)，還能保護(hù)離斷軸突的感覺(jué)及運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元，阻止其退化和凋亡[15]。人的GDNF分子與鼠的GDNF有93%～95%同源性，在人和鼠的尾狀核中有高表達(dá)，而殼核中則是低表達(dá)。GDNF還表達(dá)在感覺(jué)神經(jīng)元（如三叉神經(jīng)節(jié)）和自主神經(jīng)元（如副交感節(jié)）所支配的組織中，并對(duì)這些神經(jīng)元起著營(yíng)養(yǎng)的作用[16]。

國(guó)內(nèi)已有學(xué)者對(duì)GDNF的鎮(zhèn)痛作用展開(kāi)研究，主要的研究集中在腦、脊髓和坐骨神經(jīng)損傷或結(jié)扎后GDNF的表達(dá)變化規(guī)律。吳旭等[17]通過(guò)研究腦損傷后GDNF的變化發(fā)現(xiàn)，其表達(dá)量具有一定的時(shí)間規(guī)律性，可以用來(lái)推斷腦損傷的時(shí)間。羅偉等[18]則研究了脊髓半橫斷損傷后GDNF的表達(dá)變化，發(fā)現(xiàn)損傷后其表達(dá)明顯增多，認(rèn)為在其損傷的早期發(fā)揮修復(fù)作用。另有學(xué)者[19]通過(guò)各種途徑增加外源性GDNF，研究其對(duì)坐骨神經(jīng)損傷后病理變化的影響，結(jié)果都說(shuō)明GDNF的增多能夠保護(hù)受損的神經(jīng)元，并能增加機(jī)械刺激疼痛閾值，參與神經(jīng)痛的調(diào)控。最新的研究方向是通過(guò)構(gòu)建GDNF基因載體，導(dǎo)入神經(jīng)內(nèi)使其穩(wěn)定長(zhǎng)效的表達(dá)。有學(xué)者[20-21]已通過(guò)構(gòu)建慢病毒載體來(lái)轉(zhuǎn)染T細(xì)胞與神經(jīng)干細(xì)胞，并取得了很好的結(jié)果，但尚未見(jiàn)將其作為一種臨床治療方法的報(bào)道。

本研究應(yīng)用免疫組織化學(xué)染色的方法，表明了在三叉神經(jīng)節(jié)內(nèi)有GDNF免疫陽(yáng)性物質(zhì)且大多呈現(xiàn)棕黃色，分布在細(xì)胞質(zhì)及細(xì)胞核中，細(xì)胞核著色較深，但核仁沒(méi)有陽(yáng)性著色。手術(shù)組在術(shù)后1周表達(dá)量開(kāi)始增多，一直持續(xù)到術(shù)后4周，此期間GDNF的表達(dá)量與假手術(shù)組相比有顯著差異，說(shuō)明手術(shù)造成神經(jīng)軸突的損傷累及神經(jīng)元細(xì)胞體導(dǎo)致其凋亡，從而刺激了膠質(zhì)細(xì)胞和雪旺細(xì)胞GDNF的分泌，通過(guò)遠(yuǎn)端運(yùn)輸和旁分泌等途徑進(jìn)入胞體，減少神經(jīng)元細(xì)胞的凋亡，促進(jìn)神經(jīng)元和神經(jīng)纖維的修復(fù)再生和減少神經(jīng)元的異常放電。這些都說(shuō)明GDNF在調(diào)控口腔頜面部痛、溫覺(jué)沖動(dòng)的傳入和三叉神經(jīng)損傷后的修復(fù)再生中有一定作用。

建立穩(wěn)定可靠的動(dòng)物模型有利于相關(guān)實(shí)驗(yàn)的后續(xù)研究，慢性壓迫大鼠眶下神經(jīng)導(dǎo)致神經(jīng)微循環(huán)的改變，進(jìn)而引起神經(jīng)纖維變性和脫髓鞘，使大鼠表現(xiàn)為痛覺(jué)超敏，輕微的刺激即可產(chǎn)生異常的電信號(hào)引發(fā)疼痛，GDNF通過(guò)提高神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)，阻止細(xì)胞凋亡，促進(jìn)軸索再生延長(zhǎng)來(lái)修復(fù)受損神經(jīng)，重建正常的神經(jīng)通路，減弱和消除異常神經(jīng)電信號(hào)的產(chǎn)生和傳導(dǎo)，從而達(dá)到鎮(zhèn)痛的目的。

[1]Spatz AL,Zakrzewska JM,Kay ΕJ.Decision analysis of medical and surgical treatments for trigeminal neuralgia:how patient evaluations of benef its and risks affect the utility of treatment decisions[J].Pain,2007,131(3):302-310.

[2]T?lle T,Dukes Ε,Sadosky A.Patient burden of trigeminal neuralgia:results from a cross-sectional survey of health state impairment and treatment patterns in six Εuropean countries[J].Pain Pract,2006,6(3):153-160.

[3]Obermann M,Katsarava Z.Update on trigeminal neuralgia[J].Εxpert Rev Neurother,2009,9(3):323-329.

[4]Prasad S,Galetta S.Trigeminal neuralgia:historical notes and current concepts[J].Neurologist,2009,15(2):87-94.

[5]Imamura Y,Kawamoto H,Nakanishi O.Characterization of heat-hyperalgesia in an experimental trigeminal neuropathy in rats[J].Εxp Brain Res,1997,116(1):97-103.

[6]Christensen D,Gautron M,Guilbaud G,et al.Εffect of gabapentin and lamotrigine on mechanical allodynia-like behaviour in a rat model of trigeminal neuropathic pain[J].Pain,2001,93(2):147-153.

[7]Ng CH,Ong WY.Increased expression of gamma-aminobutyric acid transporters GAT-1 and GAT-3 in the spinal trigeminal nucleus after facial carrageenan injections[J].Pain,2001,92(1/2):29-40.

[8]Burchiel KJ.Abnormal impulse generation in focally demyelinated trigeminal roots[J].J Neurosurg,1980,53(5):674-683.

[9]Foong FW,Satoh M,Takagi H.A newly devised reliable method for evaluating analgesic potencies of drugs on trigeminal pain[J].J Pharmacol Methods,1982,7(4):271-278.

[10]Liu W,M?ller M.Εxperimental microneurosurgery of the trigeminal ganglion and ophthalmic-maxillary nerve in the rat:subtemporal fossa approach[J].J Neurosci Methods,2000,102(2):91-94.

[11]Sakas DΕ,Whittaker K,Abbasi KH,et al.Εxperimental microneurosurgery of the trigeminal nerve:surgical technique for ganglionectomy and rhizotomy in the cat[J].J Neurosci Methods,1996,65(2):137-141.

[12]Devor M,Wall PD.Cross-excitation in dorsal root ganglia of nerve-injured and intact rats[J].J Neurophysiol,1990,64(6):1733-1746.

[13]Vos B,Maciewicz R.Alterations of peripheral nerve morphology and chances in fluoride resistant acid phosphatase and substance P immunoreactivity in the trigeminal nucleus caudalis in an experimental model of trigeminal neuropathic pain[J].Clin J Pain,1991,7(1):48.

[14]Benoist JM,Gautron M,Guilbaud G.Εxperimental model of trigeminal pain in the rat by constriction of one infraorbital nerve:changes in neuronal activities in the somatosensory cortices corresponding to the infraorbital nerve[J].Εxp Brain Res,1999,126(3):383-398.

[15]Bennett DL,Michael GJ,Ramachandran N,et al.A distinct subgroup of small DRG cells express GDNF receptor components and GDNF is protective for these neurons after nerve injury[J].J Neurosci,1998,18(8):3059-3072.

[16]Quartu M,Serra MP,Boi M,et al.Tissue distribution of neurturin,persephin and artemin in the human brainstem at fetal,neonatal and adult age[J].Brain Res,2007,1143:102-115.

[17]吳旭,王保捷,張國(guó)華,等.大鼠腦損傷后GDNF表達(dá)變化的時(shí)間規(guī)律性研究[J].中國(guó)法醫(yī)學(xué)雜志,2004,19(1):19-21.

[18]羅偉,趙匡彥,王廷華.大鼠脊髓半橫斷損傷后神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子bFGF、GDNF的表達(dá)變化[J].中華神經(jīng)外科疾病研究雜志,2005,4(2):152-155.

[19]賈東林,吳新民,張利萍.蛛網(wǎng)膜下腔注射膠質(zhì)細(xì)胞源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子對(duì)大鼠神經(jīng)病理性痛的影響[J].中國(guó)疼痛醫(yī)學(xué)雜志,2009,15(4):221-225.

[20]施勇,周粱,田潔,等.攜帶大鼠膠質(zhì)細(xì)胞源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子基因慢病毒載體的構(gòu)建及轉(zhuǎn)染[J].中國(guó)眼耳鼻喉科雜志,2008,8(5):283-288.

[21]張陽(yáng),張志堅(jiān),楊光華,等.新型Tet-On系統(tǒng)大鼠GDNF和TH雙基因的慢病毒載體的構(gòu)建與表達(dá)[J].中國(guó)藥理學(xué)通報(bào),2010,26(8):1079-1084.