王 燕，錢耀先，陳 俊，周光莉，楊云敏，馬思雨，吳世木

（興義市人民醫(yī)院檢驗科，貴州562400）

VITEK2-COMPACT全自動微生物分析儀的正確度驗證

王 燕，錢耀先，陳 俊，周光莉，楊云敏，馬思雨，吳世木

（興義市人民醫(yī)院檢驗科，貴州562400）

目的驗證VITEK2-Compact全自動微生物分析系統(tǒng)鑒定和藥物敏感性試驗的正確度。方法用紙片擴散（K-B）法和細菌鑒定儀（ATB）鑒定系統(tǒng)作為評價VITEK2-Compact全自動微生物分析系統(tǒng)藥物敏感性試驗和鑒定的參考方法，14株已知室間質評菌株和19株臨床菌株分別用VITEK2-Compact和參考方法鑒定和藥物敏感性試驗，并對結果做統(tǒng)計學分析。結果VITEK2-Compact鑒定與所選定ATB參考鑒定方法比較，符合率為100.00%。藥敏卡與K-B法結果標準符合率為96.90%：一般錯誤率為2.35%，嚴重錯誤率為0.75%，重大錯誤率為0.00%。結論VITEK 2-Compact全自動微生物分析系統(tǒng)的正確度能滿足臨床要求，可應用于臨床微生物實驗室臨床標本的細菌鑒定及藥敏試驗。

微生物敏感性試驗； 紙片擴散抗菌試驗； 正確度； 最小抑制濃度

當今微生物室的鑒定及藥敏試驗工作已由傳統(tǒng)的手工試驗發(fā)展到今天的全自動微生物分析系統(tǒng)，因其快速簡便，目前在許多臨床實驗室已廣泛應用。但其鑒定及藥敏結果的準確是否滿足臨床要求，是臨床檢驗人員及臨床醫(yī)生最為關注的，因此，特針對這種情況，作者對實驗室的VITEK2-Compact全自動微生物分析系統(tǒng)做了正確度的驗證，檢驗該系統(tǒng)的正確度是否滿足臨床需求，以保證檢驗結果的準確，更好地為臨床服務。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 菌株 衛(wèi)生部室間質評菌株14株（腸桿菌科5株，葡萄球菌4株，腸球菌2株，鏈球菌1株，念珠菌2株）。2014年本科分離出的19株臨床菌株（8株腸桿菌科，3株葡萄球菌，2株腸球菌，4株非發(fā)酵菌，2株鏈球菌）。

1.1.2 儀器和試劑

1.1.2.1 儀器 VITEK2-Compact全自動微生物分析儀。

1.1.2.2 試劑 VITEK2-Compact GN13藥敏卡，VITEK2-CompactGN鑒定卡，VITEK2-CompactGP鑒定卡VITEK2-Compact GP67藥敏卡，VITEK2-Compact GP68藥敏卡，VITEK2-Compact YST鑒定卡，ATB鑒定板條。哥倫比亞血瓊脂培養(yǎng)基[梅里埃（上海）生物制品有限公司]，M-H瓊脂培養(yǎng)基[梅里埃（上海）生物制品有限公司]，K-B藥敏紙片（Oxoid Limited）。

1.2 方法

1.2.1 質控 細菌鑒定卡用霍氏腸桿菌ATCC700323、嗜麥芽ATCC17666、鉛黃腸球菌ATCC700327、腐生葡萄球菌ATCCBAA-750做質控檢測。藥敏卡用大腸埃希菌ATCC25922、銅綠假單胞菌ATCC27853、金黃色葡萄球菌ATCC29213、糞腸球菌ATCC29212做質控檢測。K-B法用大腸埃希菌ATCC25922、金黃色葡萄球菌ATCC 25923進行質控監(jiān)測。

1.2.2 細菌鑒定 VITEK2-Compact鑒定卡及ATB鑒定板條均按照廠家提供的儀器和本實驗室的SOP文件操作規(guī)程要求進行操作，每個菌株測定1次，收集數(shù)據(jù)。

1.2.3 藥物敏感性檢測 VITEK2-Compact藥物敏感性卡檢測按照儀器的SOP文件操作規(guī)程要求進行操作，紙片擴散（K-B）法按照美國臨床實驗室標準化協(xié)會（CLSI）標準要求操作，每個菌株做對應藥物敏感性試驗1次，收集數(shù)據(jù)。

1.2.4 超廣譜β-內酰胺酶（ESBLS）和耐甲氧西林的葡萄球菌（MRS）確證試驗

1.2.4.1 ESBLs用K-B藥敏紙片頭孢他啶，頭孢他啶/克拉維酸。頭孢噻肟，頭孢噻肟/克拉維酸確認，按照美國CLSI標準要求操作。

1.2.4.2 MRS用K-B藥敏紙片頭孢西丁確認，按照CLSI標準要求操作。

1.2.5 結果分析 （1）鑒定結果分析。將所有鑒定結果分為4類進行分析。①首選鑒定：VITEK2-Compact鑒定百分率大于或等于85%；②低分辨鑒定：VITEK2-Compact鑒定百分率小于85%，給出2～3個等百分比鑒定結果，并提供補充試驗；③屬對種錯鑒定：VITEK2-Compact鑒定株屬名均與已知菌結果相同，但種名不同；④正確鑒定：首選鑒定與低分辨鑒定菌株之和。（2）藥物敏感性結果分析。藥物敏感性結果按以下4種情況進行分析。①標準符合率（CA）：VITEK2-Compact藥敏結果與K-B法結果利用CLSI解釋規(guī)則進行解釋，其結果完全一致；②嚴重錯誤（VME）：K-B法結果為R，而VITEK 2-Compact藥敏結果為S；③重大錯誤（ME）：K-B法結果為S，而VITEK 2-Compact藥敏結果為R；④一般錯誤（MIE）：KB法結果為S或R，而VITEK2-Compact藥敏結果為I；或K-B法結果為I，而VITEK2-Compact藥敏結果為S或 R[1-4]。

2 結 果

2.1 細菌鑒定結果

2.1.1 2014年衛(wèi)生部室間質評菌株鑒定結果 所選取的9株菌株均來自不同標本，其鑒定率結果符合要求，見表1。

表1 VITEK2-Compact對室間質評菌株的鑒定結果

2.1.2 2014年衛(wèi)生部室間質評菌株藥敏結果 所選取的9株菌株均來自不同標本，其藥敏結果與已知結果比較，見表2～5。

表2 VITEK2-Compact對室間質評菌株（腸桿菌）細菌藥敏試驗結果與已知結果比較

表3 VITEK2-Compact室間質評菌株（葡萄球菌）藥敏試驗結果與已知結果比較

2.1.3 臨床細菌鑒定結果 選取的15株臨床菌株同時用VITEK2和ATB鑒定系統(tǒng)鑒定，除2株肺鏈ATB鑒定值為88.4%外，其余2種方法鑒定值均大于95.0%，首選鑒定和正確鑒定均為100%，低分辨鑒定和屬對種錯鑒定均為0。見表6。

表4 VITEK2-Compact室間質評菌株（腸球菌）藥敏試驗結果與已知結果比較

表5 VITEK2-Compact室間質評菌株（肺炎鏈球菌）藥敏結果與已知結果比較

2.2 VITEK2-Compact藥物敏感性檢測結果與K-B法檢測結果的比較

2.2.1 腸肝菌科細菌藥物敏感性檢測結果 在8株腸肝菌科-抗菌藥物組合中VME和ME，2株細菌-妥布組合中出現(xiàn)MIE，2株細菌-頭孢吡肟組合中出現(xiàn)MIE。在所比對的14種抗菌藥物中12種抗菌藥物的符合率為100.0%，總符合率為96.4%。見表7。

表6 VITEK2-Compact與ATB鑒定結果比較

表7 8株腸肝菌科細菌VITEK2-Compact藥敏與K-B法結果比較

2.2.2 非發(fā)酵菌藥物敏感性檢測結果 在4株非發(fā)酵菌-抗菌藥物組合中無VME和ME，1株不動-復方新諾明組合中出現(xiàn)MIE，1株不動-頭孢曲松組合中出現(xiàn)MIE，1株不動-慶大霉素組合中出現(xiàn)MIE。在所比對的14種抗菌藥物中11種抗菌藥物的符合率為100%，總符合率為94.4%。見表8。

表8 4株非發(fā)酵菌VITEK2-Compact藥敏與K-B法結果比較

2.2.3 葡萄球菌藥物敏感性檢測結果 在3株葡萄球菌-抗菌藥物組合出現(xiàn)1例VME、ME及MIE，在所比對的12種抗菌藥物中11種抗菌藥物的符合率為100.0%，總符合率為97.0%，見表9。

表9 4株葡萄球菌細菌VITEK2-Compact藥敏與K-B法結果比較

2.2.2 腸球菌藥物敏感性檢測結果 在2株腸球菌-抗菌藥物組合中，無VME、ME和MIE，在所比對的9種抗菌藥物中9種抗菌藥物的符合率為100%，總符合率為100%，見表10。

2.3 ESBLS和MRS測定結果 VITEK2-Compact檢測ESBLs和MRS結果與K-B紙片確認結果比較，其8株試驗株的ESBLS符合率為100%，3株MRS試驗株符合率為100%。見表11。

表10 2株腸球菌細菌VITEK 2-Compact藥敏與K-B法結果比較

表11 VITEK2-Compact對ESBLs和MRS測定結果與確診結果比較

2.4 結果報告時間

2.4.1 VITEK2-Compact鑒定結果報告時間 在所選取的19株臨床菌株中VITEK2-Compact鑒定時間最短的是糞腸球菌和大腸埃希菌，且時間都相對較短。最長的是肺炎克雷伯菌和屎腸球菌。但時間均小于10 h。見表12。

表12 VITEK2-Compact鑒定結果報告時間（h）

2.4.2 VITEK2-Compact藥物敏感性結果報告時間 在所選取的19株臨床菌株中VITEK2-Compact藥敏時間最短的是肺炎克雷伯菌，最長的是肺炎鏈球菌。除1株銅綠假單胞菌和肺鏈時間大于10 h外，其余時間均小于10 h。見表13。

表13 VITEK2-Compact藥物敏感性結果報告時間（h）

3 討 論

ATB鑒定是在享譽全球的細菌鑒定“金標準”——API細菌鑒定系統(tǒng)的基礎上，將其API20項生化反應增加到32項，這樣ATB系統(tǒng)的鑒定范圍更廣，鑒定準確性更高，能鑒定大于或等于600種菌株，并且試驗操作簡便，操作過程標準化，易于保證結果準確可靠，所以本試驗特選用在“金標準”API基礎上改良的ATB鑒定作為VITEK2-Compact鑒定的參考方法。K-B紙片法依據(jù)美國CLSI和WHO推薦的藥物敏感性試驗，其中CLSI-100文件中指出手工紙片法頭孢他啶，頭孢他啶/克拉維酸。頭孢噻肟、頭孢噻肟/克拉維酸確認作為判斷ESBLs的標準方法；K-B藥敏紙片頭孢西丁作為判斷MRS的標準方法。所以本試驗選定ATB鑒定及K-B紙片法來評價VITEK2-Compact的正確度[5-7]。

本次試驗選用2013年至2014年部分室間質評菌株做鑒定及藥敏試驗，其中室間質評鑒定菌株9株，鑒定率均大于95%，與已知結果符合率為100%。8株室間質評菌株做藥敏試驗，葡萄球菌、鏈球菌和腸球菌與已知結果符合率為100%，但腸桿菌科-呋喃妥因有2株菌與已知結果出現(xiàn)一般不符合，既已知結果是S，試驗結果I，而試驗組中腸桿菌科-呋喃妥因2株菌在VITEK2-Compact結果是I，K-B紙片法結果是R，都低1個梯度，與已知結果相差1個梯度，可能原因是菌液濃度偏高導致，但其真正原因有待實踐工作中做更多的試驗分析比較得出。

選用的19株臨床菌株均是臨床常見致病菌，與ATB鑒定及K-B藥敏結果比較，其VITEK2-Compact的鑒定結果與ATB結果符合率為100%，藥敏試驗結果總符合率為96.90%，達到CLSI的要求——既當一種新方法的建立與參考方法比較大于或等于90%，獲得了較好的結果。但在試驗中還是出現(xiàn)了MIE（2.35%）、ME（0.75%）。一般錯誤在腸桿菌科中主要是呋喃妥因及妥布霉素，非發(fā)酵菌中主要是鮑曼不動桿菌菌株——復方新諾明、慶大霉素及頭孢曲松抗菌藥物，其結果都是相差1個梯度，可能與配置菌液濃度有關。VME主要是葡萄球菌科-苯唑西林抗菌藥物，但試驗中通過頭孢西丁紙片確認為S，初步分析也可能是操作時菌液濃度調制不好導致，但因其實驗株過少，不能充分證明，其真正原因有待下一步在實踐工作中進行大量的試驗數(shù)據(jù)分析研究。

在臨床工作中，由于抗生素的廣泛使用，患者耐藥率逐年升高，產(chǎn)ESBLs及MRS的菌株明顯增加，因此，在工作中對ESBLs和MRS的檢測工作就更加重要。從表7中可以看出，VITEK2-Compact上ESBLs和MRS與K-B紙片法結果有很好的符合率，達到100%，滿足臨床需求[8-10]。

傳統(tǒng)的手工鑒定及藥敏需要較長的時間，且操作繁瑣，而VITEK2-Compact無論在鑒定及藥敏試驗都能較快地得出結果，如大腸及糞腸菌鑒定在2.75 h就能報告，肺克藥敏在5.25 h，大大滿足了臨床需求，為醫(yī)生更早、更好地選擇抗菌藥物提供了依據(jù)。

從以上試驗數(shù)據(jù)總結可以看出，無論是室間質評菌株或臨床菌株，雖然存在一般錯誤和嚴重錯誤，但其試驗鑒定值及藥敏結果符合率，鑒定及藥敏報告時間都能完全滿足臨床需求，獲得了較好的正確度。對于試驗中出現(xiàn)的少部分一般錯誤及嚴重錯誤不吻合的，實踐工作中加做K-B藥物敏感性紙片，必要時做其他補充藥物敏感性試驗，以彌補儀器這方面結果的不足，保質保量地把檢驗結果反饋給臨床，更好地為臨床服務。

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：B

：1009-5519（2015）10-1524-05

2015-01-22）

王燕（1982-），女，貴州興義人，主管檢驗師，主要從事臨床微生物檢驗工作；E-mail：56294606@qq.com。