臧貴勇， 陳騰祥， 張祥令， 楊燕萍

(1.貴州省黔南民族醫(yī)學(xué)專科學(xué)校 解剖學(xué)教研室， 貴州 都勻 558000；2.貴陽醫(yī)學(xué)院 生理學(xué)教研室， 貴州 貴陽 550004；3.貴陽醫(yī)學(xué)院 組織與胚胎學(xué)教研室， 貴州 貴陽 550004)

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·技術(shù)與方法·

三種固定劑制作小腸潘氏細(xì)胞切片效果比較*

臧貴勇1**， 陳騰祥2， 張祥令3， 楊燕萍3

(1.貴州省黔南民族醫(yī)學(xué)?？茖W(xué)校 解剖學(xué)教研室， 貴州 都勻 558000；2.貴陽醫(yī)學(xué)院 生理學(xué)教研室， 貴州 貴陽 550004；3.貴陽醫(yī)學(xué)院 組織與胚胎學(xué)教研室， 貴州 貴陽 550004)

目的： 觀察改良Helly氏固定液、Bouin液和Carnoy液制作小鼠空腸切片對(duì)潘氏細(xì)胞的顯示效果。方法： 取小鼠空腸，采用改良Helly氏固定液、Bouin液和Carnoy液固定，對(duì)小腸組織HE染色，光學(xué)顯微鏡下觀察染色效果。結(jié)果： 改良Helly氏固定液能清晰顯示小腸的潘氏細(xì)胞及細(xì)胞核輪廓，染色簡單，而Bouin液和Carnoy液制片未見潘氏細(xì)胞。結(jié)論： 改良Helly氏固定液制作切片能更清楚顯示潘氏細(xì)胞及細(xì)胞核輪廓。

小腸；潘氏細(xì)胞；固定劑；HE染色

潘氏細(xì)胞(Paneth cell)位于小腸腺基底部，三五成群，細(xì)胞呈錐體形，頂部胞質(zhì)充滿粗大嗜酸性分泌顆粒，染成紅色[1]。經(jīng)電鏡觀察，細(xì)胞有細(xì)胞膜，胞質(zhì)內(nèi)含有大量粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)，高爾基復(fù)合體較大，分泌顆粒內(nèi)含有糖蛋白[2]。潘氏細(xì)胞是構(gòu)成腸黏膜屏障的重要細(xì)胞成分，能促進(jìn)食物消化，調(diào)控腸道菌群聚集及釋放無機(jī)鹽[3-4]。本實(shí)驗(yàn)觀察改良Helly氏固定液、Bouin液和Carnoy液制作小鼠空腸切片對(duì)潘氏細(xì)胞的顯示效果，報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 材料

健康小鼠由貴陽醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，30～40 g, 雌雄兼用。切片機(jī)、貼片機(jī)和顯微鏡均為Leica公司產(chǎn)品，蘇木素、伊紅、重鉻酸鉀、升汞、甲醛水溶液(40%)、鉻酸等試劑均為國產(chǎn)分析純。

1.2 方法

1.2.1 取材固定 小鼠饑餓24 h后拉斷脊柱法處死取空腸，分別采用改良Helly液(2.5 g重鉻酸鉀+5 g升汞+5 mL 40%甲醛水溶液+ 1%鉻酸+1 g硫酸鈉+1 000 mL蒸餾水)，Bouin液和Carnoy液固定18 h。

1.2.2 脫水透明 乙醇梯度脫水：70%乙醇和80%乙醇各2 h，90%乙醇和95%乙醇各1 h，100%乙醇液體和半乙醇半氯仿中各1 h，在透明劑氯仿中過夜直至包埋；脫水時(shí)，嚴(yán)格控制不同梯度乙醇的濃度，進(jìn)入下一步時(shí)用濾紙吸干，使組織脫水更徹底。

1.2.3 浸蠟包埋 石蠟和氯仿按1∶1比例混合浸蠟40 min，純蠟(1)20 min，純蠟(2)20 min，包埋成蠟塊，室溫冷卻待切。包埋時(shí)，石蠟要處于半溶狀態(tài)，嚴(yán)格控制包埋機(jī)溫度56～60 ℃，有利于標(biāo)本浸蠟。

1.2.4 切片及染色 用徠卡輪轉(zhuǎn)式切片機(jī)切片6 μm,用徠卡貼片機(jī)40 ℃展片，40 ℃溫箱烤片4 d。小腸組織HE染色：石蠟切片常規(guī)化蠟，下行，蘇木精染色，分色，蘭化，伊紅上色，顯微鏡下鏡檢，染色明顯，95%乙醇分色，上行，冬青油和二甲苯透明，中性樹膠封片[5]。

2 結(jié)果

鏡下觀察，采用Bouin液和Carnoy液固定未見潘氏細(xì)胞，而改良的Helly液，潘氏細(xì)胞又鮮又艷，形態(tài)結(jié)構(gòu)清晰，胞質(zhì)內(nèi)充滿粗大嗜酸性分泌顆粒，染成紅色。見圖1。

A、B分別采用Bouin液和Carnoy液固定(×400)，C、D采用改良Helly氏液固定(C×400，D×1 000)

3 討論

潘氏細(xì)胞制作是在動(dòng)物饑餓時(shí)取材，這樣腸腔干凈，利于取材，腸腔不受損，能使潘氏顆粒集聚。組織切片制作時(shí)，固定劑是關(guān)鍵，Helly液固定劑對(duì)細(xì)胞固定較好，特別適用于細(xì)胞特殊顆粒固定[6]。本技術(shù)對(duì)Helly液進(jìn)行改良，加入1%的鉻酸，鉻酸穿透力較慢，不會(huì)使組織收縮。 Bouin氏固定液、冰醋酸-福爾馬林-酒精液(AFA)液、Carnoy液等固定液易破壞細(xì)胞，使細(xì)胞不易顯示。組織脫水和包埋時(shí)，嚴(yán)格控制好時(shí)間，時(shí)間過短或過長，都不利于切片的制作；染色時(shí)，分色時(shí)間是關(guān)鍵[7]；透明時(shí)，最好放入冬青油至切片透明，冬青油浸入速度較慢，可浸數(shù)小時(shí)，臨時(shí)鏡檢也不易干。此法可制作大量的、細(xì)胞典型的潘氏細(xì)胞，供醫(yī)學(xué)生使用。

[1] 鄒仲之，李繼承.組織學(xué)與胚胎學(xué)[M].人民衛(wèi)生出版社, 2013: 149.

[2] 閆愛華, 任知春, 任秀花. 潘氏細(xì)胞固定和染色探討[J]. 四川解剖學(xué)報(bào)， 2001(2)：90.

[3] 陶凱忠, 唐慶娟, 鄭萍.潘氏細(xì)胞研究進(jìn)展 [J]. 現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展， 2009(4)：794-799.

[4] 楊玉榮, 焦喜蘭, 梁宏德.潘氏細(xì)胞及防御素的研究進(jìn)展 [J].中國細(xì)胞生物學(xué)學(xué)報(bào)， 2010(6)：971-975.

[5] 鄭燕璇,王曉鴻,茍新敏. 石蠟切片脫蠟方式比較[J]. 中國實(shí)用醫(yī)學(xué), 2009(2)：211.

[6] 杜卓民.實(shí)用組織學(xué)技術(shù)[M].人民衛(wèi)生出版社， 1998:30.

[7] 梁燕清.常規(guī)HE染色過程中分色方法的比較[J]. 解剖學(xué)研究, 2010(5)：封三.

(2015-02-28收稿，2015-04-03修回)

中文編輯： 周 凌

貴州省科技廳聯(lián)合基金項(xiàng)目(M2011-28)

時(shí)間：2015-05-21

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