臧貴勇， 陳騰祥， 張祥令， 楊燕萍

(1.貴州省黔南民族醫(yī)學專科學校 解剖學教研室， 貴州 都勻 558000；2.貴陽醫(yī)學院 生理學教研室， 貴州 貴陽 550004；3.貴陽醫(yī)學院 組織與胚胎學教研室， 貴州 貴陽 550004)

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·技術與方法·

三種固定劑制作小腸潘氏細胞切片效果比較*

臧貴勇1**， 陳騰祥2， 張祥令3， 楊燕萍3

(1.貴州省黔南民族醫(yī)學?？茖W校 解剖學教研室， 貴州 都勻 558000；2.貴陽醫(yī)學院 生理學教研室， 貴州 貴陽 550004；3.貴陽醫(yī)學院 組織與胚胎學教研室， 貴州 貴陽 550004)

目的： 觀察改良Helly氏固定液、Bouin液和Carnoy液制作小鼠空腸切片對潘氏細胞的顯示效果。方法： 取小鼠空腸，采用改良Helly氏固定液、Bouin液和Carnoy液固定，對小腸組織HE染色，光學顯微鏡下觀察染色效果。結果： 改良Helly氏固定液能清晰顯示小腸的潘氏細胞及細胞核輪廓，染色簡單，而Bouin液和Carnoy液制片未見潘氏細胞。結論： 改良Helly氏固定液制作切片能更清楚顯示潘氏細胞及細胞核輪廓。

小腸；潘氏細胞；固定劑；HE染色

潘氏細胞(Paneth cell)位于小腸腺基底部，三五成群，細胞呈錐體形，頂部胞質(zhì)充滿粗大嗜酸性分泌顆粒，染成紅色[1]。經(jīng)電鏡觀察，細胞有細胞膜，胞質(zhì)內(nèi)含有大量粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)，高爾基復合體較大，分泌顆粒內(nèi)含有糖蛋白[2]。潘氏細胞是構成腸黏膜屏障的重要細胞成分，能促進食物消化，調(diào)控腸道菌群聚集及釋放無機鹽[3-4]。本實驗觀察改良Helly氏固定液、Bouin液和Carnoy液制作小鼠空腸切片對潘氏細胞的顯示效果，報告如下。

1 材料與方法

1.1 材料

健康小鼠由貴陽醫(yī)學院實驗動物中心提供，30～40 g, 雌雄兼用。切片機、貼片機和顯微鏡均為Leica公司產(chǎn)品，蘇木素、伊紅、重鉻酸鉀、升汞、甲醛水溶液(40%)、鉻酸等試劑均為國產(chǎn)分析純。

1.2 方法

1.2.1 取材固定 小鼠饑餓24 h后拉斷脊柱法處死取空腸，分別采用改良Helly液(2.5 g重鉻酸鉀+5 g升汞+5 mL 40%甲醛水溶液+ 1%鉻酸+1 g硫酸鈉+1 000 mL蒸餾水)，Bouin液和Carnoy液固定18 h。

1.2.2 脫水透明 乙醇梯度脫水：70%乙醇和80%乙醇各2 h，90%乙醇和95%乙醇各1 h，100%乙醇液體和半乙醇半氯仿中各1 h，在透明劑氯仿中過夜直至包埋；脫水時，嚴格控制不同梯度乙醇的濃度，進入下一步時用濾紙吸干，使組織脫水更徹底。

1.2.3 浸蠟包埋 石蠟和氯仿按1∶1比例混合浸蠟40 min，純蠟(1)20 min，純蠟(2)20 min，包埋成蠟塊，室溫冷卻待切。包埋時，石蠟要處于半溶狀態(tài)，嚴格控制包埋機溫度56～60 ℃，有利于標本浸蠟。

1.2.4 切片及染色 用徠卡輪轉(zhuǎn)式切片機切片6 μm,用徠卡貼片機40 ℃展片，40 ℃溫箱烤片4 d。小腸組織HE染色：石蠟切片常規(guī)化蠟，下行，蘇木精染色，分色，蘭化，伊紅上色，顯微鏡下鏡檢，染色明顯，95%乙醇分色，上行，冬青油和二甲苯透明，中性樹膠封片[5]。

2 結果

鏡下觀察，采用Bouin液和Carnoy液固定未見潘氏細胞，而改良的Helly液，潘氏細胞又鮮又艷，形態(tài)結構清晰，胞質(zhì)內(nèi)充滿粗大嗜酸性分泌顆粒，染成紅色。見圖1。

A、B分別采用Bouin液和Carnoy液固定(×400)，C、D采用改良Helly氏液固定(C×400，D×1 000)

3 討論

潘氏細胞制作是在動物饑餓時取材，這樣腸腔干凈，利于取材，腸腔不受損，能使潘氏顆粒集聚。組織切片制作時，固定劑是關鍵，Helly液固定劑對細胞固定較好，特別適用于細胞特殊顆粒固定[6]。本技術對Helly液進行改良，加入1%的鉻酸，鉻酸穿透力較慢，不會使組織收縮。 Bouin氏固定液、冰醋酸-福爾馬林-酒精液(AFA)液、Carnoy液等固定液易破壞細胞，使細胞不易顯示。組織脫水和包埋時，嚴格控制好時間，時間過短或過長，都不利于切片的制作；染色時，分色時間是關鍵[7]；透明時，最好放入冬青油至切片透明，冬青油浸入速度較慢，可浸數(shù)小時，臨時鏡檢也不易干。此法可制作大量的、細胞典型的潘氏細胞，供醫(yī)學生使用。

[1] 鄒仲之，李繼承.組織學與胚胎學[M].人民衛(wèi)生出版社, 2013: 149.

[2] 閆愛華, 任知春, 任秀花. 潘氏細胞固定和染色探討[J]. 四川解剖學報， 2001(2)：90.

[3] 陶凱忠, 唐慶娟, 鄭萍.潘氏細胞研究進展 [J]. 現(xiàn)代生物醫(yī)學進展， 2009(4)：794-799.

[4] 楊玉榮, 焦喜蘭, 梁宏德.潘氏細胞及防御素的研究進展 [J].中國細胞生物學學報， 2010(6)：971-975.

[5] 鄭燕璇,王曉鴻,茍新敏. 石蠟切片脫蠟方式比較[J]. 中國實用醫(yī)學, 2009(2)：211.

[6] 杜卓民.實用組織學技術[M].人民衛(wèi)生出版社， 1998:30.

[7] 梁燕清.常規(guī)HE染色過程中分色方法的比較[J]. 解剖學研究, 2010(5)：封三.

(2015-02-28收稿，2015-04-03修回)

中文編輯： 周 凌

貴州省科技廳聯(lián)合基金項目(M2011-28)

時間：2015-05-21

http://www.cnki.net/kcms/detail/52.5012.R.20150521.1244.014.html

R329-33; R329.24

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