許 紅， 張永宏

(貴陽醫(yī)學院附院 消化內(nèi)科， 貴州 貴陽 550004)

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肝細胞抗原在Barrett食管、反流性食管炎和食管腺癌中的表達和意義*

許 紅， 張永宏*

(貴陽醫(yī)學院附院 消化內(nèi)科， 貴州 貴陽 550004)

目的： 觀察肝細胞抗原(Hep)在Barrett食管(BE)、反流性食管炎和食管腺癌中的表達，探討其臨床意義。方法： 采用免疫組化EnVision法，檢測Hep在正常食管黏膜組織(10例)、反流性食管炎(12例)、BE(28例)、食管腺癌(5例)中的表達，同時觀察Hep在輕度、中度、重度腸化生型BE中的陽性率。結果： Hep在正常食管黏膜組織中的陽性率為20.0%，在反流性食管炎中的陽性率為16.7%， 在Barrett食管中的陽性率為39.2%，其中輕、中、重度腸化Barrett食管Hep陽性率分別為25%， 60%， 100%，伴有異型增生Barrett食管3例為陰性表達，在食管腺癌中陽性率為60%。結論： 隨著Barrett食管腸化生程度的加重，Hep陽性表達率增高，Hep有望成為BE上皮化生的生物學標志物。

Barrett食管；腸化生；反流性食管炎；食管; 腺癌；肝細胞抗原

Pera等[1]報道食管原發(fā)性腺癌約50%源自Barrett食管(BE)，食管下段腺癌起源于腸上皮化生的腺上皮，從組織學上已明確了Barrett食管-不典型增生-腺癌的發(fā)展順序[2]。確診后的食管腺癌預后較差，早期診斷則5年生存率可達83%～90%，而晚期生存率則只能達到10%～15%[3]。肝細胞抗原(hepatocyte antigen, Hep)是肝細胞線粒體膜的一種成分,由于其在腫瘤性肝組織中高表達,因而曾被認為是診斷原發(fā)性肝細胞癌以及鑒別診斷肝內(nèi)轉移性癌的一個重要的指標。研究發(fā)現(xiàn)，Hep不僅在肝細胞癌及肝內(nèi)轉移性癌中表達，在膽管癌、宮頸癌、乳腺癌、結腸癌及胃癌等其他類型的腫瘤中也有表達，且表達與腫瘤的生物學行為有關。Hep在Barrett食管中的表達水平如何，是否具有潛在標志物的價值，成為此次研究的主要目的。

1 對象與方法

1.1 病例與標本

所有組織切片均取自2009年-2013年行胃鏡檢查的病例，經(jīng)病理活檢明確診斷。BE 28例、反流性食管炎12例及食管腺癌5例，正常食管黏膜10例作為對照組。28例BE中，男性16例，女性12例，平均54歲；反流性食管炎12例，男性10例，女性2例，平均50歲；食管腺癌5例，男性3例，女性2例，平均68歲；正常食管黏膜組織10例中，男性,5例，女性5例，平均年齡59歲。

1.2 診斷標準

BE定義為食管下段的復層鱗狀上皮被化生的單層柱狀上皮所替代的一種病理現(xiàn)象，可伴有或不伴有腸化。伴有腸上皮化生者屬于食管腺癌的癌前病變[4]。反流性食管炎定義為由于胃和(或)十二指腸內(nèi)容物反流至食管而引起的食管黏膜組織損害[5]。

1.3 病理學檢查

采用免疫組化EnVision法，將制好的病理組織切片后, 經(jīng)二甲苯脫蠟、梯度乙醇(依次為100%、95%、85%、75%的乙醇)水化后行免疫組化染色。切片微波抗原修復，余步驟嚴格按照試劑說明書進行。經(jīng)DAB(3′3-二氨基聯(lián)苯胺)顯色, 蘇木素復染, 梯度乙醇脫水(依次為70%、80%、90%、100%的乙醇)、中性樹膠封固,。在顯微鏡下觀察，以原發(fā)性肝細胞癌為陽性對照組, 以PBS (磷酸鹽緩沖液)代替一抗作為陰性對照組。試驗所用鼠抗人單克隆抗體 Hep (OCH1E)和免疫組化試劑盒均購于上?；蚬?。

1.4 結果判定

Hep陽性表達是上皮細胞胞質內(nèi)出現(xiàn)棕黃色顆粒沉著。當著色細胞比例>5%時判斷為Hep的陽性表達。

1.5 統(tǒng)計學分析

應用SPSS 11.0統(tǒng)計軟件，陽性率以百分比(%)表示，各組間陽性率的比較采用χ2檢驗，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

Hep在正常食管黏膜組織、反流性食管炎、BE、食管腺癌中的表達見表1，在不同類型BE中的表達見表2、圖1。 不同程度的腸化生BE中均有肝細胞抗原表達，其陽性率隨腸化生程度的加重而增高；Hep在BE各型腸化組中均有表達，重度腸化組中表達陽性率為100%。而在伴輕度異型增生型BE中Hep為陰性。(表2、圖1)。

表1 Hep在4類食管疾病中的表達Tab.1 Expression of Hep in the 4 kinds of esophagus diseases

表2 Hep在不同類型BE中的表達Tab.2 Expression of Hep in different intestinal-metaplasia-type BE

3 討論

BE之所以引起廣大學者較多的關注，是因為該病與胃食管反流性疾病以及食管腺癌的關系密切。近年來BE及食管腺癌的發(fā)病率逐年升高。隨著消化內(nèi)鏡使用的普及，逐步認識到食管下段的腸上皮化生是一種癌前病變，同食管腺癌的發(fā)生密切相關。國外研究報道BE癌變率較一般人群高出30～125倍，而腸化型BE患者食管腺癌的發(fā)生率較一般人群的高40～100倍，約80%的食管腺癌產(chǎn)生于BE[6-7]。目前診斷腸上皮化生(IM)的金標準仍是HE染色，IM上皮包括吸收細胞、特征性杯狀細胞及潘氏細胞,但HE下IM的檢出率仍然較低，分析原因在于：(1)杯狀細胞有時不明顯；(2)紋狀緣的IM上皮很難與胃柱狀上皮相鑒別；(3)活檢標本少，常常受擠壓變形，鑒別困難。因此，提高BE的診斷率對于預防和治療早期食管腺癌具有重要意義。如何特異性診斷腸化生型BE，成為近年來較多學者研究的熱點。

A:輕度腸上皮化生,B:中度腸上皮化生,C:重度腸上皮化生

Hep是Wennerberg等[8]于1993年從1例肝臟移植失敗患者的肝組織中分離提取的抗原，通過免疫小鼠獲得的一種單克隆抗體, 該抗體識別的抗原決定簇是肝細胞線粒體膜的一種成分, 在正常組織中不表達。Wennerberg等[8]最早應用免疫組化方法研究了Hep在肝細胞癌、非肝細胞癌中的表達,后續(xù)研究還發(fā)現(xiàn)由于食管、胃腸、肝有共同的胚胎分化，因此，Hep表達自這些器官的細胞是可以理解和接受的。Chu等[9-10]收集了13例合并柱狀上皮化生及胃腺癌的病例和33例BE病例，并發(fā)現(xiàn)其柱狀上皮化生組織中Hep對于診斷化生型BE的特異性、敏感性均較高，具有成為潛在BE診斷標志物的價值。鄭麗端等[11]通過研究發(fā)現(xiàn)Hep在BE的腸化上皮、BE腺癌及慢性萎縮性胃炎的腸化上皮中均見很強的棕黃色顆粒，提示Hep能特異、敏感地標記化生的腸上皮。黃文斌等[12]研究發(fā)現(xiàn)34例胃黏膜中，20例伴有腸上皮化生的胃黏膜Hep均呈陽性表達，而正?；虿话橛心c上皮化生的胃黏膜為陰性。

本研究表明，Hep在正常食管黏膜組織、反流性食管炎、BE、食管腺癌中均有表達，但在正常食管黏膜組織、反流性食管炎陽性率較低，在BE、食管腺癌中陽性表達率較高，提示隨著疾病的進展Hep表達逐漸增強；在28例BE中，腸化生型BE 25例，中、重度型化生陽性率較高，重度化生Hep表達陽性率可達100%，伴有輕度異型增生BE無陽性表達；但Hep在25例化生型BE中總體表達率僅為44%，與一些研究發(fā)現(xiàn)Hep在腸化生型BE的表達率可達100%，在腸型胃癌中Hep陽性率也為100%不太相符，分析原因在于：(1)本次實驗將腸化型BE標本分為輕、中、重度，而文獻報道中均未詳細分型，本次實驗中重度腸化BE陽性率也可達100%；(2)病理組織取材較少，導致陽性細胞數(shù)較少；(3)病例標本量少。從本研究提示隨著腸化生程度的加重，Hep表達的陽性率也隨之升高；且Hep在反流性食管炎中陽性率較低，在伴有異型增生的BE中不表達。Hep在診斷BE、反流性食管炎及食管腺癌中的靈敏性及特異性仍需進一步的實驗研究。

綜上所述，Hep在腸上皮化生型BE中表達隨著化生程度的加重，陽性率增高。Hep有望成為BE上皮化生的生物學標志物。對BE的診斷、防治及預后判斷有一定的臨床價值。

[1] Pera M，Cameron AJ，Trastek VF，et al. Increasing incidence of adenocarcinoma of the esophagus and esophagogastric junction[J]. Gastroenterology, 1993(2): 510-513.

[2] Hamilton SR, Smith RR. The relationship between columnar epithelial dysplasia and invasive adenocarcinoma arising in Barrett's esophagus[J]. AM J Clin Pathol， 1987(87): 301-312

[3] Hoff SJ, Sawyers JL, Blanke CD, et al. Prognosis of adenocarcinoma arising in Barrett's esophagus[J]. Ann Thorac Surg, 1998(65): 176-180.

[4] 中華醫(yī)學消化病學分會． Barrett 食管診治共識[S]． 2011．

[5] 陳灝珠，林果為，王吉耀，等.實用內(nèi)科學[M]．北京：人民衛(wèi)生出版社，2013:1897-1900.

[6] 張莎莎，張軍，羅金燕，等.Barrett’s食管的腸上皮化生研究[J]. 中華消化雜志, 2000(4):237-239.

[7] Couvelard A，Cauvin JM，Goldfain D，et al． Cytokeratin immunoreactivity of intestinal metaplasia at normal esophagus gastric junction indicates it’s aetiology [J]． Gut， 2001(49): 761 -766．

[8] Wennerberg AE, Nalesnik MA, Coleman WB. Hepatocyte paraffin1: a monoclonal antibody that reacts with hepatocytes and can be used for differential diagnosis of hepatic tumors[J]. Am J Patho, 1993(4):1050-1054.

[9] Chu PG, Jiang Z, Weiss LM.Hepatocyte antigen as a marker of intestinal metaplasia.Am J Surg Pathol, 2003(271):1758-1766.

[10]詹倩，諸琦.關于Barrett 食管的若干新認識[J]．國外醫(yī)學：消化系疾病分冊， 2005(5):302-305.

[11]鄭麗端，楊秀萍，翁密霞，等.肝細胞蛋白在腸上皮化生型Barrett 食管中的診斷價值[J]．中華消化雜志， 2004(24)11：676-679.

[12] 黃文斌，陳潔宇，周航波，等． 胃癌組織中肝細胞抗原的表達及其臨床意義[J]． 臨床與實驗病理學雜志， 2006 (6) : 689-692．

(2015-01-30收稿，2015-03-20修回)

中文編輯： 潘 婭；英文編輯： 劉 華

Expression of Hepatocyte Antigen in Barrett Esophageal, Reflux Esophagitis and Esophageal Adenocarcinoma and Its Clinical Significance

XU Hong, ZHANG Yonghong

(1.DepartmentofGastroenterology,GuiyangMedicalCollege,Guiyang550004,Guizhou,China)

Objective: To study expression of hepatocyte antigen in Barrett esophageal, reflux esophagitis and esophageal adenocarcinoma and its clinical significance. Methods: The study consisted of 10 cases of healthy volunteers, 12 cases of reflux esophagitis, 28 cases of Barrett's esophagus and 5 cases of esophageal adenocarcinoma. The esophageal mucosa among all enrolled cases were examined by immunohistochemical EnVision technique to detect the expression of hepatocyte antigen. Meanwhile, the positive rate of hepatocyte antigen in the Barrett esophagus with mild, moderate, severe intestinal-metaplasia-type were detected respectively. Results: The positive rate of hepatocyte antigen in healthy volunteers, reflux esophagitis and Barrett esophageal was 20%, 16.7%, 39.2%, respectively. Among the Barrett esophagus cases, the positive rate of hepatocyte antigen was 25% in 16 cases of mild intestinal metaplasia, 60% in 5 cases of moderate intestinal metaplasia, 100% in 4 cases of severe intestinal metaplasia and negative expression in 3 cases of dysplasia, respectively. The positive rate was 60% in 5 cases of esophageal adenocarcinoma. Conclusions: With aggravation of intestinal metaplasia, the positive rate of hepatocyte antigen increases. Therefore, hepatocyte antigen may be expected to be a biological mark of the BE intestinal metaplasia and helpful for clinical diagnosis, treatment and prognosis of BE.

Barrett esophagus; intestinal metaplasia; reflux esophagiti; esophagus; adenocarcinoma; hepatocyte antigen

時間：2015-05-21

http://www.cnki.net/kcms/detail/52.5012.R.20150521.1258.021.html

R571

A

1000-2707(2015)05-0517-03

*通信作者 E-mail:zyh20103026@163.com