王國芳，徐美珍，張歡妍，唐國建

肝細胞癌(HCC)是臨床常見的惡性腫瘤之一，其發(fā)病早期十分隱匿，惡性程度高，進展快且預(yù)后差，早期診斷對其治療和預(yù)后判斷有重要意義。來源于肝細胞癌(HCC)的AFP和來源于慢性肝炎和肝硬化的AFP 與凝集素LCA 的親和力不同［1］。依據(jù)這種親和力的差別，AFP 分為三類，AFP-L1，AFP-L2 和AFP-L3。AFP-L1 是慢性肝炎和肝硬化患者血清中AFP 的主要組成部分，AFP-L2 來自于孕婦，AFP-L3 來源于肝癌細胞，與LCA 結(jié)合力高，在肝癌的早期，尤其是腫瘤組織有足夠的肝動脈供給時，能合成分泌AFP-L3。AFP-L3 是HCC患者血清中最主要的AFP 異質(zhì)體，聯(lián)合檢測甲胎蛋白異質(zhì)體和甲胎蛋白對肝細胞癌(HCC)，慢性肝炎和肝硬化的患者鑒別診斷非常重要。我們收集了108 例患者資料并進行分析，現(xiàn)報告如下。

1 資料與方法

1.1 資料 來源于2011年5月－2012年12月在金壇市人民醫(yī)院就診的肝細胞癌(HCC)患者30 例，男77 例，女31 例，年齡27～82 歲。均經(jīng)組織病理學(xué)或影像學(xué)證實;慢性肝病患者78 例，診斷標準符合2000年中華醫(yī)學(xué)會傳染病與寄生蟲病學(xué)分會，肝病學(xué)分會聯(lián)合修訂的“病毒性肝炎防治方案”中病毒性肝炎診斷標準。

1.2 方法 血清AFP-L3 分離檢測采用親和微量離心純化柱法，該微量離心純化柱內(nèi)裝偶聯(lián)了小扁豆凝集素LCA 的瓊脂糖，可以特異結(jié)合AFP-L3，經(jīng)過離心洗脫獲得AFP-L3，試劑由北京熱景生物技術(shù)有限公司提供，以美國食品藥品管理局批準的AFP-L3%≥10%為診斷HCC 的臨界值標準;獲得的AFP－L3，AFP 采用微粒子化學(xué)發(fā)光免疫法，儀器采用貝克曼公司的dxi800 全自動微粒子化學(xué)發(fā)光免疫分析儀，使用海爾施公司提供的同型配套試劑盒，試劑均在有效期內(nèi)使用，AFP 正常值設(shè)定為0～10 ng/ml，檢測時插入定值質(zhì)控，具體操作步驟嚴格按照說明書進行，確保檢驗結(jié)果的準確性。108 例患者均于晨起空腹靜脈采血5 ml，無溶血，脂血，新鮮分離血清，首先采用親和微量離心純化柱法獲取AFP-L3，然后采用貝克曼公司的dxi800 全自動微粒子化學(xué)發(fā)光免疫分析儀檢測AFPL3 和血清中的AFP。換算出AFP-L3%。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法 應(yīng)用SPSS13.0 軟件進行統(tǒng)計分析，不同組間比較采用χ2檢驗，以P＜0.05 為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

當檢測結(jié)果顯示獲取AFP-L3 含量≥1 ng/ml 時，按照北京熱景生物技術(shù)有限公司提供的試劑說明書中的公式換算出AFP-L3 的比率。當檢測結(jié)果顯示標本中AFP-L3 含量≤1 ng/ml 時，無需計算AFP-L3 的比率，即為陰性結(jié)果。當檢測結(jié)果顯示AFP-L3 含量≥400 ng/ml 時，即待測標本中甲胎蛋白異質(zhì)體的含量≥1 000 ng/ml，可判定陽性結(jié)果≥10%。

30 例HCC 患者中AFP 的水平波動在8.8～1524.1 ng/ml之間，其中AFP-L3%的陽性率為80%，而在78 例慢性肝病患者中AFP 的水平波動在3.2～580.1 ng/ml 之間，AFP-L3%的陽性率為14.1%。

表1 2 組患者AFP 異質(zhì)體與AFP 水平關(guān)系(n，%)

表2 2 組患者血清中AFP 和AFP-L3%陽性率比較(n，%)

表3 AFP 和AFP-L3%對HCC 診斷效能評價(%)

3 討論

隨著人們對腫瘤發(fā)病機制研究的深入，新的標志物不斷被發(fā)現(xiàn)，F(xiàn)DA 于2005年批準檢測甲胎蛋白異質(zhì)體(AFP-L3)應(yīng)用于肝癌診斷，并把甲胎蛋白異質(zhì)體(AFP-L3)占總甲胎蛋白(AFP)比率≥10%，作為診斷肝細胞癌的陽性界定值。

隨著國內(nèi)微量離心柱法檢測AFP-L3%的建立，血清中總AFP 和AFP-L3%可以提供不同的關(guān)于肝癌的信息?？侫FP升高可能提示肝癌患者肝臟有大的瘤塊存在。AFP-L3%可以預(yù)測肝癌細胞的惡性程度。AFP-L3% 為低值時不能否定HCC 的存在，因為約有15%～30%的AFP 陽性HCC 的AFPL3%＜10%［2-3］。

目前原發(fā)性肝癌診斷的血清標志物仍首推AFP，然而約有35%～40%原發(fā)性肝癌患者血清AFP 呈低濃度升高，且小肝癌通常AFP 較低，甚至正常［4］。因此AFP 持續(xù)低濃度陽性對早期肝癌患者的及時診斷尤為重要，低濃度持續(xù)陽性患者需經(jīng)過動態(tài)觀察AFP 的變化，但這種長期隨訪的方法往往延誤診斷的時機而造成失去及時治療的良機，因此有些學(xué)者認為傳統(tǒng)AFP 診斷標準對HCC 診斷價值不大，本文應(yīng)用親和微量離心純化柱法檢測30 例原發(fā)性肝癌，78 例慢性肝病的血清中AFP 和AFP-L3%結(jié)果，HCC 組AFP-L3%的陽性率較慢性肝病組差異有非常顯著性(P﹤0.01)，尤其是在AFP 濃度較低時HCC 組AFP-L3%的陽性率明顯高于慢性肝病組，而在AFP 高濃度時HCC 組的AFP-L3%陽性率也明顯高于慢性肝病組，說明AFP-L3%對HCC 有更高的敏感性.從表3 可以看出，單獨分析AFP 對HCC 的準確度是73.82%，單獨分析AFP-L3%對HCC 的準確度是85.64%，而同時聯(lián)合AFP 和AFP-L3%檢測對HCC 的準確度是93.16%，可見聯(lián)合AFP 和AFP-L3%，對HCC 的診斷更有意義［5］。AFP 異質(zhì)體的檢測有助于良惡性肝病的鑒別診斷［6］，這也與本實驗的結(jié)果相符合，在本實驗HCC 組的高濃度組和低濃度組AFP-L3%的陽性率分別為83.3%與75%，差異無顯著統(tǒng)計學(xué)意義，但是HCC 的低濃度組與病毒性肝炎的低濃度組AFP-L3%陽性檢出率分別為75%與12.1%，這兩者之間差異有顯著性。因此對AFPL3%的檢測，特別是對于AFP 低濃度陽性的病例顯得尤其重要，AFP-L3%有助于預(yù)警早期肝癌發(fā)生，因為AFP-L3%只由肝癌細胞分泌產(chǎn)生，在影像學(xué)檢查尚未發(fā)現(xiàn)肝癌特征性占位病變時，相比較影像學(xué)技術(shù)，AFP-L3%可以提前檢測出。如果患者血清中AFP-L3%占AFP 比例超過10%，提示肝癌的發(fā)生率大于95%［6］。

有研究發(fā)現(xiàn)，AFP-L3%與HCC 的惡性程度，分化和復(fù)發(fā)高度相關(guān)，提示AFP-L3% 可用來預(yù)測遠處轉(zhuǎn)移和預(yù)后監(jiān)測［7］。小肝癌中AFP-L3%的升高提示癌細胞是低分化，多發(fā)的。AFP-L3%高的患者腫瘤倍增時間短。用AFP-L3 占總AFP 比例來檢測HCC 不依賴AFP 總量的增多。AFP-L3%持續(xù)升高的患者其肝癌多灶性復(fù)發(fā)或門靜脈瘤栓發(fā)生率明顯高于AFP-L3%正常的患者，治療后AFP-L3%正常的患者存活率明顯高于AFP-L3%升高的患者［8］。

綜上分析，聯(lián)合AFP-L3%和AFP 值對肝癌的早期診斷，鑒別診斷，療效評估和預(yù)后監(jiān)測等方面有著極其重要的臨床價值［9］，能大大提高肝癌的檢出率和準確度，為臨床提供最佳的治療時機。

［1］張柏和，吳孟超，張曉華，等.AFP 異質(zhì)體肽鏈和寡糖成分差異與肝癌診斷的關(guān)系［J］.第二軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報，1991，12(4):341-345.

［2］Hu KQ，Kyulo NL，Lim N，et al .Clinical significance of elevated alpha-fetoprotein(AFP)in patients with chronic hepatitis C，but not hepa-tocellular carcinoma［J］.Am J Gastroenterol，2004，99(5):860-865.

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［5］王愛華，王華梁，方 芳，等.AFP 和AFP 異質(zhì)體對405 例原發(fā)性肝癌的診斷價值探討［J］.上海醫(yī)學(xué)檢驗雜志，2002，17(2):87-89.

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［9］紀鳳卿，徐振興.甲胎蛋白異質(zhì)體L3 在原發(fā)性肝癌診斷中的研究進展［J］.國際醫(yī)學(xué)檢驗雜志，2013，3(5):580-583.