何 峰， 向梅先， 胡亞京， 劉新橋

(中南民族大學 藥學院， 武漢 430074)

?

藤貝母乙酸乙酯部位化學成分研究

何 峰， 向梅先， 胡亞京， 劉新橋*

(中南民族大學 藥學院， 武漢 430074)

采用薄層色譜、正相硅膠柱、反向硅膠柱、葡聚糖凝膠、半制備高效液相柱對植物藥藤貝母乙酸乙酯部位的化學成分進行了系統(tǒng)的研究.共分離得到8個單體化合物，分別為：7-羥基-6-甲氧基香豆素(7-hydroxy-6-methoxy coumarin) (1)，表兒茶素(epicatechin) (2)，兒茶素(catechin) (3)，(E)-N-(4-羥基苯乙基)-3-(4-羥基-3-甲氧基苯基)丙烯酰胺[(E)-N-hydroxy phenyl ethyl-3-(4-hydroxy-3-methoxy phenyl) acrylamide] (4)，鄰苯二甲酸二丁酯(Dibutyl phthalate) (5)，(Z)-3-O-咖啡?；?4-O-甲基奎寧酸甲酯[(Z)-3-O-Coffee acyl-4-O-methyl quinic acid methyl ester] (6)，綠原酸甲酯(methyl chlorogenate) (7)， 3-O-[β-D-吡喃鼠李糖-(1-6)-β-D-吡喃半乳糖]-5，7，4′-三羥基黃酮(3-O-[beta-D-pyran rhamnose-(1-6)-beta-D-pyran galactose]-5， 7， 4′-three hydroxy flavone) (8). 所有化合物均首次從該植物分離得到.

藤貝母； 乙酸乙酯部位； 化學成分

藤貝母來源于葫蘆科土貝母屬植物土貝母Bolbostemmapaniculatum(Maxim.) Franquet，以鱗莖入藥.秋、冬采挖，洗凈，蒸透，曬干，用時打碎.藤貝母生于山坡草叢或平地， 主要分布于河北、山西、陜西、山東、甘肅、寧夏、河南和云南等省區(qū)，現(xiàn)有栽培.具清熱解毒，散結(jié)消腫.主治淋巴結(jié)結(jié)核、骨結(jié)核、乳腺炎、瘡癰腫毒；外用治蛇、蟲咬傷和外傷出血等癥[1].現(xiàn)代藥理研究表明藤貝母具有抗腫瘤活性[2]，本研究為了弄清其抗腫瘤的藥用功效的物質(zhì)基礎， 對藤貝母的化學成分進行了相應研究.采用正相硅膠柱層析、凝膠色譜、制備薄層色譜、半制備高效液相色譜等多種方法， 從藤貝母乙酸乙酯部位分離得到并鑒定了8個化合物.8個化合物的結(jié)構(gòu)如圖1所示.

1 材料和方法

1.1 試劑、材料和儀器

藤貝母藥材采自湖北恩施地區(qū)，經(jīng)中南民族大學藥學院萬定榮教授鑒定為葫蘆科土貝母屬植物土貝母Bolbostemmapaniculatum(Maxim.) Franquet [Actinostemma paniculatum Maxim.] 的鱗莖.石油醚、乙酸乙酯、正丁醇、乙醇、甲醇為分析純(國藥集團)，95%的乙醇為工業(yè)級，色譜級甲醇(天地公司).柱層析用硅膠(100～200目，200～300目)，硅膠G高效預制板(青島海洋化工產(chǎn)).ZF-6型三用紫外光譜儀；Bruker AM-400型核磁共振儀；Finnigan LCQ-Deca型質(zhì)譜儀；戴安Ultimate 3000型高效液相色譜儀；5C18-MS-Ⅱ(10 mm×250 mm)型色譜柱；RE-52AA型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，上海亞榮生化儀器廠；KQ-500E型超聲波清洗儀；紫外分光光度儀；Nicolet NEXUS-670傅里葉變更紅外光譜儀.

1.2 提取與分離

取藤貝母10 kg 淋洗后曬干，用粉碎機粉碎成粗粉.將藤貝母粗粉置95% 的乙醇中室溫浸泡提取3 次，每次24 h.過濾，合并濾液，減壓濃縮得浸膏2.1 kg，將浸膏用90%甲醇水溶液溶解后用等體積石油醚萃取，回收石油醚得到石油醚浸膏200 g(石油醚部位) .減壓回收下層的甲醇溶液得浸膏，然后用蒸餾水溶解浸膏后，依次用等體積乙酸乙酯和正丁醇萃取，分別減壓回收乙酸乙酯和正丁醇，得到乙酸乙酯提取物600 g (乙酸乙酯部位) 和正丁醇提取物900 g (正丁醇部位)，余下為水部位，蒸干水分后稱重 (水部位) .稱取乙酸乙酯部位浸膏500 g 上正相硅膠色譜柱，用環(huán)己烷-丙酮梯度洗脫(9∶1， 8∶2， 7∶3， 6∶4， 5∶5， 4∶6，3∶7， 2∶8， 1∶9， 0∶1)，收集各洗脫液，500 mL為一流分，TLC檢測合并相同流分后得到Fr.E1～E9九個部分.其中Fr.E1經(jīng)正、反相硅膠柱、葡聚糖凝膠柱層析得化合物Ⅰ(13 mg)和Ⅴ(7 mg); Fr.E2經(jīng)正相硅膠柱和凝膠柱、制備薄層板得化合物Ⅳ(23 mg); Fr.E4經(jīng)正相硅膠柱和半制備高效液相(HPLC)得化合物Ⅱ(9 mg)和Ⅲ(5 mg); Fr.E5、Fr.E6、Fr.E8分別經(jīng)正、反相硅膠柱和HPLC等方法進行分離，得到化合物Ⅵ (11 mg)、Ⅶ (14 mg)、Ⅷ (23 mg).

圖1 化合物的結(jié)構(gòu)Fig.1 The structures of compounds

2 結(jié)構(gòu)鑒定與結(jié)果

2.1 化合物I (7-羥基-6-甲氧基香豆素)

化合物I為白色針狀晶體(氯仿)，1H NMR(400 MHz，CDCl3)δ: 6.30(1H， d，J=9.2 Hz， H-3)， 7.63(1H， d，J=9.2 Hz， H-4)， 6.94(1H，s， H-6)， 3.98(3H，s，-OCH3-7).13C NMR(100MHz，CDCl3)δ: 161.42(C-2)，113.40(C-3)， 143.30(C-4)， 111.49(C-5)， 107.48(C-6)， 150.26(C-7)， 144.01(C-8)， 103.19(C-9)， 150.26(C-10)， 56.41(7-OCH3).1H NMR和13C NMR數(shù)據(jù)與文獻[3]報道基本一致，故鑒定化合物I為7-羥基-6-甲氧基香豆素(7-hydroxy-6-methoxy coumarin，分子式為C10H8O4).

2.2 化合物Ⅱ(表兒茶素)

化合物Ⅱ為白色粉末(甲醇)，[α]D-59.1°.1H NMR(400 MHz，CD3OD)δ: 4.83(1H， s， H-2)， 4.19(1H， s， H-3)， 2.89(1H， dd，J=16.8， 4.8 Hz，H-4)， 2.75(1H， d，J=16.2 Hz， H-5)， 5.92(1H， s， H-6)， 5.95(1H， s， H-8)， 6.99(1H， s， H-1′)， 6.78(1H， d，J=8.0Hz， H-5′)， 6.83(1H， d，J=8.0 Hz， H-6′).13C NMR(100 MHz， CD3OD)δ: 78.50(C-2)， 66.10(C-3)， 27.83(C-4)， 156.29(C-5)， 95.08(C-6)， 155.97(C-7)， 94.55(C-8)， 98.73(C-4a)， 156.59(C-8a)， 130.91(C-1′)， 114.54(C-2′)， 144.39(C-3′)， 144.56(C-4′)， 113.97(C-5′)， 118.04(C-6′).1H NMR和13C NMR數(shù)據(jù)與文獻[4]報道基本一致，故鑒定化合物Ⅱ為表兒茶素(epicatechin，分子式為C15H14O6).

2.3 化合物Ⅲ (兒茶素)

化合物Ⅲ為白色粉末(甲醇)，[α]D-17.1°.1H NMR(400 MHz，CD3OD)δ: 4.73(1H， s， H-2)， 4.01(1H， s， H-3)， 2.67(2H， dd，J=16.8， 4.8 Hz，H-4)， 5.89(1H， s， H-6)， 5.72(1H， s， H-8)， 6.89(1H， s， H-2′)， 6.69(1H， d，J=8.0 Hz， H-5′)， 6.66(1H， d，J=8.0 Hz， H-6′).13C NMR(100 MHz，CD3OD)δ: 82.7(C-2)， 68.5(C-3)， 28.4(C-4)， 100.5(C-4a)， 157.3(C-5)， 96.3(C-6)， 156.9(C-7)， 94.7(C-8)， 157.5(C-8a)， 131.7(C-1′)， 115.1(C-2′)， 145.3(C-3′)， 145.5(C-4′)， 115.5(C-5′)， 120.2(C-6′).1H NMR和13C NMR數(shù)據(jù)與文獻[5]報道基本一致，故鑒定化合物Ⅲ為兒茶素(catechin， 分子式為C15H14O6).

2.4 化合物Ⅳ[(E)-N-(4-羥基苯乙基)-3-(4-羥基-3-甲氧基苯基)丙烯酰胺]化合物Ⅳ為黃褐色粉末(二甲亞砜)，1H NMR(400 MHz， DMSO-d6)δ: 8.00(1H， s)， 7.12(1H， d，J=1.6 Hz， H-2)， 6.79(1H， d，J=8.4 Hz，5-H)， 6.99(1H， dd，J=8.4， 1.6 Hz， H-6)， 7.32(1H， d，J=15.6 Hz， H-7)， 6.44(1H， d，J=15.6 Hz， H-8)， 3.33(2H， m， H-1′)， 2.65(2H， m， H-2′)， 7.01(2H， d，J=8.4 Hz， H-4′，8′)， 6.68(2H， d，J=8.4Hz， H-5′-7′)， 3.80(3H， m，-OCH3-3).13C NMR(100 MHz， DMSO-d6)δ: 127.06(C-1)， 116.09(C-2)， 148.88(C-3)， 148.86(C-4)， 119.46(C-5)， 121.96(C-6)， 139.33(C-7)， 111.17(C-8)， 165.97(C-9)， 41.11(C-1′)， 34.87(C-2′)， 130.17(C-3′)， 129.92(C-4′，8′)， 115.56(C-5′-7′)， 156.27(C-6′)， 55.96 (-OCH3-3).1H NMR和13C NMR數(shù)據(jù)與文獻[6]報道基本一致，故鑒定化合物Ⅳ為(E)-N-(4-羥基苯乙基)-3-(4-羥基-3-甲氧基苯基)丙烯酰胺((E)-N-(4-hydroxyphenethyl)-3-(4-hydrixy-3-methoxyphenyl) acrylamide， 分子式為C18H19O4N).

2.5 化合物Ⅴ(鄰苯二甲酸二丁酯)

化合物Ⅴ為墨綠色油狀物(氯仿)，1H NMR(400 MHz，CDCl3)δ: 4.32(4H， t，H-1-1′)， 1.73(4H， m， H-2-2′)， 1.47(4H， m， H-3-3′)， 1.17(6H， td， H-4-4′)， 7.56(2H， m， H-3″-6″)， 7.76(2H， m， H-4″-5″).13C NMR(100 MHz， CDCl3)δ: 65.53(C-1-1′)， 30.58(C-2-2′)， 19.12(C-3-3′)， 13.66(C-4-4′)， 130.89(C-1″-2″)， 128.84(C-3″-6″)， 132.40(C-4″-5″)， 167.67(C-7″，8″).1H NMR和13C NMR數(shù)據(jù)與文獻[7]報道基本一致，故鑒定化合物Ⅴ為鄰苯二甲酸二丁酯(dibutyl phthalate， 分子式為C16H22O4).

2.6 化合物Ⅵ [(Z)-3-O-咖啡?；?4-O-甲基奎寧酸甲酯]

化合物Ⅵ為灰綠色粉末(甲醇)，1H NMR(400 MHz， CD3OD)δ: 2.18(2H， m，H-2′)， 5.26(1H， d，J=3.6 Hz， H-3′)， 3.67(1H， m， H-4′)， 4.07(1H， m， H-5′)， 2.01(2H， m， H-6′)， 7.40(1H， d，J=1.6 Hz， H-2)， 6.72(1H， d，J=8.4 Hz， H-5)， 7.04(1H， dd，J=1.6， 8.0 Hz， H-6)， 6.80(1H， d，J=12.8 Hz， H-7)， 5.71(1H， d，J=12.8 Hz， H-8)， 3.68(3H， s，-OCH3-7′).13C NMR(100 MHz，CD3OD)δ: 76.28(C-1′)， 71.87(C-2′)， 72.14(C-3′)， 38.12(C-4′)， 70.54(C-5′)， 38.12(C-6′)， 175.78(C-7′)， 128.48(C-1)，118.61(C-2)， 145.38(C-3)， 148.47(C-4)， 115.66(C-5)， 125.17(C-6)， 145.75(C-7)， 116.54(C-8)， 167.42(C-9)， 53.33 (-OCH3-7′).1H NMR和13C NMR數(shù)據(jù)與文獻[8]報道基本一致，故鑒定化合物Ⅵ為(Z)-3-O-咖啡?；?4-O-甲基奎寧酸甲酯((Z)-3-O-caffeoyl quinic acid methyl ester，分子式為C17H20O9).

2.7 化合物Ⅶ (綠原酸甲酯)

化合物Ⅶ為灰綠色粉末(甲醇)，1H NMR(600 MHz， CD3OD)δ: 6.94(1H， d，J=1.8 Hz， H-2)， 6.68(1H， d，J=7.8 Hz， H-5)， 6.85(1H， dd，J=1.8， 7.8 Hz， H-6)，7.43(1H， d，J=16.2 Hz， H-7)， 6.12(1H， d，J=16.2 Hz，H-8)， 5.16(1H， d，J=4.8 Hz， H-3′)， 2.09(2H， m， H-2′)， 2.09(1H， m， H-6′)， 1.92(1H， m， H-6′)， 3.67(1H， m， H-4′)， 4.15(2H， m， H-5′).13C NMR(150 MHz，CD3OD)δ: 127.58(C-1)， 115.06(C-2)， 149.71(C-3)， 146.87(C-4)， 116.58(C-5)， 122.98(C-6)， 147.21(C-7)， 114.98(C-8)， 168.25(C-9)， 75.16(C-1′)， 72.42(C-2′)，72.16(C-3′)， 37.65(C-4′)，70.32(C-5′)， 37.65(C-6′)，175.35(C-7′).1H NMR和13C NMR數(shù)據(jù)與文獻[9]報道基本一致，故鑒定化合物Ⅶ為綠原酸甲酯(Methyl chlorogenate，分子式為C17H20O9).

2.8 化合物Ⅷ(3-O-[β-D-吡喃鼠李糖-(1-6)-β-D-吡喃半乳糖]-5，7，4′-三羥基黃酮)

化合物Ⅷ為黃綠色粉末(甲醇)，1H NMR(600 MHz， CD3OD)δ: 8.18(1H，d，J=8.7 Hz，H-2′，6′)，6.58(1H，d，J=8.6 Hz， H-3′，5′)，6.58(1H，brs， H-8)， 6.19(1H， brs， H-6)， 5.13(1H， d，J=7.8 Hz， H-1″of Gal)，4.62(1H，s，H-1?of Rha)，1.28(3H， d，J=6.2 Hz， H-6?of Rha);13C NMR(150 MHz， CD3OD)δ: 179.4(C=O)， 166.8(C-7)， 162.8(C-5)，161.7(C-4′)，158.6(C-4)， 159.3(C-2)， 135.6(C-3)， 132.4(C-2′，6′)， 122.5(C-1′)， 116.3(C-3′，5′)， 105.7(C-1″ of Gal)， 105.4(C-10)， 101.7(C-1? of Rha)， 100.3(C-6)， 95.0(C-8)， 75.5(C-3″of Gal)， 75.2(C-5″of Gal)， 73.7(C-4?of Rha)， 73.1(C-2″of Gal)，72.4(C-3?of Rha)，72.2(C-2?of Rha)， 70.1(C-5?of Rha)， 69.8(C-4″of Gal)， 67.4(C-6″of Gal)， 18.1(C-6?of Rha).以上數(shù)據(jù)與參考文獻一致[10-11]，故鑒定化合物Ⅷ為3-O-[β-D-吡喃鼠李糖-(1-6)-β-D-吡喃半乳糖]-5，7，4′-三羥基黃酮(3-O-[beta-D-pyran rhamnose-(1-6)-beta-D-pyran galactose]-5，7，4′-three hydroxy flavone， 分子式為C27H29O15)．

3 討論

藤貝母來源于葫蘆科土貝母屬植物土貝母Bolbostemmapaniculatum(Maxim.) Franquet [Actinostemma paniculatum Maxim.]，本研究對藤貝母進行了化學成分分析研究.運用溶劑萃取，柱層析分離技術(shù)：如采用正相硅膠柱層析、凝膠色譜、制備薄層色譜、半制備高效液相色譜等多種方法， 從藤貝母乙酸乙酯部位分離得到了10多個化合物，鑒定了其中的8個，分別是7-羥基-6-甲氧基香豆素(7-6-hydroxy-6-methoxy coumarin)，表兒茶素(epicatechin)，兒茶素(catechin)，(E)-N-(4-羥基苯乙基)-3-(4-羥基-3-甲氧基苯基)丙烯酰胺[(E)-N-hydroxy phenyl ethyl-3-(4-hydroxy-3-methoxy phenyl) acrylamide]，鄰苯二甲酸二丁酯(di butyl phthalate)，(Z)-3-O-咖啡酰基-4-O-甲基奎寧酸甲酯[(Z)-3-O-Coffee acyl-4-O-methyl quinic acid methyl ester]，綠原酸(chlorogenic acid)，3-O-[β-D-吡喃鼠李糖-(1-6)-β-D-吡喃半乳糖]-5，7，4′-三羥基黃酮(3-O-[beta-D-pyran rhamnose-(1-6)-beta-D-pyran galactose]-5，7，4′-three hydroxy flavone).查閱文獻資料，發(fā)現(xiàn)這些化合物均為首次從該植物中分離得到，下一步將對分離得到的化合物進行抗腫瘤活性的篩選，以弄清該藥抗腫瘤的物質(zhì)基礎.

[1] 南京中醫(yī)藥大學編寫組. 中藥大辭典[M].上冊.上海: 科學技術(shù)出版社， 2005: 114．

[2] 全國中草藥匯編編寫組. 全國中草藥匯編[M].下冊.北京: 人民衛(wèi)生出版社， 1978: 323．

[3] 向梅先， 胡亞京， 閆云君. 血三七乙酸乙酯部位化學成分研究[J].中藥材，2012， 35(10): 1610-1614．

[4] WANG Kai-Jin， ZHANG Ying-Jun， YANG Chong-Ren， et al. Antioxidant phenolic compounds from rhizomes of Polygonum paleaceum [J]. Journal of Ethnopharmacology， 2005， 96: 483-487．

[5] Foo L Y， Lu Y， Mcnabb W C， et al. Proanthocyanidins from lotus pedunculatus [J]. Phytochemistry， 1997， 45(8): 1689-1696．

[6] Peihong Fan， Lara Terrier， Anne-Emmanuelle Hay， et al. Antioxidant and enzyme inhibition activities and chemical profiles of Polygonum sachalinensis F.Schmidt ex Maxim (Polygonaceae) [J]. Fitoterapia， 2010， 81: 124-131．

[7] 陳光英， 王安偉， 宋小平， 等. 大葉魚骨木莖的化學成分研究[J]. 化學研究與應用，2009, 10(7): 1024-1026.

[8] Carmen Lucia Cardoso， Vanderlan da Silva Bolzani， Dulce Helena Siqueira Silva， et al. The absolute configuration of 1-(3′，4′-dihydroxycinnamoyl) cyclopentane-2，3-diol from the amazonian tree Chimarrhis turbinate [J]. Journal of Nature Product， 2006， 69: 1046-1050．

[9] 翁裕馨， 陳湘宏， 劉占厚， 等. 細氈毛忍冬葉綠原酸類化學成分研究[J]. 安徽農(nóng)業(yè)科學，2011， 39 (27): 16566-16568．

[10] 易 衍， 巫 鑫， 王 英， 等. 霸王花黃酮類成分研究[J]. 中藥材， 2011， 34(5): 712-716．

[11] 向梅先， 金財多， 寇榮生， 等. 藤梨正丁醇部位化學成分的研究[J]. 華中師范大學學報：自然科學版， 2015， 49(3): 397-401.

Study on chemical composition of ethylacetate fraction fromBolbostemmapaniculatum(Maxim.) Franquet

HE Feng， XIANG Meixian， HU Yajing， LIU Xinqiao

(College of Pharmacy， South-central University for Nationalities， Wuhan 430074)

To study chemical composition of ethylacetate fraction fromBolbostemmapaniculatum(Maxim.) Franquet. TLC， normal-phase silica gel column， reveres-phase silica gel column， Sephadex-LH， semi-preparative HPLC column were used to isolate chemical compositions of ethylacetate fraction fromBolbostemmapaniculatum(Maxim.) Franquet. Eight compounds were gained and identified as∶7-6-hydroxy-6-methoxy coumarin (1); epicatechin (2); catechin (3); (E)-N-hydroxy phenyl ethyl-3-4-hydroxy-3-methoxy phenyl acrylamide (4); dibutyl phthalate(5); (Z)-3-O-Coffee acyl-4-O-methyl quinic acid methyl ester (6); chlorogenic acid (7); 3-O-[beta-D-pyran rhamnose-(1-6)-beta-D-pyran galactose]-5，7，4′-three hydroxy flavone (8). All compounds were isolated for the first time from this plant．

Bolbostemmapaniculatum(Maxim.) Franquet; ethylacetate fraction; chemical composition

2015-03-23.

武漢市科技晨光計劃項目(2014070404010210).

1000-1190(2015)04-0563-04

O629< class="emphasis_bold">文獻標識碼： A

A

*通訊聯(lián)系人. E-mail: lxqsuec@163.com.