趙淑慧 高 瑛 陸 洋 溫 然

(1 北京中醫(yī)醫(yī)院順義醫(yī)院，北京，101300； 2 北京中醫(yī)藥大學(xué)中藥學(xué)院，北京，100102)

骨愈搽劑的質(zhì)量控制研究

趙淑慧1高 瑛1陸 洋2溫 然2

(1 北京中醫(yī)醫(yī)院順義醫(yī)院，北京，101300； 2 北京中醫(yī)藥大學(xué)中藥學(xué)院，北京，100102)

目的：制備骨愈搽劑并對(duì)其質(zhì)量進(jìn)行檢查。方法：根據(jù)前期工藝研究結(jié)果進(jìn)行中試生產(chǎn)制備骨愈搽劑，采用紫外分光光度法測(cè)定骨愈搽劑中總黃酮含量；采用薄層色譜法鑒別雞血藤、伸筋草、花椒；進(jìn)行裝量差異、相對(duì)密度、pH值、微生物、穩(wěn)定性等項(xiàng)目的檢查。結(jié)果：中試提取條件為70%乙醇，10倍量，回流1 h，提取3次；雞血藤、伸筋草、花椒照薄層色譜法，點(diǎn)樣于硅膠G薄層板，展開(kāi)，檢視，均與對(duì)照品色譜相應(yīng)位置上顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)；以蘆丁為對(duì)照品，采用紫外分光光度法，在511 nm處測(cè)定骨愈搽劑中總黃酮含量為6.95 g/瓶；裝量差異符合相關(guān)要求；樣品在室溫下留樣觀察，在6個(gè)月內(nèi)質(zhì)量穩(wěn)定。結(jié)論：本制劑制備工藝簡(jiǎn)便，質(zhì)量穩(wěn)定可控。

骨愈搽劑；總黃酮；質(zhì)量控制

我院骨外科治療骨性關(guān)節(jié)炎的經(jīng)驗(yàn)熏洗方由雞血藤、伸筋草、花椒等6味中藥組成，具有祛風(fēng)除濕，活血通絡(luò)之功，在我院應(yīng)用已有多年歷史，治療骨性關(guān)節(jié)炎，療效顯著。我們通過(guò)前期實(shí)驗(yàn)研究，已將其制成骨愈搽劑成品，以方便患者使用，現(xiàn)對(duì)其制劑成品進(jìn)行質(zhì)量檢查。分別采用紫外分光光度法測(cè)定骨愈搽劑中總黃酮的含量；采用薄層色譜法鑒別雞血藤、伸筋草、花椒；根據(jù)《中華人民共和國(guó)藥典》2010版搽劑的檢查項(xiàng)下要求進(jìn)行裝量差異、相對(duì)密度、pH值、微生物、穩(wěn)定性檢查，以評(píng)價(jià)骨愈搽劑質(zhì)量的穩(wěn)定可控性。

1 儀器與試藥

TU-1810紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)(北京譜析通用儀器有限責(zé)任公司)；Sartorius BS 110S型電子分析天平(北京賽多利斯科學(xué)儀器有限公司)；KQ5200DA超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)；硅膠G，硅膠G254。

雞血藤、伸筋草、花椒等飲片(北京盛世龍藥業(yè)有限公司)，經(jīng)北京中醫(yī)藥大學(xué)生藥教研室劉春生教授鑒定均為藥典中收載品種；蘆丁對(duì)照品(批號(hào)：10080-200707)，對(duì)照品芒柄花素(批號(hào)111703-200603)，花椒對(duì)照藥材(批號(hào)121106-201004)，伸筋草對(duì)照藥材(批號(hào)121109-201002)均由中國(guó)藥品生物制品檢定研究院提供；乙醇為醫(yī)用乙醇，其他試劑為分析純。

2 制劑工藝

根據(jù)前期研究結(jié)果，取700個(gè)處方量藥材進(jìn)行中試提取，提取條件為70%乙醇，10倍量，回流1 h，提取3次。最后濃縮至2 g生藥/mL，藥液中加入0.2%苯甲酸鈉后，攪拌均勻，灌裝成100 mL/瓶，高溫蒸汽滅菌后即得。

3 質(zhì)量控制

3.1 性狀 本品為具有特殊香氣的棕黃色液體。

3.2 鑒別[1]

3.2.1 雞血藤的鑒別 取本品6 mL濃縮，蒸干，殘?jiān)蛹状?2 mL使溶解作為供試品溶液。取缺雞血藤處方藥材加70%乙醇10倍量回流1 h，提取3次，濃縮，蒸干，殘?jiān)蛹状?2 mL溶解作為缺雞血藤陰性對(duì)照品溶液。另取10 g雞血藤藥材加70%乙醇10倍量回流1 h，提取3次，同法制成單味藥對(duì)照品溶液。再取芒柄花素對(duì)照品，加甲醇使溶解,制成每1 mL含1 mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。按照薄層色譜法(《中華人民共和國(guó)藥典》2010年版，一部附錄ⅥB)試驗(yàn)，分別吸取上述四種溶液各10 μL，點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-甲醇(20∶1)為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，置紫外光燈(254 nm)下檢視。供試品溶液色譜中，在與芒柄花素對(duì)照品溶液色譜、雞血藤單味藥對(duì)照品色譜相應(yīng)位置上顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)，陰性對(duì)照品溶液在此處無(wú)干擾。

圖1 雞血藤鑒別薄層色譜圖

注：1.供試品，2.缺雞血藤陰性對(duì)照品，3.雞血藤單味藥對(duì)照品，4.芒柄花素。

3.2.2 伸筋草的鑒別 取本品6 mL濃縮，蒸干，殘?jiān)訜o(wú)水乙醇12 mL使溶解作為供試品溶液。取缺伸筋草處方藥材加70%乙醇10倍量回流1 h，提取3次，濃縮，蒸干，殘?jiān)訜o(wú)水乙醇12 mL溶解作為缺伸筋草陰性對(duì)照品溶液。另取10 g伸筋草藥材加70%乙醇10倍量回流1 h，提取3次同法制成單味藥對(duì)照品溶液。再取伸筋草藥材粉末1 g，加乙醚15 mL，浸泡過(guò)夜，濾過(guò)，濾液揮發(fā)，殘?jiān)訜o(wú)水乙醇1 mL使溶解，作為對(duì)照藥材溶液。照薄層色譜法(《中華人民共和國(guó)藥典》2010年版，一部附錄ⅥB)試驗(yàn)，分別吸取上述四種溶液各5 μL，點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-甲醇(40∶1)為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，再噴以5%硫酸乙醇溶液，在105 ℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品溶液色譜中，在與對(duì)照藥材溶液色譜相應(yīng)的位置上顯相同顏色的斑點(diǎn)，陰性對(duì)照溶液在此無(wú)干擾。

3.2.3 花椒的鑒別 取本品6 mL濃縮，蒸干，殘?jiān)右颐?2 mL溶解作為供試品溶液。取缺花椒處方藥材加70%乙醇10倍量回流1 h，提取3次，濃縮，蒸干，殘?jiān)右颐?2 mL溶解作為缺花椒陰性對(duì)照品溶液。另取10 g花椒藥材同法制成單味藥對(duì)照品溶液。再取花椒對(duì)照藥材2 g，加乙醚10 mL，充分振搖，浸漬過(guò)夜，濾過(guò)，濾液濃縮至1 mL，作為對(duì)照藥材溶液。照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述4種溶液各5 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G254薄層板上，以正己烷-乙酸乙酯(4∶1)為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，置紫外光燈(365 nm)下檢視。供試品溶液色譜中，在與對(duì)照藥材溶液色譜相應(yīng)的位置上顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)，陰性對(duì)照溶液在此無(wú)干擾。

圖2 伸筋草鑒別薄層色譜圖

注：1、2.供試品，3.缺伸筋草陰性對(duì)照品，4.伸筋草單味藥，5.對(duì)照藥材。

圖3 花椒鑒別薄層色譜圖

注：1.供試品，2.缺花椒陰性對(duì)照品，3.花椒單味藥對(duì)照品，4.花椒對(duì)照藥材。

3.3 含量測(cè)定

3.3.1 對(duì)照品溶液的制備 取10 mg蘆丁對(duì)照品，精密稱定，置50 mL量瓶中，加適量50%乙醇，超聲處理使溶解，放冷，加入50%乙醇定容。精密量取20 mL，置25 mL量瓶中，加入50%乙醇定容，得0.16 mg/mL對(duì)照品溶液。

3.3.2 供試品溶液的制備及顯色 取本品溶液0.1 mL置10 mL容量瓶中，再加入50%乙醇3.9 mL，以NaNO2-Al(NO3)3為顯色劑顯色，即加入50 mg/mL NaNO2溶液0.4 mL，搖勻后靜置6 min，再加入100 mg/mL Al(NO3)3溶液0.4 mL，搖勻后靜置6 min，加入100 mg/mL NaOH溶液4.0 mL，再加50%乙醇定容至刻度，搖勻后再靜置15 min。

3.3.3 總黃酮的含量測(cè)定 根據(jù)前期研究結(jié)果，采用紫外分光光度法以蘆丁為對(duì)照品，在511 nm處測(cè)定骨愈搽劑中總黃酮含量。以無(wú)樣品溶液的陰性試劑為空白，隨機(jī)抽取三瓶骨愈搽劑制備供試品溶液，在511 nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度值，根據(jù)線性回歸方程計(jì)算樣品中總黃酮含量(均值)，測(cè)得總黃酮含量為6.95 g/瓶。

表1 總黃酮的含量測(cè)定

3.4 檢查 按照《中華人民共和國(guó)藥典》(2010版一部附錄)要求，測(cè)得樣品相對(duì)密度為1.115(附錄VIIA)；pH值為4.01(附錄VIIG)。裝量差異(附錄IV)符合相關(guān)要求，結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 裝量結(jié)果

按照微生物限度檢查法(附錄XIIIC)，本品中含細(xì)菌數(shù)≤100 cfu/mL，霉菌數(shù)≤100 cfu/mL，金黃色葡萄球菌未檢出，銅綠假單胞菌未檢出，均符合要求。

表3 骨愈搽劑6個(gè)月內(nèi)穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果

3.5 穩(wěn)定性[2]樣品在室溫下留樣觀察，于0、1、2、3、6個(gè)月末取樣，分別進(jìn)行外觀，相對(duì)密度、pH值、總黃酮含量的檢查。結(jié)果表明骨愈搽劑外觀性狀無(wú)明顯變化，總黃酮含量測(cè)定均符合要求，表明本品在6個(gè)月內(nèi)質(zhì)量穩(wěn)定。

4 討論

中醫(yī)治療骨關(guān)節(jié)炎已有悠久的歷史和豐富的經(jīng)驗(yàn)，方劑及單味藥有效成分的臨床應(yīng)用均取得了較好的療效，許多中藥治療骨關(guān)節(jié)炎的物質(zhì)基礎(chǔ)已經(jīng)闡明，如雷公藤多苷和以青藤堿為代表的生物堿類、各種苷類、黃酮類物質(zhì)等[3]。黃酮類化合物是指兩苯環(huán)(A環(huán)與B環(huán))通過(guò)C3聯(lián)接而成的一系列化合物，即具有C6-C3-C6結(jié)構(gòu)，以2-苯基色原酮為母核的化合物。由于其結(jié)構(gòu)的千變?nèi)f化，所以其生理活性也多種多樣，具有抗炎、抗菌和抗病毒活性、抗腫瘤活性、抗氧化自由基活性等功效[4]。

黃酮類化合物治療關(guān)節(jié)炎研究廣泛，療效確切，并已有相關(guān)制劑用于臨床治療。例如，相關(guān)實(shí)驗(yàn)表明，豹皮樟總黃酮通過(guò)抑制大鼠關(guān)節(jié)滑膜細(xì)胞中基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP)-9的表達(dá)，減輕關(guān)節(jié)軟骨破壞，抑制膝關(guān)節(jié)炎癥反應(yīng)，抗炎機(jī)制可能與調(diào)節(jié)免疫功能、減少細(xì)胞因子生成以及抑制基質(zhì)金屬蛋白酶的蛋白表達(dá)有關(guān)[5]。黃酮類化合物治療關(guān)節(jié)炎的作用機(jī)制主要表現(xiàn)在抑制滑膜組織的異常增殖[6];抑制血管新生[7];抑制關(guān)節(jié)軟骨病變[8];抗炎作用[9];對(duì)免疫系統(tǒng)的影響[10]等。目前臨床常用的骨關(guān)節(jié)炎治療藥物包括抗炎藥、免疫抑制劑、生物制品等，這些藥物在取得治療效果的同時(shí)產(chǎn)生較大的不良反應(yīng)，如何找尋安全、有效的治療藥物意義重大。因此開(kāi)發(fā)黃酮類藥物制劑用于骨關(guān)節(jié)炎的治療將是一個(gè)前進(jìn)方向。

針對(duì)骨傷科疾病，以外敷、外搽、熏洗將藥物直接作用受損部位，發(fā)揮作用充分，局部療效優(yōu)于內(nèi)治法[11]。中藥搽劑是指藥材提取物藥材細(xì)粉或揮發(fā)性藥物用乙醇、水或適宜的溶劑制成的澄清或混懸的外用液體制劑，制備簡(jiǎn)單，使用攜帶方便，有效成分含量高且可控，適合現(xiàn)代社會(huì)廣泛應(yīng)用。本方原用法為熏洗方，研制成外用搽劑后，患者順應(yīng)性好，滿足了患者的需求同時(shí)也傳承和發(fā)展了傳統(tǒng)中藥制劑。

[1]國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典.一部[S].北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010.

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(2014-10-24收稿 責(zé)任編輯：洪志強(qiáng))

Preparation and Quality Control of Guyu Liniment

Zhao Shuhui1，Gao Ying1，Lu Yang2，Wen Ran2

(1ShunyiTraditionalChineseMedicineHospital，Beijing101300，China; 2SchoolofChineseMateriaMedica，BeijingUniversityofChineseMedicine，Beijing100102，China)

Objective:To prepare the Guyu liniment and to establish the quality control method for this medicine.Methods:According to the previous studies to prepare the Guyu liniment, UV spectrophotometry was used to determine the content of total flavonoids in Guyu liniment. TLC was used to identify Spatholobi Caulis, Lycopodii Herba and Zanthoxyli Pericarpium in the prescription of Guyu liniment. The content uniformity, relative density, pH, microbe and stability of Guyu liniment were measured.Results:The preparation technology of Guyu liniment is simple. The quality of Guyu liniment is stable and controllable.

Guyu Liniment; Total flavonoids; Quality control

北京市中醫(yī)藥科技項(xiàng)目(編號(hào)：JJ2011-36)

趙淑慧，主管藥師，研究方向：藥事管理和臨床藥學(xué)，E-mail：13601119829@163.com

R283；R284.2

A

10.3969/j.issn.1673-7202.2015.01.028