蔡志軍， 韋 群， 周鷹豪， 陳 瑜

(1.廣東醫(yī)學(xué)院第二附屬醫(yī)院檢驗科， 廣東 湛江 524000 2.廣東省湛江市湛工安度斯生物有限公司， 廣東 湛江 524003)

血漿內(nèi)毒素檢測在快速診斷革蘭陰性菌引起全身性感染的應(yīng)用

蔡志軍1， 韋 群2， 周鷹豪1， 陳 瑜2

(1.廣東醫(yī)學(xué)院第二附屬醫(yī)院檢驗科， 廣東 湛江 524000 2.廣東省湛江市湛工安度斯生物有限公司， 廣東 湛江 524003)

目的:探討血漿內(nèi)毒素檢測與傳統(tǒng)血培養(yǎng)之間的關(guān)系，方法:應(yīng)用LKM－02－32動態(tài)試管檢測儀檢測血漿中內(nèi)毒素的含量，并與血培養(yǎng)結(jié)果進行比較。結(jié)果:337例患者中內(nèi)毒素檢測陽性35例，占10.39%，內(nèi)毒素檢測陰性302例，占89.61%;內(nèi)毒素檢測陽性組血培養(yǎng)出革蘭陰性菌19例，占54.29%，內(nèi)毒素檢測陰性組血培養(yǎng)出革蘭陰性菌2例，占0.66%。內(nèi)毒素檢測陽性組血培養(yǎng)出革蘭陰性菌顯著高于內(nèi)毒素檢測陰性組，兩組差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)，在內(nèi)毒素檢測陽性的35例患者中，19例血培養(yǎng)陽性的內(nèi)毒素含量也顯著高于16例血培養(yǎng)陰性的內(nèi)毒素含量(P＞0.05)。以血培養(yǎng)為標(biāo)準(zhǔn)，內(nèi)毒素檢測的敏感度為90.48%，特異度為94.94%，陽性預(yù)測值為54.29%，陰性預(yù)測值為99.34%，結(jié)論:內(nèi)毒素檢測較傳統(tǒng)的血培養(yǎng)法快速，陽性率高，可用于全身性感染的早期輔助診斷。

內(nèi)毒素; 革蘭陰性菌; 感 染

全身性感染主要見于敗血癥，革蘭陰性菌感染尤常并發(fā)內(nèi)毒素血癥，常見的致病菌如大腸埃希氏菌、克雷伯氏菌、腸桿菌屬、銅綠假單胞菌、變形桿菌等等，多通過泌尿道、腸道、膽道和呼吸道引起感染，亦可通過外傷、手術(shù)、導(dǎo)管以及器械操作等途徑而進入血液，并大量繁殖引起敗血癥，從而造成內(nèi)毒素血癥［1］。通過血漿內(nèi)毒素的快速檢測，以判斷由革蘭陰性菌引起的全身性感染是近年來對感染性疾病病原學(xué)檢查的一種新的輔助診斷方法，本文就血漿內(nèi)毒素檢測對革蘭陰性菌引起的全身性感染的快速診斷進行探討，現(xiàn)報道如下。

1 對象與方法

1.1 研究對象:收集樣本標(biāo)準(zhǔn):根據(jù)廣東省2008年7月頒布的血培養(yǎng)指導(dǎo)原則以及《嚴(yán)重感染與感染性休克國際診治指南(2008)》診斷要求［2］:有以下體征之一均采血做血培養(yǎng)(需氧+厭氧)，同時抽取2mL靜脈置于肝素鋰抗凝管中進行血漿內(nèi)毒素檢測，①體溫＞38℃或＜36℃;②心率＞90次/min;③呼吸頻率＞20次/ min或PCO2＜32mmHg;白細胞數(shù)＞12×109L－1或＜4× 109L－1。從2013年10月至2014年7月收集到符合上述條件的樣本337份，年齡21d至89歲，男192例，女145例，患者主要來自兒科、ICU、呼吸內(nèi)科、腎內(nèi)科、血液內(nèi)科及感染科。

1.2 方 法

1.2.1 儀器與試劑:血培養(yǎng)及細菌鑒定:血培養(yǎng)儀: BACTEC－9120;全自動細菌分析儀:PhoenixTM－100，以及配套試劑均來自美國BD公司產(chǎn)品，每批次產(chǎn)品均嚴(yán)格按照常規(guī)做室內(nèi)質(zhì)控，質(zhì)控菌株采用大腸埃希氏菌ATCC25922以及金黃色葡萄球菌ATCC25923。血漿內(nèi)毒素檢測:動態(tài)試管檢測儀LKM－02－32、TAL－80試管恒溫儀及內(nèi)毒素檢測試劑盒、質(zhì)控品均由廣東湛江安度斯生物有限公司提供。

1.2.2 血漿內(nèi)毒素檢測:①采集好的抗凝血進行2000r/min離心10min，取上層富含血小板的血漿0.1mL加入裝有0.9mL樣品處理液中，混勻后75℃保溫10min取出后放置冷凍槽5min，為待測血漿樣品;②取0.25mL試劑復(fù)溶液加入反應(yīng)試劑中，輕輕搖勻靜置2min得試劑溶液;③取反應(yīng)管，每樣本平行2管分別加入0.1mL處理后的待測血漿樣品及50μg試劑溶液，混勻后插入 LKM－02－32動態(tài)試管檢測儀中，75min反應(yīng)結(jié)束后自動計算血漿中內(nèi)毒素的含量。大于0.109EU/mL為陽性。

1.2.3 血培養(yǎng)陽性樣本轉(zhuǎn)種血平板后使用PhoenixTM－100全自動細菌分析儀進行鑒定。

1.3 統(tǒng)計學(xué)處理:應(yīng)用SPSS17.0軟件統(tǒng)計分析，計量資料組間比較采用t檢驗，以±s表示;計數(shù)資料組間比較采用χ2檢驗，P＞0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 內(nèi)毒素檢測與血培養(yǎng)結(jié)果:337例患者中內(nèi)毒素陽性35例，占10.39%，內(nèi)毒素含量:0.272±0.246EU/mL，內(nèi)毒素陽性組血培養(yǎng)出革蘭陰性菌19例，占54.09%，內(nèi)毒素陰性組302例，占89.61%，內(nèi)毒素正常組血培養(yǎng)出革蘭陰性菌2例，占0.66%;血培養(yǎng)陽性21例組，內(nèi)毒素含量:0.298±0.314EU/mL，血培養(yǎng)陰性316例組，內(nèi)毒素含量:0.04±0.045EU/mL，兩者比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05);在內(nèi)毒素陽性35例中，19例血培養(yǎng)出革蘭陰性菌的內(nèi)毒素平均含量為 0.325EU/mL，16例血培養(yǎng)陰性的內(nèi)毒素平均含量為:0.208EU/mL，兩者比較P＞0.05，差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2.2 內(nèi)毒素檢測的敏感度、特異度、陽性預(yù)測值、陰性預(yù)測值。以培養(yǎng)出革蘭陰性菌為標(biāo)準(zhǔn)，內(nèi)毒素檢測的敏感度為90.48%，特異度為94.94%，陽性預(yù)測值為54.29%，陰性預(yù)測值為99.34%，檢測結(jié)果見表1。

表1 內(nèi)毒素檢測和血培養(yǎng)陽性生結(jié)果比較

3 討 論

內(nèi)毒素的主要成分為脂多糖(lipopolysaccharide，LPS)，是革蘭陰性菌細胞壁的主要成分，LPS是炎癥反應(yīng)的關(guān)鍵遞質(zhì)，其化學(xué)成分主要是由O－特異性鏈、核心多糖、類脂A三部分組成［3］，LPS一般在細菌死后細胞壁崩解時釋出，活菌亦可以發(fā)皰形式將內(nèi)毒素釋出。革蘭陰性菌感染是院內(nèi)感染的主要致病菌，尤其是其所致的敗血癥更為嚴(yán)重。董玉梅［4］、馮穎［5］、邵敏偉［6］等分別在血培養(yǎng)陽性病原體分析中，革蘭陰性菌分別占:59.95%、52.3%、65.2%，本院2013年度統(tǒng)計158份血培養(yǎng)陽性標(biāo)本中，革蘭陰性菌占61.4%，基本一致。因此，及時判斷革蘭陰性菌引起的全身性感染對治療及預(yù)后起到重要作用。

細菌培養(yǎng)是循征感染醫(yī)學(xué)中細菌性感染性疾病病原學(xué)檢查的“金標(biāo)準(zhǔn)”。細菌培養(yǎng)在臨床疾病診斷及使用抗生素治療的過程中具有重要的意義，具有一定的不可替代性，由于細菌種類繁多，進行培養(yǎng)時不同的菌種所需要的條件(營養(yǎng)、溫度、酸堿度、氣體等)各異，這就難以確保在普通培養(yǎng)時對菌種培養(yǎng)鑒定的全面性，還有受臨床用藥、標(biāo)本采集等因素影響了培養(yǎng)的準(zhǔn)確性，同時培養(yǎng)時間過長也可能延誤臨床診斷病情，間接導(dǎo)致病人的病情加重，出現(xiàn)不良后果。

內(nèi)毒素檢測的方法有凝膠法、濁度法、比色法、酶聯(lián)免疫吸附測定法、流式細胞術(shù)、化學(xué)化光測定法等。我們現(xiàn)在使用由湛江安度斯生物有限公司提供的配套儀器及試劑，根據(jù)內(nèi)毒素與鱟試劑的C因子發(fā)生反應(yīng)，由內(nèi)毒素引發(fā)激活的凝固酶，切斷凝固蛋白原中的精氨酸肽鏈，形成凝固蛋白從而產(chǎn)生凝膠過程中的濁度變化，是用濁度儀定量的方法，本方法廣泛應(yīng)用于藥物檢測及臨床。在本次研究中，血培養(yǎng)出革蘭陰性菌組內(nèi)毒素含量明顯高于血培養(yǎng)陰性組(P＞0.05)，說明內(nèi)毒素測定與由革蘭陰性菌引起的全身性感染有良好的相關(guān)性，血漿內(nèi)毒素檢測的陽性率高于血培養(yǎng)法且檢測時間僅僅為75min，其敏感度及特異度均達90%以上;在35例內(nèi)毒素陽性標(biāo)本中僅有19例血培養(yǎng)出陰性菌，陽性預(yù)測值為54.29%，這與部分患者患肝臟疾病、胰腺疾病、潰瘍性結(jié)腸炎并發(fā)內(nèi)毒素血癥有一定關(guān)系。其次假陽性還可由于患者治療過程中使了脂肪乳、白蛋白、香茹多糖類、黃芪注射液、雙黃連注射液等藥物;各種相關(guān)的反應(yīng)條件、操作環(huán)境、標(biāo)準(zhǔn)品等等也可干擾試驗的準(zhǔn)確性。因些，在實際檢測過程中應(yīng)嚴(yán)格遵守操作規(guī)程，盡力排除各種干擾因素，使試驗結(jié)果更加準(zhǔn)確、真實可信。在21例血培養(yǎng)出革蘭陰性菌的患者中有2例血漿內(nèi)毒素檢測陰性，假陰性結(jié)果與感染早期未經(jīng)抗生素治療，內(nèi)毒素尚未釋出有關(guān)。我們本次研究的陰性預(yù)測值達99.34%。

［1］馬金玲，劉揚，李偉保，李忠信.內(nèi)毒素檢測與臨床應(yīng)用現(xiàn)狀［J］.國外醫(yī)學(xué)臨床生物化學(xué)與檢驗學(xué)分冊，2003，24 (2):64～65.

［2］Dellinger R P，Levy M M，Carlet J M，et al.Surviving Sepsis Campaign:International guidelines for management of severe sepsis and septic shock:2008［J］.Intensive Care Med，2008，34(1):17～60.

［3］焦炳華，余慶.內(nèi)毒素的結(jié)構(gòu)及其功能的關(guān)系［J］.國外醫(yī)學(xué)生分子生物學(xué)分冊，1987，9(4):168～170.

［4］董玉梅，靳桂明，劉海冰，等.從菌血癥病原體分析觀察醫(yī)院感染動向［J］.華南國防醫(yī)學(xué)雜志，2002，16(2):55～56.

［5］馮穎，黃晶，姚興偉，等.3500份血培養(yǎng)陽性結(jié)果分析和病原菌分布［J］.中國實驗診斷學(xué)，2009，13(10):1426～1247.

［6］邵敏偉，梁艷，周庭銀.4603例血培養(yǎng)病原菌種類分布與耐藥性分析［J］.中國抗生互雜志，2008，33(12):727～730.

B

10.3969/j.issn.1006－6233.2015.04.059

1006－6233(2015)04－0690－02