劉 丹

(遼寧省大連市血液中心 116001)

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·臨床探討·

核酸檢測(cè)應(yīng)用于獻(xiàn)血者血液篩查的臨床分析

劉 丹

(遼寧省大連市血液中心 116001)

目的 分析并評(píng)價(jià)核酸檢測(cè)應(yīng)用于獻(xiàn)血者血液篩查的臨床效果，從而為臨床提供依據(jù)和指導(dǎo)。方法 采用Roche Cobas S201系統(tǒng)對(duì)28 762名獻(xiàn)血者的血液標(biāo)本進(jìn)行篩查，所有血液標(biāo)本均經(jīng)常規(guī)酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)檢測(cè)，結(jié)果一律為陰性，篩查內(nèi)容包括HBV、HCV和HIV，同時(shí)對(duì)核酸檢測(cè)陽性的標(biāo)本進(jìn)行確證試驗(yàn)。結(jié)果 核酸檢測(cè)陽性26份，陽性檢出率為0.09%；核酸檢測(cè)陰性28 736份，陰性檢出率99.91%；確證試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)檢測(cè)到HBV RNA反應(yīng)陽性為17份(65.38%)；未檢測(cè)到 HBV DNA，HCV/HIV RNA為9份(34.62%)，陽性檢出率達(dá)65.38%。結(jié)論 核酸檢測(cè)應(yīng)用于獻(xiàn)血者血液篩查的效果較佳，既可有效提高獻(xiàn)血者的血液質(zhì)量，又可提高輸血的安全性，避免重癥血液疾病，顯著提高血液的應(yīng)用價(jià)值和安全性，值得相關(guān)采供血機(jī)構(gòu)在血液篩查中推廣使用。

獻(xiàn)血者；血液篩查；核酸檢測(cè)；臨床分析

近年來,隨著臨床輸血率增高，血液相關(guān)的傳染病發(fā)生率也逐漸增高，因此，此類傳染病的預(yù)防成為社會(huì)各界關(guān)注的焦點(diǎn)。雖然，血液相關(guān)機(jī)構(gòu)已按照法定要求對(duì)獻(xiàn)血者血液樣品進(jìn)行血清學(xué)檢查，HBsAg、抗-HCV、抗-HIV 和抗-TP采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)檢測(cè)，血液傳染病得到極大程度控制和改善，但是因輸液而產(chǎn)生的傳染病仍然不能夠完全避免[1-2]。有研究認(rèn)為，簡(jiǎn)單的血清學(xué)檢查存在病毒感染“窗口期”漏檢的現(xiàn)象，因此造成血液傳染病依然居高不下的現(xiàn)象?！按翱谄凇笔侵覆《靖腥竞螅瑱C(jī)體處于產(chǎn)生抗體的階段，普通的血清學(xué)檢查無法檢測(cè)出病毒抗體，但是機(jī)體卻實(shí)實(shí)在在存在病毒感染[3-4]。核酸檢測(cè)是指采用聚合酶鏈反應(yīng)技術(shù)直擊血液標(biāo)本中病毒的RNA或DNA結(jié)構(gòu)，從而提高檢測(cè)的特異性[5]。本研究對(duì)核酸檢測(cè)應(yīng)用于獻(xiàn)血者血液篩查的臨床效果進(jìn)行了分析并評(píng)價(jià)，以期為獻(xiàn)血者血液標(biāo)本更有效檢測(cè)和篩查提供依據(jù)，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集大連地區(qū)2014年1～10月無償獻(xiàn)血者的全血標(biāo)本，將其中28 762份經(jīng)常規(guī)ELISA 檢測(cè)陰性標(biāo)本作為研究對(duì)象，其中男性16 741名，女性12 021名；獻(xiàn)血者年齡18～58歲，平均(38.5±2.0)歲。

1.2 核酸檢測(cè)血液樣品的納入與排除標(biāo)準(zhǔn)[6]對(duì)無償獻(xiàn)血者血液標(biāo)本進(jìn)行檢測(cè)，檢測(cè)內(nèi)容包括HBsAg、抗-HCV、抗-HIV,所有檢測(cè)結(jié)果均為陰性的標(biāo)本進(jìn)行核酸檢測(cè)。

1.3 檢測(cè)方法

1.3.1 標(biāo)本制作 對(duì)獻(xiàn)血者進(jìn)行常規(guī)采血后，將血液樣品置入5 mL容積的乙二胺四乙酸抗凝真空試管中，共制作3個(gè)真空血液樣品試管。隨后將試管放入冰箱保存,溫度控制在0～6 ℃，血液采集后24 h內(nèi)對(duì)血液進(jìn)行血漿分離,最后1號(hào)試管(不帶分離膠)用于血清學(xué)篩查；2號(hào)試管(帶分離膠的無酶、無熱源)用于核取(NAT)檢測(cè),3號(hào)試管繼續(xù)保存。

1.3.2 儀器與試劑 酶聯(lián)免疫試劑有HBsAg(廈門新創(chuàng)、美國雅培)，抗-HCV(廈門新創(chuàng)、美國雅培)，抗-HIV(廈門新創(chuàng))，HIV抗原/抗體(法國伯樂)。核酸檢測(cè)試劑為羅氏診斷試劑:HBV、HCV、HIV(1型+2型)核酸聯(lián)合檢測(cè)試劑(PCR-熒光法)。儀器為AT plus2&FAME24/20(瑞士哈米爾頓)，STAR標(biāo)本混樣設(shè)備(瑞士哈米爾頓)，Cobas S201核酸檢測(cè)系統(tǒng)。

1.3.3 核酸檢測(cè) 檢測(cè)時(shí)應(yīng)用全自動(dòng)加樣儀和全自動(dòng)核酸提取、擴(kuò)增檢測(cè)系統(tǒng)將血液樣品混合后進(jìn)行常規(guī)檢測(cè):對(duì)每個(gè)獻(xiàn)血者取20 mL血漿樣品,將6名獻(xiàn)血者血漿樣品放入一個(gè)一級(jí)混樣池，放入后進(jìn)行核酸檢測(cè)，利用全自動(dòng)混樣儀加樣；一級(jí)混樣池標(biāo)本采用核酸定性篩查試劑盒,在全自動(dòng)核酸提取儀中應(yīng)用MGP磁珠分離技術(shù)原理提取核酸,核酸擴(kuò)增檢測(cè)儀擴(kuò)增檢測(cè)HBV、HCV、HIV靶序列,在PDM服務(wù)器中自動(dòng)判讀結(jié)果,每組檢測(cè)均設(shè)置質(zhì)控對(duì)照,每個(gè)一級(jí)混樣池均含內(nèi)對(duì)照；全自動(dòng)核酸提取、擴(kuò)增檢測(cè)系統(tǒng)檢出的陽性一級(jí)混樣池拆分為6個(gè)組,組成該一級(jí)混樣池的原始標(biāo)本做單標(biāo)本檢測(cè),單標(biāo)本檢測(cè)陽性判定為NAT陽性,單標(biāo)本檢測(cè)陰性判定為NAT陰性。

1.3.4 陽性確證 對(duì)上述核酸檢測(cè)結(jié)果顯示陽性的血液標(biāo)本進(jìn)行單標(biāo)本檢測(cè)，包括HBsAg、抗-HBs、HBeAg、抗-HBe、抗-HBc，從而確定結(jié)果的準(zhǔn)確性。

2 結(jié) 果

2.1 核酸檢測(cè)情況分析 檢測(cè)結(jié)果顯示，核酸檢測(cè)陽性26份，陽性檢出率為0.09%；核酸檢測(cè)陰性28 736份，陰性檢出率為99.91%。

2.2 陽性標(biāo)本分項(xiàng)確證情況 見表1。將核酸檢測(cè)檢出的26份血液樣品進(jìn)行確證試驗(yàn)和分項(xiàng)鑒別，發(fā)現(xiàn)檢測(cè)到HBV DNA反應(yīng)陽性為17份(65.38%)；未檢測(cè)到 HBV DNA,HCV/HIV RNA為9份(34.62%)，陽性檢出率達(dá)65.38%。

表1 陽性標(biāo)本分項(xiàng)確證情況

續(xù)表1 陽性標(biāo)本分項(xiàng)確證情況

注：R表示反應(yīng)性，-表示無數(shù)據(jù)，(+)表示陽性，(-)表示陰性。

3 討 論

早在20世紀(jì)末期，一些發(fā)達(dá)國家就開始將核酸檢測(cè)技術(shù)應(yīng)用于血液樣品的檢驗(yàn)，能夠有效對(duì)HIV等病毒進(jìn)行篩查，顯著提高血液檢測(cè)技術(shù)的同時(shí)大大降低了血液疾病的傳播。近年來，我國逐漸將核酸檢測(cè)技術(shù)應(yīng)用于無償獻(xiàn)血者的血液篩選，旨在提高輸血的安全性[7-8]。Cobas S201血液檢測(cè)系統(tǒng)是從美國引進(jìn)的,該系統(tǒng)的應(yīng)用機(jī)制為：利用磁珠捕獲方法提取分離靶核酸片段,并以實(shí)時(shí)熒光聚合酶鏈反應(yīng)檢測(cè)血液標(biāo)本的核酸濃度，該系統(tǒng)根據(jù)其檢測(cè)病毒種類不同，具有不同的工作靈敏度。本研究中利用的是混樣池的模式進(jìn)行檢測(cè)，將多個(gè)待檢驗(yàn)的樣品混合后，對(duì)混合樣品管進(jìn)行檢測(cè)[9-10]。由于該系統(tǒng)的靈敏度極高，即使樣品中病毒濃度較低，甚至微量，其依然可以檢測(cè)出病毒核酸；此外檢測(cè)中一旦出現(xiàn)核酸陽性標(biāo)本，應(yīng)該立即利用另一種核酸檢測(cè)系統(tǒng)進(jìn)一步做 HBV、HCV、HIV 分項(xiàng)鑒別試驗(yàn)和乙肝兩對(duì)半檢測(cè)[11-12]。

本研究分析并評(píng)價(jià)核酸檢測(cè)應(yīng)用于獻(xiàn)血者血液篩查的臨床效果。通過對(duì)28 762份血液樣品進(jìn)行篩查后發(fā)現(xiàn)，核酸檢測(cè)陽性26份，陽性檢出率為0.09%；核酸檢測(cè)陰性28 736份，陰性檢出率為99.91%；確證試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)檢測(cè)到HBV RNA反應(yīng)陽性為17份(65.38%)；未檢測(cè)到HBV DNA,HCV/HIV RNA為9份(34.62%)，陽性檢出率達(dá)65.38%。由此表明本次檢驗(yàn)中的9份樣品經(jīng)Cobas S201系統(tǒng)檢測(cè)為陽性，經(jīng)核酸確證試驗(yàn)檢測(cè)為陰性，兩種檢測(cè)結(jié)果存在不吻合之處，分析原因與兩種檢測(cè)系統(tǒng)的病毒檢測(cè)譜不同有關(guān)，Cobas S201系統(tǒng)能夠檢測(cè)出HIV-1-M、HIV-2 型病毒，而核酸確證系統(tǒng)不能夠檢測(cè)出，因此9份樣品不排除為HIV-1-M、HIV-2 型病毒的可能。本研究結(jié)果與其他研究結(jié)果相一致[13-15]。

綜上所述，核酸檢測(cè)應(yīng)用于獻(xiàn)血者血液篩查的效果較佳，既可有效提高獻(xiàn)血者的血液質(zhì)量，又可提高輸血的安全性，避免重癥血液疾病，顯著提高血液的應(yīng)用價(jià)值和安全性，值得相關(guān)采供血機(jī)構(gòu)在血液篩查中推廣使用。

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10.3969/j.issn.1672-9455.2015.23.055

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