魏良鑫，崔 燕，錢 和

(江南大學(xué)食品學(xué)院/江南大學(xué)食品科學(xué)與技術(shù)國家重點實驗室，江蘇無錫214122)

黃曲霉毒素(Aflatoxins，AF)主要是由產(chǎn)毒寄生曲霉和黃曲霉代謝產(chǎn)生的一類結(jié)構(gòu)相似的二呋喃香豆素化合物［1］。AFB1為主要存在形式且毒性最高，普遍存在于環(huán)境、土壤及糧食作物中，癌癥研究機(jī)構(gòu)(IARC)在1993年將其劃定為I類致癌物［2］。AFB1在CYP450酶的作用下能夠誘發(fā)生成大量活性氧(ROS)，攻擊細(xì)胞膜，引起脂質(zhì)過氧化，導(dǎo)致氧化應(yīng)激損傷［3］;同時，AFB1在體內(nèi)的代謝還會破壞 DNA、RNA、脂肪、蛋白質(zhì)及能量代謝，從而降低機(jī)體抗氧化能力［4］。此外，AFB1具有較強(qiáng)的免疫抑制毒性，主要通過作用于機(jī)體的細(xì)胞免疫系統(tǒng)，誘發(fā)炎癥反應(yīng)［5］。越來越多的研究表明，飼料或食物中連續(xù)長期攝入低劑量AFB1會嚴(yán)重危害動物和人類的健康。

蘆薈苷(Aloin)是蘆薈滲出物中常用的活性成分之一，因其優(yōu)異的通腸潤便功能已經(jīng)在減肥和治療便秘藥物中得到廣泛應(yīng)用。研究已經(jīng)證實蘆薈苷具有較強(qiáng)的抗氧化活性，能夠顯著抑制結(jié)腸損傷模型大鼠中MDA的生成，提高結(jié)腸中GSH、GSH-PX和CAT等抗氧化物的水平，進(jìn)而改善氧化應(yīng)激狀態(tài)［6］。此外，人們還發(fā)現(xiàn)蘆薈苷具有突出的抗炎功效，能夠抑制大鼠結(jié)腸中TNF-α和IL-1βmRNA的表達(dá)，從而減輕硫酸葡聚糖鈉引發(fā)的炎癥反應(yīng)［7］。以前的研究也發(fā)現(xiàn)蘆薈苷可以顯著抑制因長期酒精攝入而引起的小鼠肝臟炎癥反應(yīng)。

盡管很多數(shù)據(jù)證實了蘆薈苷具有提高抗氧化能力、改善免疫功能和抑制炎癥反應(yīng)的作用，但是是否能夠預(yù)防由AFB1誘導(dǎo)的大鼠氧化應(yīng)激和免疫抑制還不確定。筆者通過大鼠長期低劑量AFB1的攝入試驗，分析其體重變化、臟器指數(shù)、脾臟氧化狀態(tài)、免疫功能和炎性細(xì)胞因子的表達(dá)量，研究蘆薈苷對AFB1誘發(fā)大鼠免疫損傷的化學(xué)預(yù)防作用，從而為蘆薈的開發(fā)與利用提供試驗依據(jù)。

1 材料與方法

1．1 材料與儀器

1．1．1 材料。Wistar雄性大鼠(5周齡)，購自上海斯萊克實驗動物責(zé)任有限公司;蘆薈苷(純度≥98%)，購自成都瑞芬思生物科技有限公司;AFB1和考馬斯亮藍(lán)G-250，購自Sigma公司;福臨門玉米油，購自樂購超市;牛血清白蛋白(BSA)、NaCl、無水乙醚、無水乙醇，均購自國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，均為分析純產(chǎn)品;MDA、CAT、GSH、GSH-PX和SOD試劑盒，均購自南京建成生物工程有限公司;IgA、IgG、IgM、IL-1β、IL-6、TNF-α 和IFN-γ ELISA試劑盒，均購自 R＆D 公司;無液氮RNA樣品保存液、動物總RNA提取試劑盒，均購自上海捷瑞生物工程有限公司;RevertAid First Strand cDNA Synthesis Kit，購自 MBI Fermentas公司;Power SYBR?Green PCR Master Mix，均購自美國ABI公司。

1．1．2 儀器。PL2002電子分析天平，為Mettler Toledo儀器有限公司產(chǎn)品;HH-4數(shù)顯恒溫水浴鍋，為上海申順生物科技有限公司產(chǎn)品;M5酶標(biāo)儀，為美國Molecular Devices公司產(chǎn)品;超低溫冰箱，為美國 Thermo Scientific公司產(chǎn)品;IKA T10分散機(jī)，為德國IKA公司產(chǎn)品;Optima L-80XP超速離心機(jī)，為美國Beckman公司產(chǎn)品;One Drop微量紫外分光光度計，為上海采邑生物科技有限公司產(chǎn)品;PCR儀，為美國MJ公司產(chǎn)品;7900高通量快速實時熒光定量PCR儀，為美國ABI公司產(chǎn)品。

1．2 試驗方法

1．2．1 實驗動物的選擇和飼養(yǎng)管理。選用5周齡健康的雄性Wistar大鼠40只，購自上海斯萊克實驗動物有限公司。動物房溫度控制在(23±2)℃，濕度為(60±5)%，12 h晝夜交替，整個飼養(yǎng)期間保證供應(yīng)充足的食物和水，每周更換墊料2次。試驗中動物管理與飼養(yǎng)方法經(jīng)江南大學(xué)實驗動物管理與動物福利倫理委員會審查通過，所有操作嚴(yán)格按照江南大學(xué)實驗動物中心有關(guān)規(guī)定執(zhí)行。

1．2．2 動物分組及試驗設(shè)計。基礎(chǔ)飼料適應(yīng)性喂養(yǎng)7 d后，禁食不禁水12 h，稱重，并根據(jù)體重將大鼠隨機(jī)分成5組，每組8只，具體分組為:空白對照組;蘆薈苷高劑量空白對照組(苷空組，蘆薈苷劑量為30 mg/kgBW);AFB1模型組(模型組，AFB1劑量為200μg/kgBW);蘆薈苷低劑量干預(yù)組(低苷組，蘆薈苷劑量為10 mg/kgBW);蘆薈苷高劑量干預(yù)組(高苷組，蘆薈苷劑量為30 mg/kgBW)。

1～2周，所有大鼠每天根據(jù)體重灌胃10．0 ml/kg劑量的溶劑水(空白組和模型組)或者相應(yīng)劑量的蘆薈苷;3～7周，模型組和干預(yù)組大鼠每天以溶于玉米油中的200 μg/kgBW劑量AFB1灌胃，空白組灌胃玉米油;1 h后，所有組大鼠按照1～2周的操作繼續(xù)灌胃1次。

整個試驗期間，每天觀察大鼠的自主活動、反應(yīng)性、飲水、飲食、糞便排泄和毛發(fā)光澤等，大鼠每天稱重并記錄每組動物的攝食量，觀察并記錄體重變化。第7周試驗結(jié)束時，大鼠禁食12 h，稱重，乙醚麻醉，迅速用普通真空采血管心臟取血。斷頸處死，迅速打開腹腔，摘取脾臟和胸腺，生理鹽水清洗后稱重;取部分脾臟組織制備10%脾臟組織勻漿液，用于抗氧化能力的研究;取部分脾臟組織塊用無液氮RNA樣品保存液處理，用于后續(xù)RNA的研究。

1．2．3 脾臟組織抗氧化能力的測定。

1．2．3．1 10%脾臟組織勻漿液的制備。大鼠解剖后，立即準(zhǔn)確稱取部分脾臟組織，按重量∶體積的比例，加入9倍體積預(yù)冷的生理鹽水，使用手持式電動勻漿機(jī)在冰上制作濃度10%的脾臟組織勻漿液。

1．2．3．2 Bradford法測定蛋白濃度?？捡R斯亮藍(lán)G-250染料，在酸性溶液中與蛋白質(zhì)結(jié)合，使染料的最大吸收峰位置由465 nm變?yōu)?95 nm，溶液的顏色由棕黑色變?yōu)榉€(wěn)定的藍(lán)色，藍(lán)色深淺與蛋白質(zhì)含量成正比。測定波長595 nm處的吸光值，通過0．1 mg/ml的牛血清白蛋白(BSA)標(biāo)準(zhǔn)液繪制的標(biāo)準(zhǔn)曲線，計算出蛋白質(zhì)濃度。

1．2．3．3 抗氧化指標(biāo)的測定。根據(jù)試劑盒說明書步驟，測定脾臟組織中MDA、CAT、GSH、GSH-PX和SOD含量，而脾臟組織中蛋白濃度采用Bradford法測定。

1．2．4 血清生化指標(biāo)的測定。

1．2．4．1 血清的制備。心臟取血待凝結(jié)后，4℃下3 000 r/min離心10 min，分離上清液，將得到的血清進(jìn)行冷凍保存，用于后續(xù)生化指標(biāo)的測定。

1．2．4．2 血清中免疫球蛋白含量的測定。使用ELISA試劑盒檢測血清中IgA、IgG和IgM含量。

1．2．4．3 血清中細(xì)胞因子含量的測定。采用ELISA方法檢測血清中 IL-1β、IL-6、TNF-α 和 IFN-γ 的含量。

1．2．5 大鼠脾臟組織中mRNA的測定。

1．2．5．1 總RNA的提取。取出經(jīng)RNA保存液處理的脾臟組織約50 mg，梯度解凍，-20℃放置30 min后置于冰上。具體操作按照Generay動物總RNA提取試劑盒步驟進(jìn)行總RNA的提取。用One Drop測定RNA純度和濃度，根據(jù)所測定濃度，用滅菌的 DEPC-H2O稀釋至200 ng/μl，用于后續(xù)RNA逆轉(zhuǎn)錄。所有塑料制品一次性使用，玻璃和金屬制品嚴(yán)格按照要求處理后使用。

1．2．5．2 脾臟總RNA的逆轉(zhuǎn)錄。以稀釋后200 ng/μl的RNA樣品為模板，用Oligo(dT)18為引物進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄。RTPCR 反應(yīng)體系為:模板 RNA(1 μg 75．0 μl、Oligo(dT)181．0 μl、DEPC-H2O 6．0 μl，共12．0 μl。65 ℃孵育5 min，迅速置于冰上冷卻。然后，加入5×Reaction Buffer 4．0μl、RNA 酶抑制劑 1．0 μl、dNTP 2．0 μl、M-MuLV 逆轉(zhuǎn)錄酶1．0 μl，42 ℃孵育60 min，70℃5 min，終止反應(yīng)。將所得產(chǎn)物于-80℃超低溫冰箱中保存?zhèn)溆谩?/p>

1．2．5．3 實時熒光定量PCR。登陸NCBI網(wǎng)站，于GenBank數(shù)據(jù)庫中查閱各基因序列號，根據(jù)基因序列，用Primer 6設(shè)計目的基因和內(nèi)參基因甘油醛-3-磷酸脫氫酶(GAPDH)引物，由上海捷瑞生物工程有限公司合成，具體序列見表1。

表1 實時熒光定量PCR的引物序列

以“1．2．5．2”中RT-PCR 得到的 cDNA 為模板，稀釋適當(dāng)倍數(shù)，根據(jù)SYBR GreenⅠ嵌合熒光法進(jìn)行實時熒光定量PCR。實時熒光定量PCR反應(yīng)體系(10．0μl):SYBR Premix EX TaqⅡ5．0 μl、PCR 引物Mix 0．8 μl、cDNA 模板1．0 μl、雙蒸水3．2 μl。RT-PCR反應(yīng)條件:預(yù)變性95℃ 10 min;95℃變性15 s，60℃退火1 min，40個循環(huán)。檢測各模板 Ct值，通過2-△△Ct法進(jìn)行計算，以相對表達(dá)量進(jìn)行比較和評估。

1．2．6 數(shù)據(jù)處理。試驗數(shù)據(jù)以平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤(X±SE)表示。使用SPSS21．0軟件以O(shè)ne-way ANOVA法及Duncan檢驗對試驗數(shù)據(jù)進(jìn)行組間比較和差異顯著性檢驗。P＜0．05表示存在顯著性差異。數(shù)據(jù)繪圖采用Origin8．5軟件。

2 結(jié)果與分析

2．1 蘆薈多糖對AFB1中毒大鼠生長狀況和體重的影響 試驗期間，各組大鼠均無死亡現(xiàn)象。通過觀察各組生長狀況發(fā)現(xiàn)，空白組大鼠食欲良好，毛色正常、順滑有光澤，精神狀態(tài)正常;模型組大鼠食欲不振、體形消瘦，毛色暗淡無光，精神萎靡;蘆薈苷干預(yù)組與模型組大鼠相比，癥狀明顯好轉(zhuǎn)，生長狀況也有不同程度改善。

從圖1(A)可以看出，連續(xù)5周低劑量AFB1的攝入導(dǎo)致試驗結(jié)束時模型組大鼠體重顯著低于空白對照組;然而，灌胃AFB1的同時給予蘆薈苷干預(yù)有效減緩了AFB1引起體重增長緩慢的問題，與模型組大鼠相比低高劑量組大鼠體重都有顯著性提高。同時，試驗結(jié)束時，苷空組大鼠體重顯著低于空白對照組，這可能與蘆薈苷具有良好的通腸潤便和減肥作用有關(guān)。蘆薈苷低高劑量干預(yù)組大鼠之間的體重差異也驗證了這種說法。

由臟器質(zhì)量除以體重得到臟器指數(shù)，它是衡量機(jī)體健康狀態(tài)的初步觀察指標(biāo)之一。從圖1(B)可以看出，AFB1長期攝入對大鼠免疫器官脾臟和胸腺造成了損傷。與空白組相比，模型組大鼠脾臟指數(shù)和胸腺指數(shù)均顯著性降低，表明AFB1對機(jī)體免疫系統(tǒng)產(chǎn)生較大損傷，造成體重降低，免疫器官受損。蘆薈苷的干預(yù)可以有效緩解AFB1造成的免疫器官萎縮，低高苷組大鼠的脾臟指數(shù)和胸腺指數(shù)均顯著高于模型組，并與空白對照組正常水平相當(dāng)，由此可以推測這可能與蘆薈苷具有良好的抗炎作用有關(guān)。

2．2 蘆薈苷對AFB1中毒大鼠脾臟抗氧化能力的影響 通過測定大鼠脾臟中的MDA、CAT、GSH、GSH-PX和SOD來衡量其抗氧化能力。從表2可以看出，與空白組相比長期AFB1的攝入顯著提高模型組大鼠脾臟中脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物MDA的含量;蘆薈苷干預(yù)組可以使MDA水平顯著降低，甚至顯著低于空白組，而低苷組和高苷組之間沒有顯著差異。同時，模型組大鼠脾臟各抗氧化物指標(biāo)(包括CAT、GSH、GSH-PX和SOD)均顯著低于空白組，其活性分別降至空白組的 75．7%、77．6%、48．2%和 75．2% ，表明 AFB1的連續(xù)攝入顯著降低了大鼠脾臟的抗氧化能力，誘發(fā)了嚴(yán)重的氧化應(yīng)激損傷;而蘆薈苷的干預(yù)可以使大鼠脾臟各抗氧化物水平顯著提高，除GSH-PX以外均恢復(fù)至正常水平。

表2 蘆薈苷對大鼠脾臟抗氧化狀態(tài)的影響

2．3 蘆薈苷對AFB1中毒大鼠血清免疫球蛋白含量的影響 從圖2可以看出，與空白組相比，模型組免疫球蛋白IgA、IgG和IgM含量均無顯著變化(P≥0．05)，說明5周200 μg/kgBW的AFB1攝入對大鼠的體液免疫應(yīng)答無顯著影響;同時，蘆薈苷的干預(yù)也未對各免疫球蛋白的含量產(chǎn)生顯著影響。

2．4 蘆薈苷對AFB1中毒大鼠血清中炎性細(xì)胞因子的影響 從圖3可以看出，與空白組相比，長期低劑量AFB1的攝入顯著增加了大鼠血清中IL-1β、IL-6、TNF-α和IFN-γ細(xì)胞因子的水平，同時通過苷空組和空白組的對比結(jié)果可以排除蘆薈苷的攝入對這4種細(xì)胞因子可能造成的影響。在蘆薈苷的干預(yù)下IL-1β、IL-6、TNF-α和IFN-γ細(xì)胞因子的含量均顯著下降，其中對IL-1β和TNF-α的影響還呈現(xiàn)出一定的劑量差異性。

2．5 蘆薈苷對AFB1中毒大鼠脾臟中炎癥相關(guān)基因mRNA表達(dá)的影響 試驗中通過RT-PCR對大鼠脾臟中炎性細(xì)胞因子基因mRNA的表達(dá)量進(jìn)行了檢測。從圖4可以看出，長期低劑量AFB1的暴露使脾臟中IL-1β、IL-6、TNF-α和IFN-γ的mRNA表達(dá)量顯著提高，分別達(dá)到空白組的2．7倍、2．6倍、2．1倍和1．75倍。與模型組相比，蘆薈苷的干預(yù)下IL-1β、IL-6和IFN-γ的基因表達(dá)量均有顯著性下降，其中低高劑量組IL-1β的表達(dá)量分別下降7．4%和29．6%，IL-6表達(dá)量分別下降38．5%和42．3%，IFN-γ表達(dá)量分別下降20．0%和31．4%。低高劑量蘆薈苷對TNF-α的mRNA表達(dá)量也有降低效果，但未達(dá)到顯著水平。

3 結(jié)論與討論

筆者研究發(fā)現(xiàn)蘆薈苷對亞慢性低劑量AFB1致大鼠免疫損傷具有一定的預(yù)防作用，主要通過抑制AFB1暴露引起的體重增長緩慢和免疫器官萎縮，改善脾臟抗氧化能力，抑制炎性細(xì)胞因子表達(dá)來發(fā)揮作用。該研究結(jié)果可為蘆薈的開發(fā)與利用提供依據(jù)。

研究表明，AFB1暴露會影響機(jī)體體重自我調(diào)節(jié)的能力，引起食欲不振，營養(yǎng)物質(zhì)不能充分利用，進(jìn)而導(dǎo)致體重下降［8］。Osborne 等［9］指出 AFB1可以改變消化道酶酶活，通過降低胰脂酶、淀粉酶和胰蛋白酶等活性，引起吸收障礙，從而導(dǎo)致體重增長緩慢。另外，AFB1的環(huán)氧產(chǎn)物AFBO可以結(jié)合DNA和蛋白質(zhì)，改變酶反應(yīng)工程，通過引起糖原異生以及檸檬酸循環(huán)、脂肪酸合成紊亂等，導(dǎo)致體重增長緩慢［10］。這與該試驗AFB1導(dǎo)致大鼠體重增長緩慢的結(jié)果相一致，而蘆薈苷對該試驗結(jié)果具有明顯改善作用的具體原因還需要進(jìn)一步研究。

有學(xué)者認(rèn)為AFB1中毒過程中氧化應(yīng)激是引發(fā)與促進(jìn)免疫器官損傷的一大機(jī)制。當(dāng)人體或動物攝入AFB1后，可以誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生大量ROS，攻擊細(xì)胞膜脂質(zhì)，發(fā)生脂質(zhì)過氧化，改變細(xì)胞膜的流動性和通透性，導(dǎo)致機(jī)體的氧化應(yīng)激損傷［3］。MDA是多不飽和脂質(zhì)過氧化的主要產(chǎn)物，可以通過測定MDA含量來間接了解細(xì)胞的受損程度和機(jī)體脂質(zhì)過氧化的嚴(yán)重程度［11］。GSH、SOD、CAT和 GSH-PX 是機(jī)體內(nèi)源性抗氧化防御系統(tǒng)的重要組成部分，在清除自由基和維持細(xì)胞內(nèi)氧化還原平衡方面發(fā)揮著重要作用。研究表明，AFB1的攝入造成了機(jī)體抗氧化物水平的下降，從而引發(fā)機(jī)體的氧化應(yīng)激損傷［12］。筆者在該試驗中得到了相同的結(jié)果，AFB1主要通過提高脾臟中脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物MDA含量和降低內(nèi)源性抗氧化物GSH、SOD、CAT及GSH-PX水平來造成機(jī)體氧化應(yīng)激損傷，而蘆薈苷通過有效的抗氧化能力來有效清除ROS，抑制脾臟脂質(zhì)過氧化，提高抗氧化水平，減輕氧化應(yīng)激損傷，從而起到保護(hù)脾臟的作用。

血清免疫球蛋白的測定是檢查體液免疫功能最常用的方法［13］。IgA、IgG、IgM水平就可以反映血清免疫球蛋白的水平。AFB1對免疫系統(tǒng)具有較強(qiáng)的抑制作用，能夠降低機(jī)體對寄生蟲、真菌及細(xì)菌繼發(fā)感染的抵抗能力。Panangala等［14］報道AFB1的暴露顯著影響小鼠血清中IgA和IgG含量。研究表明，AFB1的攝入增加了豬血清中免疫球蛋白含量(IgG和IgM)［15］。然而，也有一些研究表明AFB1不影響機(jī)體的體液免疫［16］，這與試驗結(jié)果相一致，AFB1對大鼠血清中IgA、IgG和IgM含量沒有顯著影響。究其原因，可能與AFB1暴露的劑量、時間，不同試驗物種的敏感性以及其他試驗條件(如動物的健康狀況和管理狀況)有關(guān)［17］。

研究表明，AFB1不僅可以誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生免疫抑制，也能夠造成炎癥反應(yīng)，從而損傷機(jī)體。IL-1β在免疫調(diào)節(jié)及炎癥進(jìn)程中扮演著重要角色，主要通過刺激炎癥和自身免疫病相關(guān)基因的表達(dá)，誘導(dǎo)環(huán)氧化酶2、一氧化氮合酶、干擾素γ和黏附分子等效應(yīng)蛋白的表達(dá)［18］。IL-6是一種具有多重免疫調(diào)節(jié)功能的細(xì)胞因子，現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)在多種與炎癥反應(yīng)相關(guān)的疾病中IF-6異常過度升高，其可以作為預(yù)測炎癥反應(yīng)程度的重要標(biāo)志物之一［19］。TNF-α由單核巨噬細(xì)胞產(chǎn)生，可通過負(fù)反饋調(diào)節(jié)激活單核巨噬細(xì)胞釋放大量IL-1β、IL-6和IFN-γ等促炎因子，在整個炎癥過程中起著核心作用［20］。IFN-γ主要是由CD4+Th1細(xì)胞和NK細(xì)胞分泌的促炎癥細(xì)胞因子，參與了多種自身免疫性疾病的發(fā)生發(fā)展，可激活巨噬細(xì)胞誘導(dǎo)一氧化氮合酶(iNOS)的產(chǎn)生，促進(jìn)NO的合成。現(xiàn)已確認(rèn)IL-1β、IL-6、TNF-α 和 IFN-γ 是機(jī)體內(nèi)重要的促炎細(xì)胞因子［21］。在生理狀態(tài)下人體液中 IL-1β、IL-6、TNF-α 和 IFN-γ水平較低，但在病理狀態(tài)下其分泌量增加引起各種炎癥因子的瀑布式釋放，從而導(dǎo)致炎癥反應(yīng)，引起組織細(xì)胞損傷。脾臟是機(jī)體內(nèi)最大的外周免疫器官，在炎癥反應(yīng)和獲得性免疫應(yīng)答方面發(fā)揮著重要作用。因此，通過測定脾臟中這4種細(xì)胞因子含量可以間接反映機(jī)體的免疫狀態(tài)。筆者通過檢測大鼠血清中炎性細(xì)胞因子含量和脾臟中相關(guān)細(xì)胞因子基因mRNA的表達(dá)量發(fā)現(xiàn)蘆薈苷對長期低劑量AFB1連續(xù)攝入引起的炎癥反應(yīng)具有一定的改善作用，進(jìn)一步證實了蘆薈苷良好的抗炎作用，但其作用的機(jī)理還需要進(jìn)一步研究。

［1］HOLMQUIST G U，WALKER H W，STAHR H M．Influence of Temperature，pH，Water Activity and Antifungal Agents on Growth of Aspergillus flavus and A．parasiticus［J］．Journal of Food Science，1983，48(3):778-782．

［2］IARC．Some Naturally Occurring Substances:Food Items and Constituents，Heterocyclic Aromatic Amines and Mycotoxins［C］//IARC Monographs on the Evaluation of Carcinogenic Risks to Humans．France:IARC，1993:243-395．

［3］CHOI K C，LEE B S，CHUNGW T，et al．Protective effects of apigenin and quercetin on aflatoxin B1-induced immunotoxicity in mice［J］．Food Science and Biotechnology，2010(4):987-992．

［4］BUSBY W F，WOGAN G N．Aflatoxins［C］//SEARLE E S．Chemical Carcinogens，ACSMonograph．Washington:American Chemical Society，1984:945-1136．

［5］SHAY K P，MOREAUR F，SMITH E J，et al．Alpha-lipoic acid as a dietary supplement:molecular mechanisms and therapeutic potential［J］．Biochim Biophys Acta，2009(10):1149-1160．

［6］HAMIZA OO，REHMANM U，KHANR，et al．Chemopreventive effects of aloin against 1，2-dimethylhydrazine-induced preneoplastic lesions in the colon of Wistar rats［J］．Human ＆ Experimental Toxicology，2014(2):148-163．

［7］PARK M Y，KWONH J，SUNGM K．Dietary aloin，aloesin，or aloe-gel exerts anti-inflammatory activity in a rat colitis model［J］．Life Sci，2011(11/12):486-492．

［8］RASTOGIR，SRIVASTAVA A K，RASTOGI A K．Biochemical changes induced in liver and serum of aflatoxin B-1-treated male Wistar rats:Preventive effect of picroliv［J］．Pharmacology＆ Toxicology，2001(2):53-58．

［9］OSBORNE D J，HUFFW E，HAMILTON PB，et al．Comparison of ochratoxin，aflatoxin，and T-2 toxin for their effects on selected parameters related to digestion and evidence for specific metabolism of carotenoids in chickens［J］．Poultry Science，1982(8):1646-1652．

［10］LESSON S，DIAZG，SUMMERSJ．Poultry Metabolic Disorders and Mycotoxins［M］．Montreal Canada:University Books，1995．

［11］FREEMAN B A，CRAPO J D．Hyperoxia increases oxygen radical production in rat lungs and lung mitochondria［J］．The Journal of Biological Chemistry，1981(21):10986-10992．

［12］YENER Z，CELIK I，ILHAN F，et al．Effects of Urtica dioica L．seed on lipid peroxidation，antioxidants and liver pathology in aflatoxin-induced tissue injury in rats［J］．Food Chem Toxicol，2009(2):418-424．

［13］MEISSONNIERGM，PINTON P，LAFFITTE J，et al．Immunotoxicity of aflatoxin B1:impairment of the cell-mediated response to vaccine antigen and modulation of cytokineexpression［J］．Toxicol Appl Pharmacol，2008(2):142-149．

［14］PANANGALA V S，GIAMBRONE J J，DIENER U L，et al．Effects of aflatoxin on the growth performance and immune responses of weanling swine［J］．American Journal of Veterinary Research，1986(9):2062-2067．

［15］VANHEUGTEN E，SPEARS J W，COFFEY M T，et al．The effect of methionine and aflatoxin on immune function in weanling pigs［J］．Journal of Animal Science，1994(3):658-664．

［16］MARY V S，THEUMER M G，ARIASSL，et al．Reactive oxygen species sources and biomolecular oxidative damage induced by aflatoxin B1 and fumonisin B1 in rat spleen mononuclear cells［J］．Toxicology，2012(2/3):299-307．

［17］DWIVEDI N，F(xiàn)LORA G，KUSHWAHA P，et al．Alpha-lipoic acid protects oxidative stress，changes in cholinergic system and tissue histopathology during co-exposure to arsenic-dichlorvos in rats［J］．Environ Toxicol Pharmacol，2014(1):7-23．

［18］BHAT I A，NAYKOON A，QASIM I，et al．Association of interleukin 1 beta(IL-1β)polymorphism with mRNA expression and risk of non small cell lung cancer［J］．Meta Gene，2014，41:123-133．

［19］RINCON M．Interleukin-6:from an inflammatory marker to a target for inflammatory diseases［J］．Trends Immunol，2012(11):571-577．

［20］高炳豪．TNF在炎癥中的作用［J］．醫(yī)師進(jìn)修雜志，1999，22(11):55-56．

［21］WILSON M R，CHOUDHURY S，TAKATA M．Pulmonary inflammation induced by high-stretch ventilation is mediated by tumor necrosis factor signaling in mice［J］．American Journal of Physiology-Lung Cellular and Molecular Physiology，2005(4):599-607．