肖亞雄，彭宇生，王 鵬，黃忠團(tuán)，代小琴

(四川省宜賓市第一人民醫(yī)院檢驗(yàn)科 644600)

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·論 著·

ATB STREP 5對(duì)肺炎鏈球菌藥敏試驗(yàn)結(jié)果判讀的缺陷性分析*

肖亞雄，彭宇生，王 鵬，黃忠團(tuán)，代小琴

(四川省宜賓市第一人民醫(yī)院檢驗(yàn)科 644600)

目的 探討ATB STREP 5肺炎鏈球菌藥敏試劑盒在用于肺炎鏈球菌藥敏結(jié)果判讀中存在的缺陷。方法 以臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化協(xié)會(huì)(CLSI)M100-S23文件提供的肺炎鏈球菌對(duì)應(yīng)抗菌藥物折點(diǎn)為標(biāo)準(zhǔn)，對(duì)ATB STREP 5試劑盒抗菌藥物覆蓋情況與各抗菌藥物折點(diǎn)濃度進(jìn)行對(duì)比分析。結(jié)果 ATB STREP 5試劑盒不包括CLSI推薦的碳青霉烯類和噁唑烷酮類等抗菌藥物。ATB STREP 5試劑盒提供的11種抗菌藥物中，有9種抗菌藥物折點(diǎn)與CLSI M100-S23文件推薦的抗菌藥物折點(diǎn)不一致，可能導(dǎo)致臨床藥敏報(bào)告出現(xiàn)假耐藥的情況。結(jié)論 在現(xiàn)行CLSI參考標(biāo)準(zhǔn)下，單獨(dú)使用ATB STREP 5試劑盒進(jìn)行肺炎鏈球菌藥敏試驗(yàn)將產(chǎn)生較大誤差甚至錯(cuò)誤，必須聯(lián)合使用其他藥敏試驗(yàn)方法進(jìn)行修正后方可發(fā)出報(bào)告。

肺炎鏈球菌； 耐藥性； 缺陷

肺炎鏈球菌為苛養(yǎng)菌，臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化協(xié)會(huì)(CLSI)推薦使用最低抑菌濃度(MIC)法及E-test法來測定該菌的耐藥性[1]。法國生物梅里埃公司所生產(chǎn)的ATB STREP 5藥敏試劑盒為MIC法，其操作簡單，適合于臨床運(yùn)用，在國內(nèi)已得到了廣泛應(yīng)用[2-4]。但是筆者在應(yīng)用該試劑盒的過程中發(fā)現(xiàn)，該試劑盒在抗菌藥物種類的范圍設(shè)置及抗菌藥物敏感、中介、耐藥折點(diǎn)設(shè)置方面存在缺陷?？赡軐?duì)臨床用藥造成誤導(dǎo)。本研究以CLSI M100-S23文件中的2G-肺炎鏈球菌抑菌圈直徑和MIC解釋作為參考標(biāo)準(zhǔn)(以下簡稱CLSI標(biāo)準(zhǔn))[1]，對(duì)ATB STREP 5肺炎鏈球菌藥敏試劑盒所包含的抗菌藥物覆蓋情況、對(duì)應(yīng)MIC等在臨床運(yùn)用中的局限性進(jìn)行了分析，以期引起使用該試劑盒的檢驗(yàn)同仁的注意，更好地為臨床抗菌藥物的合理使用提供正確的指導(dǎo)。

1 材料與方法

1.1 材料 ATB STREP 5肺炎鏈球菌藥敏試劑盒(生物梅里埃公司生產(chǎn))。

1.2 方法 以CLSI M100-S23文件中的2G-肺炎鏈球菌抑菌圈直徑和MIC解釋作為參考標(biāo)準(zhǔn)，對(duì)生物梅里埃公司生產(chǎn)的ATB STREP 5肺炎鏈球菌藥敏試劑盒所提供的11種抗菌藥物所覆蓋的范圍及對(duì)應(yīng)折點(diǎn)情況與CLSI M100-S23文件進(jìn)行對(duì)比分析，查找差異，并對(duì)其在臨床運(yùn)用中可能出現(xiàn)的誤差或錯(cuò)誤進(jìn)行分析。

2 結(jié) 果

2.1 ATB STREP 5試劑盒抗菌藥物種類覆蓋情況分析 ATB STREP 5試劑盒一共包含11種抗菌藥物：青霉素、阿莫西林、頭孢噻肟、紅霉素、喹奴普丁/達(dá)福普丁、克林霉素、四環(huán)素、左氧氟沙星、氯霉素、萬古霉素、復(fù)方磺胺甲噁唑。上述11種抗菌藥物覆蓋了青霉素類、三代頭孢菌素類、大環(huán)內(nèi)酯類、鏈陽霉素類、林可酰胺類、四環(huán)素類、氟喹諾酮類、氯霉素、糖肽類、葉酸代謝途徑抑制劑類抗菌藥物；CLSI M100-S23文件對(duì)于肺炎鏈球菌藥敏試驗(yàn)所選藥物除要求覆蓋上述各類抗菌藥物外，還要求包括碳青霉烯類(美羅培南)、噁唑烷酮類(利奈唑胺)、二代頭孢菌素類(頭孢呋辛)、頭孢洛林(非腦膜炎)及安莎霉素類(利福平，不單獨(dú)使用)等，見表1。

2.2 ATB STREP 5試劑盒與CLSI標(biāo)準(zhǔn)推薦抗菌藥物折點(diǎn)比較分析 從表1可見，ATB STREP 5試劑盒提供的11種抗菌藥物中，半數(shù)以上抗菌藥物的濃度范圍與現(xiàn)行CLSI標(biāo)準(zhǔn)折點(diǎn)存在差異，具體表現(xiàn)：青霉素濃度范圍為0.031～4.000 μg/mL，而針對(duì)于非腦脊液分離出的肺炎鏈球菌MIC≥8 μg/mL才可判讀為耐藥，如果根據(jù)試劑盒說明書進(jìn)行判讀，當(dāng)4 μg/mL最高濃度孔中有細(xì)菌生長，可能實(shí)際MIC為4～8 μg/mL，應(yīng)判讀為中介，根據(jù)說明書可誤判為耐藥；紅霉素、喹奴普丁/達(dá)福普丁、克林霉素、四環(huán)素、氯霉素等6種抗菌藥物僅提供了1個(gè)濃度折點(diǎn)，這一折點(diǎn)正好為敏感折點(diǎn)，根據(jù)試劑盒說明書，單一濃度抗菌藥物測試孔中如果有細(xì)菌生長則判讀為耐藥，而實(shí)際上根據(jù)CLSI標(biāo)準(zhǔn)，可能實(shí)際為中介的抗菌藥物被誤判為耐藥；阿莫西林、左氧氟沙星、復(fù)方磺胺甲噁唑則因?yàn)槟退幑拯c(diǎn)的上調(diào)也可能誤將原本中介的抗菌藥物誤判為耐藥，見表1。

表1 ATB STREP 5試劑盒濃度范圍與CLSI M100-S23文件折點(diǎn)比較

注：CSF表示腦脊液分離菌株；非CSF表示非腦脊液分離菌株；-表示無數(shù)據(jù)。

3 討 論

常規(guī)臨床檢驗(yàn)指標(biāo)如血糖、血脂、血細(xì)胞計(jì)數(shù)參考范圍或臨床標(biāo)準(zhǔn)相對(duì)較穩(wěn)定，因此一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)或參考值可以沿用多年。而細(xì)菌耐藥性與上述檢驗(yàn)指標(biāo)不同，因?yàn)榧?xì)菌耐藥性與臨床抗菌藥物的合理/不合理使用[5-6]，以及細(xì)菌本身耐藥基因的變異等諸多因素存在直接關(guān)聯(lián)[7-8]，因此對(duì)于細(xì)菌耐藥、敏感判讀的折點(diǎn)相對(duì)上述其他臨床指標(biāo)而言變異較大。CLSI標(biāo)準(zhǔn)每年更新，臨床微生物實(shí)驗(yàn)室通常采取當(dāng)年或上一年頒布的標(biāo)準(zhǔn)作為參照，其中M100-S23文件由CLSI于 2013年頒布。

肺炎鏈球菌是臨床標(biāo)本中分離率較高的一種鏈球菌，其中大部分屬于致病菌或條件致病菌，因此需要出具臨床藥敏報(bào)告以供臨床醫(yī)生參考。選擇正確的試驗(yàn)方法和試劑盒是滿足臨床要求所必需的。ATB STREP 5試劑盒操作簡單、判讀方便、無需特殊儀器，較傳統(tǒng)的微量肉湯稀釋法或藥敏紙片法更適合于臨床運(yùn)用。但是，由于該試劑盒提供的反應(yīng)孔內(nèi)抗菌藥物濃度是固定的，同一種抗菌藥物包括1個(gè)低濃度孔(用于敏感的判讀)和1個(gè)高濃度孔(用于耐藥的判讀)，有的僅有1個(gè)判讀敏感的濃度孔。一旦抗菌藥物敏感、耐藥判讀折點(diǎn)發(fā)生變化時(shí)，則有可能導(dǎo)致判讀結(jié)果錯(cuò)誤，對(duì)臨床用藥產(chǎn)生誤導(dǎo)。

本研究將ATB STREP 5試劑盒說明書提供的抗菌藥物濃度和CLSI標(biāo)準(zhǔn)制訂的折點(diǎn)進(jìn)行比較，發(fā)現(xiàn)從抗菌藥物覆蓋范圍來看，該試劑盒提供的抗菌藥物種類缺少碳青霉烯類(美羅培南)、噁唑烷酮類(利奈唑胺)、二代頭孢菌素類(頭孢呋辛)等抗菌藥物。其中CLSI標(biāo)準(zhǔn)指出，厄他培南、亞胺培南、美羅培南可用于治療肺炎鏈球菌引起的感染，而該試劑盒沒有覆蓋。另外從抗菌藥物濃度范圍來看，除頭孢噻肟與萬古霉素2種抗菌藥物與CLSI標(biāo)準(zhǔn)一致外，其余9種抗菌藥物均存在濃度覆蓋范圍過窄的情況，可能導(dǎo)致原本中介的抗菌藥物被誤判為耐藥，導(dǎo)致臨床原本可以使用的抗菌藥物受到限制。

加強(qiáng)抗菌藥物的合理使用，一直是國內(nèi)外臨床專家、微生物專家呼吁和關(guān)注的問題[9]。就目前來看，國內(nèi)臨床實(shí)驗(yàn)室所使用的梅里埃ATBSTREP5肺炎鏈球菌藥敏試劑盒與CLSI標(biāo)準(zhǔn)存在較大差異。因此，如果采用該試劑盒結(jié)果出報(bào)告需要慎重，對(duì)于未覆蓋的抗菌藥物需要補(bǔ)充其他覆蓋該抗菌藥物的試劑盒進(jìn)行補(bǔ)充，或用手工方法進(jìn)行補(bǔ)充報(bào)告，對(duì)于使用ATBSTREP5試劑盒判讀為耐藥的抗菌藥物報(bào)告一定要謹(jǐn)慎，需要其他試驗(yàn)進(jìn)行補(bǔ)充驗(yàn)證為耐藥后方可發(fā)出，以防止中介誤判為耐藥而發(fā)出錯(cuò)誤報(bào)告，誤導(dǎo)臨床用藥。

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Defect analysis of ATB STREP 5 kit in the susceptibility test of Streptococcus pneumoniae*

XIAOYa-xiong，PENGYu-sheng，WANGPeng，HUANGZhong-tuan,DAIXiao-qin

(DepartmentofClinicalLaboratory,theFirstPeople′sHospitalofYibinCity,Yibin,Sichuan644600,China)

Objective To explore the defects of ATB STREP 5 kit in the susceptibility test of Streptococcus pneumoniae.Methods The varieties and breakpoint concentrations of antibiotics included in ATB STREP 5 kit were analyzed by using the breakpoint concentrations of anti-Streptococcus pneumonia drugs recommend in CLSI document M100-S23 as standard.Results ATB STREP 5 kit did not include carbapenems and oxazolidinone antibacterial drugs that were recommended by CLSI. Among 11 kinds of antibacterial drugs included in ATB STREP 5 kit,there were 9 kinds of antibacterial drugs having different breakpoint concentrations compared with CLSI M100-S23 standard. These defects might lead to false resistant results in reports.Conclusion According to current CLSI reference standards,if ATB STREP 5 kit was the single method used for susceptibility detection of Streptococcus pneumonia,errors even mistakes would occur. The susceptibility results of Streptococcus pneumonia detected by ATB STREP 5 kit should be corrected by other methods before reporting.

Streptococcus pneumoniae； drug resistance； defection

四川省宜賓市科技局重點(diǎn)科技計(jì)劃資助項(xiàng)目(2012SF005)。

肖亞雄，男，主管技師，碩士，主要從事臨床微生物耐藥性研究。

10.3969/j.issn.1672-9455.2015.07.015

A

1672-9455(2015)07-0915-02

2014-10-16

2015-01-15)