肖亞雄，彭宇生，王 鵬，黃忠團，代小琴

(四川省宜賓市第一人民醫(yī)院檢驗科 644600)

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·論 著·

ATB STREP 5對肺炎鏈球菌藥敏試驗結(jié)果判讀的缺陷性分析*

肖亞雄，彭宇生，王 鵬，黃忠團，代小琴

(四川省宜賓市第一人民醫(yī)院檢驗科 644600)

目的 探討ATB STREP 5肺炎鏈球菌藥敏試劑盒在用于肺炎鏈球菌藥敏結(jié)果判讀中存在的缺陷。方法 以臨床實驗室標準化協(xié)會(CLSI)M100-S23文件提供的肺炎鏈球菌對應(yīng)抗菌藥物折點為標準，對ATB STREP 5試劑盒抗菌藥物覆蓋情況與各抗菌藥物折點濃度進行對比分析。結(jié)果 ATB STREP 5試劑盒不包括CLSI推薦的碳青霉烯類和噁唑烷酮類等抗菌藥物。ATB STREP 5試劑盒提供的11種抗菌藥物中，有9種抗菌藥物折點與CLSI M100-S23文件推薦的抗菌藥物折點不一致，可能導致臨床藥敏報告出現(xiàn)假耐藥的情況。結(jié)論 在現(xiàn)行CLSI參考標準下，單獨使用ATB STREP 5試劑盒進行肺炎鏈球菌藥敏試驗將產(chǎn)生較大誤差甚至錯誤，必須聯(lián)合使用其他藥敏試驗方法進行修正后方可發(fā)出報告。

肺炎鏈球菌； 耐藥性； 缺陷

肺炎鏈球菌為苛養(yǎng)菌，臨床實驗室標準化協(xié)會(CLSI)推薦使用最低抑菌濃度(MIC)法及E-test法來測定該菌的耐藥性[1]。法國生物梅里埃公司所生產(chǎn)的ATB STREP 5藥敏試劑盒為MIC法，其操作簡單，適合于臨床運用，在國內(nèi)已得到了廣泛應(yīng)用[2-4]。但是筆者在應(yīng)用該試劑盒的過程中發(fā)現(xiàn)，該試劑盒在抗菌藥物種類的范圍設(shè)置及抗菌藥物敏感、中介、耐藥折點設(shè)置方面存在缺陷?？赡軐εR床用藥造成誤導。本研究以CLSI M100-S23文件中的2G-肺炎鏈球菌抑菌圈直徑和MIC解釋作為參考標準(以下簡稱CLSI標準)[1]，對ATB STREP 5肺炎鏈球菌藥敏試劑盒所包含的抗菌藥物覆蓋情況、對應(yīng)MIC等在臨床運用中的局限性進行了分析，以期引起使用該試劑盒的檢驗同仁的注意，更好地為臨床抗菌藥物的合理使用提供正確的指導。

1 材料與方法

1.1 材料 ATB STREP 5肺炎鏈球菌藥敏試劑盒(生物梅里埃公司生產(chǎn))。

1.2 方法 以CLSI M100-S23文件中的2G-肺炎鏈球菌抑菌圈直徑和MIC解釋作為參考標準，對生物梅里埃公司生產(chǎn)的ATB STREP 5肺炎鏈球菌藥敏試劑盒所提供的11種抗菌藥物所覆蓋的范圍及對應(yīng)折點情況與CLSI M100-S23文件進行對比分析，查找差異，并對其在臨床運用中可能出現(xiàn)的誤差或錯誤進行分析。

2 結(jié) 果

2.1 ATB STREP 5試劑盒抗菌藥物種類覆蓋情況分析 ATB STREP 5試劑盒一共包含11種抗菌藥物：青霉素、阿莫西林、頭孢噻肟、紅霉素、喹奴普丁/達福普丁、克林霉素、四環(huán)素、左氧氟沙星、氯霉素、萬古霉素、復(fù)方磺胺甲噁唑。上述11種抗菌藥物覆蓋了青霉素類、三代頭孢菌素類、大環(huán)內(nèi)酯類、鏈陽霉素類、林可酰胺類、四環(huán)素類、氟喹諾酮類、氯霉素、糖肽類、葉酸代謝途徑抑制劑類抗菌藥物；CLSI M100-S23文件對于肺炎鏈球菌藥敏試驗所選藥物除要求覆蓋上述各類抗菌藥物外，還要求包括碳青霉烯類(美羅培南)、噁唑烷酮類(利奈唑胺)、二代頭孢菌素類(頭孢呋辛)、頭孢洛林(非腦膜炎)及安莎霉素類(利福平，不單獨使用)等，見表1。

2.2 ATB STREP 5試劑盒與CLSI標準推薦抗菌藥物折點比較分析 從表1可見，ATB STREP 5試劑盒提供的11種抗菌藥物中，半數(shù)以上抗菌藥物的濃度范圍與現(xiàn)行CLSI標準折點存在差異，具體表現(xiàn)：青霉素濃度范圍為0.031～4.000 μg/mL，而針對于非腦脊液分離出的肺炎鏈球菌MIC≥8 μg/mL才可判讀為耐藥，如果根據(jù)試劑盒說明書進行判讀，當4 μg/mL最高濃度孔中有細菌生長，可能實際MIC為4～8 μg/mL，應(yīng)判讀為中介，根據(jù)說明書可誤判為耐藥；紅霉素、喹奴普丁/達福普丁、克林霉素、四環(huán)素、氯霉素等6種抗菌藥物僅提供了1個濃度折點，這一折點正好為敏感折點，根據(jù)試劑盒說明書，單一濃度抗菌藥物測試孔中如果有細菌生長則判讀為耐藥，而實際上根據(jù)CLSI標準，可能實際為中介的抗菌藥物被誤判為耐藥；阿莫西林、左氧氟沙星、復(fù)方磺胺甲噁唑則因為耐藥拐點的上調(diào)也可能誤將原本中介的抗菌藥物誤判為耐藥，見表1。

表1 ATB STREP 5試劑盒濃度范圍與CLSI M100-S23文件折點比較

注：CSF表示腦脊液分離菌株；非CSF表示非腦脊液分離菌株；-表示無數(shù)據(jù)。

3 討 論

常規(guī)臨床檢驗指標如血糖、血脂、血細胞計數(shù)參考范圍或臨床標準相對較穩(wěn)定，因此一個標準或參考值可以沿用多年。而細菌耐藥性與上述檢驗指標不同，因為細菌耐藥性與臨床抗菌藥物的合理/不合理使用[5-6]，以及細菌本身耐藥基因的變異等諸多因素存在直接關(guān)聯(lián)[7-8]，因此對于細菌耐藥、敏感判讀的折點相對上述其他臨床指標而言變異較大。CLSI標準每年更新，臨床微生物實驗室通常采取當年或上一年頒布的標準作為參照，其中M100-S23文件由CLSI于 2013年頒布。

肺炎鏈球菌是臨床標本中分離率較高的一種鏈球菌，其中大部分屬于致病菌或條件致病菌，因此需要出具臨床藥敏報告以供臨床醫(yī)生參考。選擇正確的試驗方法和試劑盒是滿足臨床要求所必需的。ATB STREP 5試劑盒操作簡單、判讀方便、無需特殊儀器，較傳統(tǒng)的微量肉湯稀釋法或藥敏紙片法更適合于臨床運用。但是，由于該試劑盒提供的反應(yīng)孔內(nèi)抗菌藥物濃度是固定的，同一種抗菌藥物包括1個低濃度孔(用于敏感的判讀)和1個高濃度孔(用于耐藥的判讀)，有的僅有1個判讀敏感的濃度孔。一旦抗菌藥物敏感、耐藥判讀折點發(fā)生變化時，則有可能導致判讀結(jié)果錯誤，對臨床用藥產(chǎn)生誤導。

本研究將ATB STREP 5試劑盒說明書提供的抗菌藥物濃度和CLSI標準制訂的折點進行比較，發(fā)現(xiàn)從抗菌藥物覆蓋范圍來看，該試劑盒提供的抗菌藥物種類缺少碳青霉烯類(美羅培南)、噁唑烷酮類(利奈唑胺)、二代頭孢菌素類(頭孢呋辛)等抗菌藥物。其中CLSI標準指出，厄他培南、亞胺培南、美羅培南可用于治療肺炎鏈球菌引起的感染，而該試劑盒沒有覆蓋。另外從抗菌藥物濃度范圍來看，除頭孢噻肟與萬古霉素2種抗菌藥物與CLSI標準一致外，其余9種抗菌藥物均存在濃度覆蓋范圍過窄的情況，可能導致原本中介的抗菌藥物被誤判為耐藥，導致臨床原本可以使用的抗菌藥物受到限制。

加強抗菌藥物的合理使用，一直是國內(nèi)外臨床專家、微生物專家呼吁和關(guān)注的問題[9]。就目前來看，國內(nèi)臨床實驗室所使用的梅里埃ATBSTREP5肺炎鏈球菌藥敏試劑盒與CLSI標準存在較大差異。因此，如果采用該試劑盒結(jié)果出報告需要慎重，對于未覆蓋的抗菌藥物需要補充其他覆蓋該抗菌藥物的試劑盒進行補充，或用手工方法進行補充報告，對于使用ATBSTREP5試劑盒判讀為耐藥的抗菌藥物報告一定要謹慎，需要其他試驗進行補充驗證為耐藥后方可發(fā)出，以防止中介誤判為耐藥而發(fā)出錯誤報告，誤導臨床用藥。

[1]CLSI.M100-S23 Performance standards for antimicrobial susceptibility testing:twenty-third informational supplements[S].Wayne,PA:CLSI,2013.

[2]吳佳學.兒科痰培養(yǎng)肺炎鏈球菌耐藥分析[J].中華醫(yī)院感染學雜志,2009,19(1):96-98.

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Defect analysis of ATB STREP 5 kit in the susceptibility test of Streptococcus pneumoniae*

XIAOYa-xiong，PENGYu-sheng，WANGPeng，HUANGZhong-tuan,DAIXiao-qin

(DepartmentofClinicalLaboratory,theFirstPeople′sHospitalofYibinCity,Yibin,Sichuan644600,China)

Objective To explore the defects of ATB STREP 5 kit in the susceptibility test of Streptococcus pneumoniae.Methods The varieties and breakpoint concentrations of antibiotics included in ATB STREP 5 kit were analyzed by using the breakpoint concentrations of anti-Streptococcus pneumonia drugs recommend in CLSI document M100-S23 as standard.Results ATB STREP 5 kit did not include carbapenems and oxazolidinone antibacterial drugs that were recommended by CLSI. Among 11 kinds of antibacterial drugs included in ATB STREP 5 kit,there were 9 kinds of antibacterial drugs having different breakpoint concentrations compared with CLSI M100-S23 standard. These defects might lead to false resistant results in reports.Conclusion According to current CLSI reference standards,if ATB STREP 5 kit was the single method used for susceptibility detection of Streptococcus pneumonia,errors even mistakes would occur. The susceptibility results of Streptococcus pneumonia detected by ATB STREP 5 kit should be corrected by other methods before reporting.

Streptococcus pneumoniae； drug resistance； defection

四川省宜賓市科技局重點科技計劃資助項目(2012SF005)。

肖亞雄，男，主管技師，碩士，主要從事臨床微生物耐藥性研究。

10.3969/j.issn.1672-9455.2015.07.015

A

1672-9455(2015)07-0915-02

2014-10-16

2015-01-15)