湯雯劍，馬艷俠(.陜西省延長油田股份有限公司青化砭采油廠醫(yī)務(wù)所，陜西延安 76003；2.陜西中醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院，陜西咸陽 72000)

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人乳頭瘤病毒基因分型聯(lián)合液基薄層細(xì)胞學(xué)檢測在宮頸疾病檢查中的意義

湯雯劍1，馬艷俠2△(1.陜西省延長油田股份有限公司青化砭采油廠醫(yī)務(wù)所，陜西延安 716003；2.陜西中醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院，陜西咸陽 712000)

目的 探討該地區(qū)女性宮頸人乳頭瘤病毒(HPV)感染狀況及HPV分型聯(lián)合液基薄層細(xì)胞學(xué)(TCT)檢測的臨床意義。方法 對2012年12月至2014年1月該院就診的2 816例成年女性，采集宮頸脫落細(xì)胞，應(yīng)用HPV-PCR反向斑點雜交技術(shù)檢測其HPV基因亞型，統(tǒng)計不同年齡段HPV感染情況，其中231例臨床疑似宮頸病變者同時行TCT檢查及病理活檢，以病理診斷為金標(biāo)準(zhǔn)進行確診。結(jié)果 2 816例檢出陽性598例，感染率21.24%，高危亞型最多的為16型(5.82%)，低危亞型最多為6型(9.55%)；不同年齡段之間HPV感染率不同，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=17.21，P<0.01)，>60歲者感染率最高，30～39歲感染率最低；感染類型以單一感染為主，多重感染比例最低；231例患者中宮頸疾病89例，HPV檢出率高于TCT，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=16.06，P<0.01)，兩者聯(lián)合檢出率高于單獨TCT或HPV檢測，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=22.04，P<0.01；χ2=4.17，P<0.05)。結(jié)論 HPV基因分型聯(lián)合TCT檢測對宮頸疾病檢測與宮頸癌篩查有重要臨床價值。

人乳頭瘤病毒； 基因分型； 液基薄層細(xì)胞學(xué)

宮頸癌是女性生殖系統(tǒng)最常見的惡性腫瘤之一，是全球排名第3位的女性常見癌，嚴(yán)重威脅女性健康[1]。有研究表明人乳頭瘤病毒(HPV)感染是導(dǎo)致宮頸癌前病變及宮頸癌的重要因素[2-3]。HPV基因分型檢測是宮頸癌篩查中重復(fù)性較好的技術(shù)，液基薄層細(xì)胞學(xué)檢查(TCT)也是篩查宮頸癌的常用有效方法，但兩者的成本及效果各異[4-5]。本研究按不同年齡段統(tǒng)計HPV感染情況，并以病理活檢為金標(biāo)準(zhǔn)分析與TCT聯(lián)合應(yīng)用的檢測效果，探討HPV與TCT聯(lián)合檢測在宮頸疾病檢測與宮頸癌篩查中的臨床價值。報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 2012年12月至2014年1月在陜西中醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院就診及體檢的成年女性2 816例，年齡20～80歲，平均年齡(39.86±9.58)歲。20～29歲510例，30～39歲734例，40～49歲780例，50～59歲487例，>60歲305例。對231例臨床疑似宮頸病變患者同時行TCT檢測和病理活檢，患者均非孕期，且排除子宮切除、盆腔放療等病史。所有患者均知情同意及自愿。

1.2 檢測方法

1.2.1 HPV-DNA基因分型檢測 采用專用宮頸刷無菌條件采集脫落細(xì)胞，置于專用樣本收集管并及時送檢。HPV-DNA的提取、擴增、雜交、洗膜及顯色等過程嚴(yán)格參照試劑說明書和儀器標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程進行。檢測19 種亞型，其中16種高危亞型(HR-HPV)依次為16、18、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66、68、CP8304型，3 種低危亞型(LR-HPV)分別是6、11、43型。每批實驗均同時設(shè)陰性對照和HPV16陽性對照，實驗結(jié)果有效條件為結(jié)果在控且“Globin”位點與“顯色探針”均顯色。

1.2.2 TCT檢測 選取非月經(jīng)期且近3 d無陰道沖洗或用藥，使用專用取樣刷于宮頸管鱗柱交界部的可疑病變區(qū)域采集標(biāo)本，將標(biāo)本置于專門的液基細(xì)胞保存液，及時行TCT檢查，巴氏染色后結(jié)果判讀參照國際癌癥協(xié)會推薦的TBS(The Bethesda System)分級診斷標(biāo)準(zhǔn)，對細(xì)胞改變的診斷包括：良性細(xì)胞改變(NILM)、不明確意義的非典型鱗狀上皮細(xì)胞(AS-CUS)、低度鱗狀上皮內(nèi)病變(LSIL)、高度鱗狀上皮內(nèi)病變(HSIL)、鱗狀細(xì)胞癌(SCC)、腺癌。細(xì)胞學(xué)異常是AS-CUS及以上病變者。

1.2.3 宮頸病理活檢 對宮頸可疑部位進行多點取材，如無異常則取3、6、9、12點處，將標(biāo)本用甲醛固定后及時送檢，所有閱片診斷結(jié)果均由該院兩位高年資病理診斷醫(yī)師共同確定?；顧z異常結(jié)果分為輕度子宮頸上皮內(nèi)瘤變(CINⅠ)、中度子宮頸上皮內(nèi)瘤變(CINⅡ)、重度子宮頸上皮內(nèi)瘤變(CINⅢ)、宮頸癌。其中CINⅠ即TCT標(biāo)準(zhǔn)中的LSIL,CINⅡ與CINⅢ即TCT標(biāo)準(zhǔn)中的HSIL。

1.3 儀器與試劑 Biometra系列定性PCR基因擴增儀(德國)，DA8000全自動分子雜交儀(廣州達(dá)安)，K30B型干式恒溫器(杭州奧盛)，Bioaer AG0410062型生物安全柜(廣州達(dá)安)，TG16-WS型臺式離心機(長沙湘儀)。HPV基因分型檢測試劑盒(廣州達(dá)安)，MCT-Ⅱ型液基薄層細(xì)胞制片分析系統(tǒng)(陜西高源)。

1.4 統(tǒng)計學(xué)處理 采用SPSS 19.0軟件進行統(tǒng)計學(xué)分析，計數(shù)資料采用χ2檢驗或F檢驗。以α=0.05為檢驗標(biāo)準(zhǔn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 HPV感染率及感染亞型 2 816例共檢出HPV陽性598 例，感染率21.24%。高危型感染亞型前3位是16型(5.82%)、52型(2.95%)、58型(2.27%)，其余按感染率由高到低依次為53(1.56%)、51(1.24%)、39(1.14%)、CP8304(1.07%)，33(0.92%)、66(0.82%)、31(0.78%)、18(0.64%)、68(0.64%)、56(0.46%)、59(0.39%)、35(0.32%)、45(0.25%)。低危型感染率依次為6型(9.55%)、43型(2.34%)、11型(1.35%)。

2.2 不同年齡段HPV感染率及感染類型 不同年齡段之間HPV感染率差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=17.21，P<0.01)。>60歲感染率最高(32.18%)，30～39歲的感染率最低(19.24%)，其余各組依次為20～29歲(26.09%)、50～59歲(23.54%)、40～49歲(19.51%)。598例陽性患者中，單一感染475例(占79.43%)，雙重感染共97例(占16.22%)，多重感染共26例(占4.35%)。見圖1。

圖1 不同年齡段HPV感染率及感染類型

2.3 HPV與TCT檢測結(jié)果 231例臨床疑似宮頸病變者同時進行HPV、TCT及病理活檢，病理活檢診斷異常者89例，以病理活檢診斷結(jié)果為金標(biāo)準(zhǔn)進行分組，其中HPV檢測陽性者59例，TCT檢測陽性者41例，HPV陽性率(66.29%)高于TCT(46.07%)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=16.06，P<0.01)，兩者聯(lián)合檢測陽性者65例，陽性率高于單獨行TCT檢測，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=22.04，P<0.01)，也高于單獨行HPV檢測，差異也有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=4.17，P<0.05)。見表1。

表1 宮頸病變患者HPV與TCT檢測結(jié)果比較[n(%)]

3 討 論

宮頸癌是一種嚴(yán)重威脅女性健康的惡性腫瘤，研究表明其發(fā)病率近年來仍在不斷上升[6]。HPV是一種雙鏈DNA病毒，內(nèi)含8 000個堿基對，相對分子質(zhì)量約為5×103，而其持續(xù)感染是宮頸癌重要的致病因素之一，HPV16、18亞型(尤其是16型)是導(dǎo)致宮頸癌的主要基因亞型，其致癌機制是通過致癌蛋白E6和E7與抑癌基因p53和pRb相結(jié)合，然后E6和E7分別抑制與滅活p53和pRb蛋白，造成宿主細(xì)胞周期紊亂和發(fā)生凋亡，并破壞正常增殖與凋亡的平衡性，使其增殖過度進而產(chǎn)生惡性轉(zhuǎn)化[7]。依據(jù)致癌可能性分為低危型和高危型，低危型(包括6、11、42等)主要引發(fā)良性病變(如尖銳濕疣等)和CINⅠ，高危型(包括16、18、31等)主要導(dǎo)致CINⅡ、CINⅢ及宮頸癌，高危型中53、CP8304型是中國人特有的[8]。高危型HPV反復(fù)持續(xù)性感染可導(dǎo)致宮頸發(fā)生由上皮內(nèi)瘤樣病變到原位癌，最終形成浸潤癌，因此對其亞型的檢測在宮頸病變預(yù)防和評估治療中都有重要的臨床價值，早期發(fā)現(xiàn)可及時干預(yù)治療，避免病情進一步惡化，從而降低宮頸癌的發(fā)病率。PCR反向斑點雜交技術(shù)具有簡便快速、敏感性高、特異性強等優(yōu)勢，廣泛用于HPV基因分型檢測。TCT檢查是采用薄層液基細(xì)胞學(xué)檢測系統(tǒng)檢測宮頸細(xì)胞并進行細(xì)胞學(xué)分類診斷，是目前國際上較先進的一種宮頸癌細(xì)胞學(xué)檢查技術(shù)，比傳統(tǒng)的宮頸刮片后行巴氏染色檢查的檢出率高，可為宮頸癌早期診斷和治療提供明確的病理學(xué)依據(jù)[5]。

本研究結(jié)果表明，該地區(qū)高危感染亞型中檢出率前3位依次是16、52、58型，與其他地域的報道有差異[9-10]。提示HPV亞型的分布具有一定的地域性，不同地區(qū)亞型感染模式各異，另外也可能是由于采用的檢測技術(shù)不同，從而檢測的型別范圍有所不同。本組結(jié)果顯示，不同年齡段之間HPV感染率差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)，>60歲感染率最高，可能與本組研究對象分布在該年齡段例數(shù)較少或疾病發(fā)展等相關(guān)，20～29歲陽性率也較高，30～49歲感染例數(shù)最多，與研究對象分布在該年齡段例數(shù)較多有關(guān)，還可能由于該年齡段女性處于性活躍期和生育高峰期等。在感染類型中，單一基因型別感染率最高，多重基因型別感染率最低。有學(xué)者研究報道，HPV多重感染率在宮頸癌患者中反而比健康者低，這是否由于HPV致病性發(fā)生改變所致，有待深入研究探討[11]。

本研究結(jié)果提示TCT在CINⅠ時檢出率較低，可能和此方法的敏感性較低、診斷水平差異、診斷標(biāo)準(zhǔn)掌握不嚴(yán)格、制片質(zhì)量等原因有關(guān)，會出現(xiàn)一定比例的假陰性或假陽性，由此也說明TCT診斷不可代替組織病理學(xué)診斷，尤其在宮頸病變初期，其診斷符合率較低，隨著宮頸病變的程度增高，特別是到宮頸癌階段，TCT診斷率明顯增加，提示對于TCT診斷為高度病變者更需引起重視。本研究結(jié)果顯示，HPV檢測有著較高的檢出率，其感染比細(xì)胞學(xué)異常出現(xiàn)更早，并且與聯(lián)合檢測效果更接近，對于宮頸癌及宮頸疾病病變者能起到有效的預(yù)警作用，其原因可能由于宮頸鱗狀上皮病變與HPV感染更密切，因此對于宮頸疾病患者進行HPV亞型檢測及流行病學(xué)分析研究，對宮頸癌早期預(yù)防具有重大意義[12]。本研究還發(fā)現(xiàn)TCT與HPV檢測聯(lián)合，檢測率有較大提高，提示在宮頸疾病篩檢，特別是在CINⅠ級的宮頸早期病變時應(yīng)聯(lián)合檢測HPV分型和TCT，可更有效防止假陰性結(jié)果，降低漏診率，從而顯著提高宮頸病變的檢出率與準(zhǔn)確性[13-14]。

此外，進行HPV與TCT檢測時，若同時聯(lián)合檢測宮頸癌相關(guān)的血清腫瘤標(biāo)志物(如鱗狀細(xì)胞癌抗原、細(xì)胞角蛋白19、人附睪蛋白4等)是否能更進一步提高宮頸病變檢出率，還有待后續(xù)進一步研究分析。

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10.3969/j.issn.1672-9455.2015.11.052

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1672-9455(2015)11-1618-02

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