茅俊翔，茅 蔚(上海交通大學醫(yī)學院附屬仁濟醫(yī)院檢驗科，上海 200001)

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血推片檢測對乙二胺四乙酸二鉀鹽依賴性血小板假性減少癥的臨床意義

茅俊翔，茅 蔚△(上海交通大學醫(yī)學院附屬仁濟醫(yī)院檢驗科，上海 200001)

目的 探討乙二胺四乙酸二鉀鹽(EDTA-K2)誘導血小板聚集的原因并加以糾正，為臨床提供準確的實驗室數(shù)據(jù)。方法 采用邁瑞B(yǎng)C-5800全自動血細胞分析儀對2012年1月至2014年10月該院門診患者標本中的血小板計數(shù)低于100×109/L的標本進行人工推片染色鏡檢，發(fā)現(xiàn)存在血小板聚集現(xiàn)象的標本33例。結(jié)果 33例EDTA依賴性血小板減少癥(PTCP)患者改用枸櫞酸鈉抗凝，綜合血涂片檢查，血小板假性減少全部得到糾正。結(jié)論 EDTA-PTCP的標本僅憑儀器檢測無法與真正血小板減少的標本進行區(qū)分，必須進行人工推片鏡檢，并用枸櫞酸鈉抗凝重新檢測加以糾正。

血小板聚集； EDTA-K2抗凝； 枸櫞酸鈉抗凝

目前全血細胞分析檢測已經(jīng)全面使用各種自動血細胞分析儀，國際血液學標準委員會(ICSH)于1993年提出把乙二胺四乙酸二鉀鹽(EDTA-K2)作為血細胞分析的最佳抗凝劑，因其對血細胞形態(tài)影響很小，被臨床廣泛使用。但EDTA-K2有時也會導致血小板聚集，使自動血細胞分析儀計數(shù)血小板時出現(xiàn)的結(jié)果假性減低，稱為EDTA依賴性血小板減少癥(EDTA-PTCP)[1]。本組在臨床檢驗工作中發(fā)現(xiàn)存在少數(shù)的EDTA-PTCP標本，在人工推片染色鏡檢時可以發(fā)現(xiàn)有明顯的血小板聚集現(xiàn)象，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 2012年1月至2014年10月該院門診患者全血細胞標本共298 634例，對其中血小板計數(shù)低于100×109/L的標本進行人工推片染色鏡檢，發(fā)現(xiàn)存在血小板聚集現(xiàn)象的標本33例，其中男13例，女20例，年齡26～79歲。

1.2 儀器與試劑 (1)邁瑞公司生產(chǎn)的BC-5800全自動血細胞分析儀，原廠配套試劑及質(zhì)控品。(2)EDTA-K2(1.5 mg抗凝全血1 mL)和枸櫞酸鈉抗凝管(1∶9抗凝)(浙江拱東醫(yī)療科技有限公司)[2]。(3)瑞氏-姬姆薩染色液(珠海貝索生物技術(shù)有限公司)。(4) Axio Scope A1顯微鏡(蔡司公司)。

1.3 方法 (1)邁瑞B(yǎng)C-5800使用原廠配套試劑及質(zhì)控品，按說明書提供的標準操作程序檢測質(zhì)控品，結(jié)果均在允許范圍內(nèi)。(2)全血細胞標本檢測使用EDTA-K2抗凝的血標本，抽取2 mL全血，充分與抗凝劑混勻，將EDTA-K2抗凝的血標本按標準操作流程上機檢測。(3)對血小板計數(shù)低于100×109/L的標本進行人工推片，血膜應呈舌狀，頭、體、尾清晰可分[3]。瑞氏-姬姆薩染色后用油鏡(×1 000倍)觀察血小板分布情況，如發(fā)現(xiàn)存在血小板聚集現(xiàn)象則再次抽取患者血液，EDTA-K2和枸櫞酸鈉抗凝血各1管，分別上機檢測并推片。

2 結(jié) 果

2.1 枸櫞酸鈉與血液抗凝比為1∶9，將枸櫞酸鈉抗凝管的血小板結(jié)果乘以1.1為準確結(jié)果[3]。EDTA-K2抗凝和枸櫞酸鈉抗凝結(jié)果進行比較，分別為57 19.68×109/L和178 68.35×109/L，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)。

2.2 同一患者使用2種抗凝劑的血液樣本，分別推片染色鏡檢。EDTA-K2抗凝血推片可見血小板聚集現(xiàn)象；枸櫞酸鈉抗凝血推片的血小板無明顯聚集現(xiàn)象。見圖1、2。

圖1 EDTA-K2抗凝血推片

圖2 枸櫞酸鈉抗凝血推片

3 討 論

EDTA-K2作為血細胞分析的最佳抗凝劑，其抗凝機制是與血液中凝血因子Ⅳ(鈣離子)結(jié)合成螯合物，從而使其失去凝血作用，阻止血液凝固。因其對血細胞形態(tài)影響較小，被臨床廣泛使用。但EDTA-K2有時也會導致血小板聚集，造成自動血細胞分析儀計數(shù)血小板時出現(xiàn)假性減低的結(jié)果，稱為EDTA-PTCP，但患者臨床上并無血小板減低的癥狀。雖然其發(fā)生率很低，國外有研究報道為0.07%～1%，本組結(jié)果顯示為0.011%，但卻極易致使臨床出現(xiàn)誤診、誤治[4]。因此建立必要的人工推片鏡檢制度，對發(fā)現(xiàn)EDTA-PTCP具有重要的臨床意義。

BC-5800血細胞分析儀檢測血小板的原理是采用電阻抗法，根據(jù)血細胞相對非導電性質(zhì)懸浮在電解質(zhì)溶液中的細胞顆粒,通過計數(shù)小孔時可引起電阻的變化為基礎，對血細胞進行計數(shù)和體積測定。血小板數(shù)量由血小板直方圖推導，在紅細胞/血小板計數(shù)池中計數(shù)2～20 fL的顆粒，再用電子擬合曲線擬合出0～70 fL范圍的所有血小板數(shù)量。因此如果出現(xiàn)EDTA-PTCP，聚集的血小板體積便會超出儀器計數(shù)范圍，從而使儀器不將其計數(shù)為血小板，引起報告結(jié)果的假性減低。因此EDTA-PTCP標本會在血小板直方圖上出現(xiàn)翹尾等異常情況，但是最后的確定只有通過人工推片鏡檢,才能發(fā)現(xiàn)血小板聚集現(xiàn)象。

有學者認為EDTA-PTCP形成的主要原因是與血小板表面存在某種隱匿性抗原有關(guān)，EDTA-K2可導致血小板活化，從而改變血小板膜表面某種隱匿性抗原結(jié)構(gòu)，與存在血漿的自身抗體結(jié)合，激活磷脂酶A2(PLA2)、磷脂酶C(PLC)、花生四烯酸(AA)、ADP、5-TH等活性物質(zhì)。這些活性物質(zhì)能活化血小板纖維蛋白原受體，促進血小板與纖維蛋白原聚集成團，從而出現(xiàn)血小板聚集現(xiàn)象[5]。但是絕大多數(shù)情況下都無法與具體疾病建立聯(lián)系，可見于健康者，也可伴發(fā)某些疾病(如癌癥、自身免疫性疾病等)[6]。而臨床如果收到血小板減低的報告，極其可能會導致誤診、誤治。本組1例患者(女，36歲)在其他醫(yī)院診斷為血小板減低，但本組結(jié)果顯示無任何血小板減低的表征(如皮下出血點增多等)，凝血功能也正常，并不需要進行相關(guān)治療。使用枸櫞酸鈉作為抗凝劑則不會引起血小板聚集，故在人工推片鏡檢后如發(fā)現(xiàn)血小板聚集現(xiàn)象，應采用枸櫞酸鈉抗凝(但需嚴格控制抽血量，保證1∶9的比例)檢測血小板后，按照結(jié)果乘以1.1校正可以反映患者的真實血小板計數(shù)結(jié)果[7-8]。

雖然自動血細胞分析儀已經(jīng)承擔了全血細胞分析標本的檢測工作，但是對于血小板異常減低的情況還是不能完全依賴儀器[9]。EDTA-PTCP的發(fā)現(xiàn)就來自人工推片鏡檢，這是任何儀器無法取代的，雖然其臨床發(fā)生率極低，但是一旦漏檢就可能造成臨床誤診、誤治，給患者帶來嚴重的身體傷害和經(jīng)濟損失，也容易導致醫(yī)療糾紛。所以建立全血細胞分析標本的人工推片復檢規(guī)則是每個實驗室的重要工作。

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10.3969/j.issn.1672-9455.2015.11.041

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1672-9455(2015)11-1597-02

2014-12-20

2015-02-18)

△通訊作者，E-mail：maowei@renji.com。