尚永輝，孫家娟，古元梓

（咸陽師范學院化學與化工學院，陜西咸陽712000）

異煙肼（化學名稱：4-吡啶甲酰肼）是一種日常生活中常見的抗菌藥物，它的殺菌（例如分枝桿菌）作用較強，特別是對結核桿菌有明顯地抑制及殺滅作用，是抗結核藥物的首選。此外，異煙肼對痢疾、麥粒腫、百日咳、情緒抑郁等癥狀也具有很好的療效[1，2]。

圖1 異煙肼結構式Fig.1 Molecular structures of Isoniazid

當前，測定異煙肼的主要方法有：高效液相色譜法[3，4]，近紅外光譜法[5]，流動注射化學發(fā)光法[6，7]以及電化學測定法[2,8，9]等。

本文在研究異煙肼與對苯醌荷移反應的基礎上建立了荷移分光光度法測定異煙肼的光化學新方法。

1 實驗部分

1.1 儀器與試劑

石英比色皿（宜興市晶科光學儀器有限公司）；玻璃比色管，移液管，溫度計，容量瓶，分析天平（賽多利斯科學儀器（北京）有限公司）；紫外分光光度計Specord 50（德國耶拿）。

1×10-3mol·L-1異煙肼標準溶液：準確稱取0.0137g 異煙肼粉末（中國藥品生物制品檢定所）于干燥的燒杯中，用蒸餾水溶解后轉移到100mL 容量瓶中，用水定容至刻度線。

0.15mol·L-1對苯醌-乙醇溶液：準確稱取0.8106g對苯醌粉末（上海山浦化工有限公司）于干燥的燒杯中，用無水乙醇溶解后轉移到50mL 容量瓶中，用無水乙醇定容至刻度線，避光保存。

1.2 試驗方法

分別取一定量的異煙肼于10mL 比色管中，加入一定量的0.15mol·L-1對苯醌儲備溶液，采用單因素輪換發(fā)考察時間、溫度、緩沖、pH 值、表面活性劑對絡合物形成的影響，測定200～800nm 間的吸收光譜并記錄絡合物最大吸收波長處的吸光度值。

2 結果與討論

2.1 荷移絡合物吸收光譜

在實驗中，配制不同組分的溶液，在200～800nm的波長范圍內進行掃描，它的吸收曲線見圖2。

圖2 吸收光譜Fig.2 Absorbance spectra

異煙肼在263nm 波長處有最大吸收，對苯醌的最大吸收峰為280nm，曲線3 與曲線1,2 相比，最大吸收波長紅移，摩爾吸光系數增大，說明有新的物質生成，即荷移絡合物，最大吸收峰為440nm。

2.2 荷移反應條件探索

2.2.1 溶劑對荷移反應的影響 準確移取1×10-3mol·L-1異煙肼標準液1.5mL，分別加入0.15mL 0.15 mol·L-1對苯醌，分別以無水乙醇，丙酮，甲醇，水，甲醇∶水（V甲醇∶V水=1∶2），乙醇∶水（V乙醇∶V水=1∶2）作溶劑，定容至刻度線，以試劑空白為參比，用1cm 石英比色皿在200～800nm 范圍測其吸光度值。實驗結果表明：異煙肼與對苯醌荷移反應的最佳溶劑為無水乙醇，此條件下譜圖最佳，絡合物吸光度最大。

2.2.2 對苯醌用量對荷移反應的影響 準確移取1×10-3mol·L-1異煙肼標準液1.5mL，分別加入0.15mol·L-1對苯醌溶液0.05，0.1，0.2，0.25，0.3mL，用無水乙醇定容至刻度線，以試劑空白為參比，用1cm 石英比色皿在200～800nm 范圍測其吸光度值。實驗結果表明：對苯醌與異煙肼荷移反應的最佳用量為0.25mL（3.75×10-3mol·L-1），此時譜圖峰形最佳，絡合物吸光度最大，實驗選擇0.25mL對苯醌進行試驗。

2.2.3 反應溫度對荷移反應的影響 準確移取1×10-3mol·L-1異煙肼標準液1.5mL，加入0.15mL 0.15mol·L-1對苯醌儲備溶液，用無水乙醇定容至刻度線，分別在20、30、40、50、60℃下反應30min，以試劑空白為參比,用1cm 石英比色皿在200～800nm范圍測其吸光度值。實驗結果表明：溫度升高有利于絡合物的生成，對苯醌與異煙肼反應的最佳溫度是60℃。

2.2.4 反應時間對荷移反應的影響 準確移取1×10-3mol·L-1異煙肼標準液1.5mL，加入0.15mL 0.15 mol·L-1對苯醌儲備溶液，用無水乙醇定容至刻度線，每隔10min 測一次吸光度值，以試劑空白為參比，用1cm 石英比色皿在200～800nm 范圍測其吸光度值。實驗結果表明：時間對反應程度的影響不大，對苯醌與異煙肼反映的最佳時間是30min。

2.2.5 酸度對荷移反應的影響 在選擇的最佳實驗條件下分別加入0.1，0.5，0.8，1.0，1.5mL 的6mol·L-1HCl 和相同量的0.2mol·L-1NaOH，測定其對荷移絡合物最大吸收波長的影響。實驗結果發(fā)現：6mol·L-1HCl 1.5mL（pH 值為3.04），0.2mol·L-1（pH 值為9.48）NaOH 1.5mL 均對對苯醌與異煙肼的荷移絡合物最大吸收波長產生增強的作用，實驗選擇6mol·L-1（pH 值為3.04）HCl 1.5mL 作為最佳pH 條件。

2.3 異煙肼的測定研究

2.3.1 荷移絡合物吸光度與異煙肼的濃度關系 按照試驗方法在實驗探索的最佳實驗條件下分別測定一系列異煙肼標準溶液與一定量對苯醌（4.5×10-3mol·L-1）混合溶液在440nm 處的吸光度值，建立工作曲線。

結果表明，在最佳實驗條件下，異煙肼濃度在4.115～109.72mg·L-1范圍內與絡合物最大吸收波長440nm 處的吸光度線性關系良好，線性方程為A=0.01368C（mg·L-1）+0.41084，回歸系數r=0.9979，檢出限為2.038mg·L-1。

2.3.2 樣品測定及加標回收試驗 取異煙肼片（山西云鵬制藥有限公司，國藥準字H14020769，標示量100mg/片）10 片，稱重，在研缽中充分研磨，準確稱取取相當于1 片異煙肼質量用蒸餾水溶解后轉移到250mL 容量瓶中，定容，備用；取樣品溶液上層清液0.5mL 清液，依次加入0.15mol·L-1對苯醌溶液0.25mL，6mol·L-1HCl 溶液1.5mL，用無水乙醇稀釋至10mL 刻線，在水浴加熱至60℃反應30min，測定體系440nm 處的吸光度值，代入工作曲線計算異煙肼片中異煙肼含量，4 次平行測定結果的平均值為96.75mg/片，測定的相對標準偏差為4.52%，樣品回收率在97.6%～105.7%。

3 結論

通過探索溶劑、溫度、反應時間、酸度等條件對異煙肼與對苯醌荷移反應的影響，建立了荷移光度法測定異煙肼的光化學新方法，方法應用于異煙肼片中異煙肼的測定，結果滿意。

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