田希存++++++劉江

[摘要] 目的 觀察Beclin-1、細(xì)胞周期蛋白D1（cyclin D1）在良惡性腮腺腫瘤組織中的表達(dá)，探討其與腫瘤發(fā)生、發(fā)展的關(guān)系。 方法 對(duì)30例腮腺多形性腺瘤、41例癌在多形性腺瘤中患者的病理標(biāo)本進(jìn)行免疫組織化學(xué)SP法染色。觀察Beclin-1、cyclinD1的陽性表達(dá)。并取腺瘤旁組織21例作為對(duì)照。 結(jié)果 癌在多形性腺瘤中、腮腺多形性腺瘤、腺瘤旁組織中Beclin-1的陽性率分別為58.5%、93.3%、95.2%。腮腺多形性腺瘤、腺瘤旁組織的Beclin-1的陽性率與癌在多形性腺瘤中比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P < 0.05），腮腺多形性腺瘤、腺瘤旁組織的Beclin-1的陽性率比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P > 0.05）。癌在多形性腺瘤中、腮腺多形性腺瘤、腺瘤旁組織中cyclin D1的陽性率分別為80.5%、50.0%、19.0%，腮腺多形性腺瘤、腺瘤旁組織的cyclin D1的陽性率與癌在多形性腺瘤中比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P < 0.05），腮腺多形性腺瘤組織與腺瘤旁比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05）。癌在多形性腺瘤中組織的Beclin-1、cyclin D1的表達(dá)與年齡、性別、腫瘤直徑無關(guān)（均P > 0.05）；與TNM分期及淋巴結(jié)是否轉(zhuǎn)移有關(guān)（均P < 0.05）。 結(jié)論 良、惡性腮腺腫瘤組織Beclin-1、cyclin D1均有不同的表達(dá)，表明Beclin-1、cyclin D1與腮腺腫瘤的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)。

[關(guān)鍵詞] 腮腺多形性腺瘤；癌在多形性腺瘤中；Beclin-1；細(xì)胞周期蛋白D1

[中圖分類號(hào)] R737.33 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A [文章編號(hào)] 1673-7210（2015）02（c）-0004-04

腮腺多形性腺瘤是腮腺區(qū)最常見的良性腫瘤，在臨床上有2%～3%的復(fù)發(fā)率，并且可以癌變[1]。因此了解多形性腺瘤和癌在多形性腺瘤中的發(fā)生發(fā)展機(jī)制對(duì)腫瘤的預(yù)防、早期診斷和治療都有著非常重要的意義。近年研究表明，Beclin-1、細(xì)胞周期蛋白D1（cyclin D1）與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)[1-2]。在腮腺腫瘤，尤其是腮腺多形性腺瘤及癌在多形性腺瘤中組織的Beclin-1、cyclin D1表達(dá)有關(guān)報(bào)道較少?，F(xiàn)對(duì)河北省唐山市中醫(yī)醫(yī)院（以下簡(jiǎn)稱“我院”）2009年10月～2014年10月住院治療的71例腮腺腫瘤患者的臨床資料進(jìn)行分析，旨在探討B(tài)eclin-1、cyclin D1在良惡性腮腺腫瘤組織中的表達(dá)，為臨床的診斷、治療及預(yù)后提供理論依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集2009年10月～2014年10月來我院住院治療的腮腺腫瘤患者71例，均經(jīng)手術(shù)病理證實(shí)。其中，腮腺多形性腺瘤30例，癌在多形性腺瘤中41例。并取腺瘤旁組織21例作為對(duì)照。71例中男31例，女40例；年齡23～72歲，平均（40.1±5.2）歲。所有病例術(shù)前均未進(jìn)行任何抗腫瘤治療。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)通過，患者均知情同意并簽署知情同意書。

1.2 方法

1.2.1 主要試劑與儀器 Beclin-1單克隆抗體為美國(guó)Santa Cruze公司產(chǎn)品。即用型鼠抗人cyclin D1單克隆抗體與試劑盒購(gòu)自北京中山生物技術(shù)有限公司。高清晰度彩色圖文分析系統(tǒng)購(gòu)自武漢千屏影像技術(shù)有限公司。

1.2.2 免疫組織化學(xué)SP法 病理組織以10%福爾馬林固定，常規(guī)石蠟包埋，4 μm連續(xù)切片。對(duì)標(biāo)本行免疫組織化學(xué)SP法染色。以乳腺癌組織切片作為陽性對(duì)照，以PBS替代一抗作為陰性對(duì)照。

1.2.3 陽性判定標(biāo)準(zhǔn) Beclin-1陽性判定標(biāo)準(zhǔn)：細(xì)胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性細(xì)胞。判斷標(biāo)準(zhǔn)：隨機(jī)觀察10個(gè)高倍視野，每個(gè)視野計(jì)數(shù)100個(gè)細(xì)胞，根據(jù)陽性細(xì)胞的比率和染色深度進(jìn)行綜合評(píng)定。陽性細(xì)胞計(jì)數(shù)評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)：1分：陽性細(xì)胞數(shù)占總細(xì)胞數(shù)<10%；2分：陽性細(xì)胞數(shù)占總細(xì)胞數(shù)10%～50%；3分：陽性細(xì)胞數(shù)占總細(xì)胞數(shù)>50%。染色深度評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)：0分：無染色；1分：淡黃色：2分：黃色；3分：棕黃色?？傇u(píng)分為2項(xiàng)評(píng)分相乘。0～3分為陰性，4分及以上為陽性。cyclin D1免疫組化陽性判定標(biāo)準(zhǔn)：細(xì)胞核出現(xiàn)棕色小顆粒為陽性細(xì)胞。陽性細(xì)胞與總細(xì)胞數(shù)的比值>10%為陽性表達(dá)，反之為陰性表達(dá)。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)或精確概率法，P < 0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 不同腮腺組織中Beclin-1、cyclin D1的陽性表達(dá)

Beclin-1陽性定位于細(xì)胞質(zhì)中，細(xì)胞質(zhì)內(nèi)可見棕黃色顆粒。癌在多形性腺瘤中、腮腺多形性腺瘤、腺瘤旁組織中Beclin-1的陽性率分別為58.5%、93.3%、95.2%。腮腺多形性腺瘤、腺瘤旁組織的Beclin-1的陽性率與癌在多形性腺瘤中比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P < 0.05），腮腺多形性腺瘤、腺瘤旁組織的Beclin-1的陽性率比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P > 0.05）。cyclin D1陽性定位于細(xì)胞核，細(xì)胞核中出現(xiàn)棕色小顆粒。癌在多形性腺瘤中、腮腺多形性腺瘤、腺瘤旁組織中cyclin D1的陽性率分別為80.5%、50.0%、19.0%，腮腺多形性腺瘤、腺瘤旁組織的cyclin D1的陽性率與癌在多形性腺瘤中比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P < 0.05），腮腺多形性腺瘤組織與腺瘤旁比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05）。見表1。

表1 不同腮腺組織中Beclin-1、細(xì)胞周期蛋白D1

陽性表達(dá)的比較（例）

注：與癌在多形性腺瘤中組比較，*P < 0.05；與多形性腺瘤組比較， △P < 0.05

2.2 Beclin-1、cyclin D1在癌在多形性腺瘤中不同臨床特征的表達(dá)

Beclin-1、cyclin D1的表達(dá)與年齡、性別、腫瘤直徑無關(guān)（P > 0.05）；與TNM分期及淋巴結(jié)是否轉(zhuǎn)移有關(guān)（P < 0.05）。見表2。

3 討論

多形性腺瘤又名混合瘤，是腮腺常見的良性腫瘤，其生長(zhǎng)緩慢，呈膨脹性生長(zhǎng)，影響容貌，術(shù)后容易復(fù)發(fā)，多次復(fù)發(fā)有惡變可能，可危及患者生命。近年來自噬與腫瘤的關(guān)系逐漸被人們所重視。研究發(fā)現(xiàn)，腫瘤患者體內(nèi)存在自噬活性的改變[3]，因此，推測(cè)自噬活性的改變與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)。自從酵母模型建立以來，發(fā)現(xiàn)自噬的調(diào)節(jié)是一個(gè)非常復(fù)雜的過程，需要多種分子的參與，其中Beclin-1是酵母自噬相關(guān)基因ATG6的哺乳動(dòng)物同源基因，是一種雙等位抑癌基因[4]，Beclin-1含有12個(gè)外顯子，編碼450個(gè)氨基酸。Beclin-1基因定位于染色體17q21，是自噬的執(zhí)行者。研究表明，Beclin-1參與了自噬體的形成，并促進(jìn)其成熟，具有促進(jìn)腫瘤細(xì)胞凋亡，抑制腫瘤增殖的功能[4]。多項(xiàng)研究表明，Beclin-1在多種惡性腫瘤中缺失，如卵巢癌、乳腺癌及前列腺癌等[5]。也有學(xué)者實(shí)驗(yàn)證明，在敲除小鼠的Beclin-1等位基因后，小鼠惡性腫瘤的發(fā)病率明顯高于正常小鼠[6]。李磊等[7]研究表明，Beclin-1在正常腮腺組織、腮腺多形性腺瘤、癌在多形性腺瘤中的陽性率分別為100%、92%、63%；Beclin-1在腮腺多形性腺瘤及癌在多形性腺瘤中表達(dá)下調(diào)，自噬功能改變可能在腮腺腫瘤形成中具有一定作用。本研究結(jié)果表明，癌在多形性腺瘤中、腮腺多形性腺瘤、腺瘤旁組織中Beclin-1的陽性率分別為58.5%、93.3%、95.2%。與腮腺多形性腺瘤、腺瘤旁組織比較，癌在多形性腺瘤中組織中Beclin-1的表達(dá)下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05）；而腮腺多形性腺瘤、腺瘤旁組織中Beclin-1的表達(dá)比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P > 0.05）。淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及TNM分期與Beclin-1的表達(dá)有關(guān)（均P < 0.05）。本研究結(jié)果與上述研究結(jié)果大致相符。

cyclin D1是細(xì)胞周期的正調(diào)節(jié)因子，是CDK4/6的活化因子，與其結(jié)合后共同促進(jìn)細(xì)胞周期。研究表明過度表達(dá)的蛋白加速了細(xì)胞周期轉(zhuǎn)化，導(dǎo)致細(xì)胞異常增殖[8-11]。在食管、肺、結(jié)腸、肝和胰腺等各種腫瘤中均發(fā)現(xiàn)了cyclin D1異常表達(dá)。Pignataro等[12]于1998年第1次報(bào)道腺樣囊性癌中cyclin D1基因的改變，21.4%的腺樣囊性癌組織出現(xiàn)過表達(dá)。向國(guó)林等[1]研究表明，cyclin D1在正常腮腺組織、多形性腺瘤初發(fā)瘤、多形性腺瘤復(fù)發(fā)瘤及癌在多形性腺瘤中的陽性表達(dá)率分別為0%、38%、50%、75%，多形性腺瘤與癌在多形性腺瘤中比較有顯著性差異（P < 0.05），多形性腺瘤復(fù)發(fā)瘤中陽性表達(dá)率高于多形性腺瘤初發(fā)瘤，但無顯著性差異（P > 0.05）。本研究結(jié)果表明，癌在多形性腺瘤中、腮腺多形性腺瘤、腺瘤旁組織中cyclin D1的陽性率分別為80.5%、50.0%、19.0%，腮腺多形性腺瘤、腺瘤旁組織的cyclin D1的陽性率與癌在多形性腺瘤中比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P < 0.05），腮腺多形性腺瘤組織與腺瘤旁比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05）。本研究結(jié)果與上述研究結(jié)果大致相同。本研究結(jié)果表明，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及TNM分期與cyclin D1的表達(dá)有關(guān)（P < 0.05）。

綜上所述，不同性質(zhì)的腮腺腫瘤組織Beclin-1、cyclin D1均有不同的表達(dá)，表明Beclin-1、cyclin D1與腮腺腫瘤的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)，隨著對(duì)其致病機(jī)制不斷深入的研究，通過調(diào)節(jié)腫瘤細(xì)胞的自噬活性，誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞自噬性死亡，使其在腫瘤治療領(lǐng)域具有廣泛的應(yīng)用前景。

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（收稿日期：2014-11-25 本文編輯：衛(wèi) 軻）