王豐華　管遠(yuǎn)清　徐榕雪　于立芝

摘要：以紅色大花月季不帶芽莖段為外植體，研究了不同濃度6-BA對(duì)紅色大花月季愈傷組織誘導(dǎo)的影響。結(jié)果表明，適宜濃度的6-BA對(duì)愈傷組織的誘導(dǎo)率、生長(zhǎng)量和產(chǎn)生速率都有明顯的促進(jìn)作用；6-BA濃度為1.5 mg/L時(shí)，愈傷組織的誘導(dǎo)率和生長(zhǎng)量均達(dá)到最高，分別為94%和0.9706 g/瓶；紅色大花月季愈傷組織誘導(dǎo)的最佳誘導(dǎo)培養(yǎng)基為MS+0.5 mg/L NAA+1.5 mg/L 6-BA。

關(guān)鍵詞：6-BA濃度；紅色大花月季；組織培養(yǎng)；愈傷組織誘導(dǎo)

中圖分類(lèi)號(hào)：S685.12文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)號(hào)：A文章編號(hào)：1001-4942（2014）12-0054-03

月季是薔薇科多年生木本花卉，栽培品種很多，為世界四大切花之一，也是我國(guó)傳統(tǒng)名花[1]。紅色大花月季以色彩艷麗、花姿優(yōu)美廣泛應(yīng)用于園林綠化中。月季通常采用扦插的方法進(jìn)行繁殖，其繁殖速度受到一定限制[2～6]。植物組織培養(yǎng)技術(shù)具有周期短、繁殖率高、整體生產(chǎn)成本低等特點(diǎn)，已廣泛應(yīng)用于植物快繁和篩選優(yōu)良種質(zhì)[7～9]。愈傷組織誘導(dǎo)是植物組織培養(yǎng)技術(shù)的第一個(gè)環(huán)節(jié)，本試驗(yàn)以紅色大花月季的莖段為外植體，研究6-BA（6-芐氨基腺嘌呤）濃度對(duì)愈傷組織誘導(dǎo)的影響，以期為紅色大花月季組織培養(yǎng)中合理使用6-BA誘導(dǎo)愈傷組織提供科學(xué)依據(jù)。

1材料與方法

1.1試驗(yàn)材料

外植體采用紅色大花月季生長(zhǎng)健壯且無(wú)病蟲(chóng)害的當(dāng)年生枝條，剝?nèi)ト~片及附在莖上的葉柄及皮刺，用小毛刷蘸中性洗衣液將其莖段刷洗干凈，并用自來(lái)水沖洗1 h待用。

1.2試驗(yàn)設(shè)計(jì)

誘導(dǎo)培養(yǎng)基均采用MS基本培養(yǎng)基，添加8 g/L瓊脂、30 g/L蔗糖，同時(shí)添加相同濃度的NAA及不同濃度的6-BA，pH值為5.8，高溫滅菌。試驗(yàn)共設(shè)6組處理（見(jiàn)表1），每組處理接種10瓶，每瓶接種5個(gè)外植體，共50個(gè)外植體[10]。

1.3試驗(yàn)方法

2013年10月1日，在超凈工作臺(tái)無(wú)菌環(huán)境中，將月季枝條中段飽滿(mǎn)且無(wú)腋芽的部分剪成1 cm長(zhǎng)的小段。無(wú)菌水沖洗3次后，先用75%的酒精表面消毒30 s，再用1 g/L的升汞溶液消毒8～10min，無(wú)菌水沖洗5次，用無(wú)菌濾紙吸去表面水分，接種于愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基中。培養(yǎng)箱光照強(qiáng)度為3 000 lx，光照時(shí)間10～12 h/d，培養(yǎng)箱干球溫度14.8℃，濕球溫度24.5℃。接種后持續(xù)觀察愈傷組織萌動(dòng)情況。

1.4數(shù)據(jù)記錄及處理

2013年10月10日開(kāi)始定期觀察并記錄愈傷組織的數(shù)量及生長(zhǎng)狀態(tài)等。2013年11月26日，每組處理隨機(jī)挑選3瓶對(duì)愈傷組織的生長(zhǎng)量進(jìn)行調(diào)查。

愈傷組織的誘導(dǎo)率（%）=每組處理中誘導(dǎo)出的愈傷組織數(shù)量/每組處理中外植體總數(shù)×100[11]

愈傷組織的生長(zhǎng)量=每組處理中3瓶愈傷組織生長(zhǎng)量總和/3采用Microsoft Excel進(jìn)行數(shù)據(jù)處理。

2結(jié)果與分析

2.1不同濃度6-BA對(duì)紅色大花月季愈傷組織誘導(dǎo)率的影響

由表2可以看出，不同處理對(duì)紅色大花月季愈傷組織誘導(dǎo)率的影響不同。T4處理誘導(dǎo)率最高為94%；其次是T3、T5、T6處理，誘導(dǎo)率均為92%；T2處理的誘導(dǎo)率為88%；T1處理誘導(dǎo)率最低，僅為28%。

紅色大花月季愈傷組織的誘導(dǎo)率與6-BA濃度的二次模擬函數(shù)為：

式中，x表示6-BA濃度，y表示紅色大花月季愈傷組織的誘導(dǎo)率，其相關(guān)系數(shù)R=0.9159>0.9，相關(guān)性顯著。6-BA濃度與紅色大花月季愈傷組織誘導(dǎo)率的模擬曲線見(jiàn)圖1。

2.2不同濃度6-BA對(duì)紅色大花月季愈傷組織產(chǎn)生速率的影響

紅色大花月季愈傷組織產(chǎn)生速率曲線見(jiàn)圖2，添加6-BA的所有處理（T2、T3、T4、T5、T6）愈傷組織的產(chǎn)生速率顯著高于未添加的處理（T1），但添加6-BA的各處理之間愈傷組織的產(chǎn)生速率則沒(méi)有明顯差異。

2.3不同濃度6-BA對(duì)紅色大花月季愈傷組織生長(zhǎng)量及生長(zhǎng)狀態(tài)的影響

由表3可知，T4處理的紅色大花月季愈傷組織生長(zhǎng)量最高，為0.9706 g/瓶，；T1處理的愈傷組織生長(zhǎng)量最低，為0.0015 g/瓶；各處理愈傷組織生長(zhǎng)量由大到小的順序?yàn)門(mén)4>T5>T3>T6>T2>T1。

式中，x表示6-BA濃度，y表示紅色大花月季愈傷組織的生長(zhǎng)量，其中相關(guān)系數(shù)R=0.9832>0.9，相關(guān)性顯著。6-BA濃度與紅色大花月季愈傷組織生長(zhǎng)量的模擬曲線見(jiàn)圖3。

3結(jié)論

本研究結(jié)果表明，6-BA在紅色大花月季愈傷組織誘導(dǎo)方面發(fā)揮著重要作用，適宜濃度的6-BA對(duì)愈傷組織誘導(dǎo)率、生長(zhǎng)量和產(chǎn)生速率都有明顯的促進(jìn)作用。

對(duì)愈傷組織誘導(dǎo)率的影響表現(xiàn)為，紅色大花月季愈傷組織的誘導(dǎo)率隨6-BA濃度的增大呈現(xiàn)先增長(zhǎng)后下降的趨勢(shì)，當(dāng)6-BA濃度為1.5 mg/L時(shí)，愈傷組織的誘導(dǎo)率最高為94%。對(duì)愈傷組織生長(zhǎng)量的影響表現(xiàn)為，當(dāng)6-BA濃度為1.5 mg/L時(shí)愈傷組織的生長(zhǎng)量最高為0.9706 g/瓶。

對(duì)愈傷組織產(chǎn)生速率的影響的表現(xiàn)為，添加6-BA的所有處理中愈傷組織的產(chǎn)生速率無(wú)明顯的差異，但都顯著高于未添加6-BA的處理。

綜上所述，紅色大花月季愈傷組織誘導(dǎo)過(guò)程中，MS+0.5 mg/L NAA+1.5 mg/L 6-BA為最佳誘導(dǎo)培養(yǎng)基，NAA和 6-BA兩種生長(zhǎng)素共同作用的效果明顯優(yōu)于單一生長(zhǎng)素處理。

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