劉先明

(江油市人民醫(yī)院病理科,四川 江油 621700)

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免疫組織化學(xué)在乳腺癌鑒別診斷中的臨床意義

劉先明

(江油市人民醫(yī)院病理科,四川 江油 621700)

摘要：目的探討免疫組織化學(xué)法在乳腺癌鑒別診斷中的臨床意義。方法對(duì)江油市人民醫(yī)院病理科2006年1月至2013年9月收治的852例浸潤(rùn)性乳腺癌組織標(biāo)本進(jìn)行鏈霉菌抗生物素蛋白-過(guò)氧化物酶連結(jié)法檢測(cè)。比較不同年齡(≤50歲359例、>50歲493例)，不同腫瘤最大直徑(T)(T≤2 cm 395例、2 cm5 cm 56例)，不同臨床分期(Ⅰ期251例、Ⅱ期346例、Ⅲ期158例、Ⅳ期97例)的孕激素受體(PR)、雌激素受體(ER)、C-erbB-2、血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)、p53和Ki-67的陽(yáng)性率。結(jié)果PR陽(yáng)性率在低年齡組(58.77%)、腫瘤T≤2 cm(60.00%)、臨床分期早較高且差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；腫瘤T≤2 cm，ER陽(yáng)性率(68.35%)顯著高于其他腫瘤大小組(P<0.01)，不同年齡、臨床分期的陽(yáng)性率差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，C-erbB-2在腫瘤大小、臨床分期的陽(yáng)性率差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；VEGF、p53和Ki-67在不同年齡組、腫瘤體積組、臨床分期的陽(yáng)性率差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P>0.05)。結(jié)論免疫組織化學(xué)指標(biāo)中PR、ER、C-erbB-2在乳腺癌鑒別診斷中具有重要指導(dǎo)意義，可用于臨床上鑒別診斷乳腺癌。

關(guān)鍵詞:浸潤(rùn)性乳腺癌；免疫組織化學(xué)指標(biāo)；鏈霉菌抗生物素蛋白-過(guò)氧化物酶連結(jié)法；診斷鑒別

由于生理等方面的原因，女性易發(fā)生多種惡性腫瘤，乳腺癌就是其中之一，發(fā)病率呈逐年上升趨勢(shì)。浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌在乳腺癌中最常見(jiàn)，占40%～75%[1]。它嚴(yán)重影響女性的身心健康，甚至有危及生命的可能。因此,早期診斷出乳腺癌并及時(shí)治療就顯得尤為重要。目前檢測(cè)乳腺癌的方法主要有觸診、X線加病理切片等，但這些方法基本是在乳腺癌發(fā)作時(shí)才進(jìn)行的，不是早期診斷乳腺癌的最佳方法。本研究擬采用鏈霉菌抗生物素蛋白-過(guò)氧化物酶連結(jié)法(streptavidin-perosidase,SP)對(duì)乳腺癌患者的術(shù)后病理切片進(jìn)行檢測(cè)，以觀察其在乳癌檢測(cè)過(guò)程中的臨床意義?，F(xiàn)報(bào)道如下。

1資料與方法

1.1一般資料收集江油市人民醫(yī)院2006年1月至2013年2月收治的原發(fā)性乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌患者的術(shù)后病理組織，均經(jīng)病理科副主任醫(yī)師確診。符合條件的共852例，均為女性，年齡36～77歲，平均(51±6)歲。一經(jīng)確診就準(zhǔn)備手術(shù)，未經(jīng)任何化療或放療。其中年齡>50歲493例，年齡≤50歲359例；根據(jù)腫瘤最大徑(T)分為:T≤2 cm者395例，2 cm5 cm者56例；經(jīng)確診為Ⅰ期的251例，占29.46%，Ⅱ期的346例，占40.61%，Ⅲ期患者158例，占18.54%，Ⅳ期患者97例，占11.38%。

1.2方法

1.2.1切片制作①將組織制片后用4%甲醛固定；②脫水包埋；③再制成4 μm厚切片；④蘇木精-伊紅染色法染色；⑤鏡檢。

1.2.2免疫組織化學(xué)檢測(cè)采用SP法作免疫組織化學(xué)法標(biāo)記，抗體試劑分別是：孕激素受體(progesterone receptor,PR)、雌激素受體(estrogen receptor,ER)(分別購(gòu)自丹麥Neomarker公司生產(chǎn)，批號(hào)：sc74534、sc28681)、C-erbB-2蛋白(杭州華安生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)，批號(hào)：SR0601)，血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(vascuoar endothelial growth factor，VEGF)、抑癌基因p53、細(xì)胞增殖核抗原(nuclcar-associated antigen，Ki-67)(北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)，批號(hào)：sc-29520、sc-26800、sc25300)。切片置于載玻片→二甲苯脫蠟→乙醇梯度水合→3%的過(guò)氧化氫氧化并置入室溫下培養(yǎng)5 min后→磷酸緩沖液(phosphate buffer solution,PBS)沖洗，每次3 min，共3次→密封培養(yǎng)于室溫下的血清中→滴入磷脂酰肌醇蛋白多糖3抗體后放于冰箱中一夜→加通用型二步法檢測(cè)試劑盒(北京欣興唐生物科技有限公司,編號(hào)：PV6000)抗體后置于37 ℃恒溫箱培養(yǎng)12 min→PBS液沖洗3遍→加鏈酶卵白素工作液→置于恒溫箱下培養(yǎng)→PBS液沖洗→二氨基聯(lián)苯胺 (3,3′-diaminobenzidine，DAB)染色(北京翰譜醫(yī)藥生物研究所生產(chǎn)，編號(hào)：8020133-D)→乙醇梯度脫水→封片。

1.3陽(yáng)性標(biāo)準(zhǔn)由兩位有10年檢驗(yàn)工作經(jīng)驗(yàn)的醫(yī)師分別讀片，綜合判定結(jié)果，有異議的由第3位醫(yī)師讀片后判定。在200倍的高倍鏡下觀察ER和PR：腫瘤細(xì)胞呈黃色-棕黃色計(jì)陽(yáng)性，且細(xì)胞著色率≥15%。C-erbB-2：腫瘤細(xì)胞膜出現(xiàn)黃色計(jì)陽(yáng)性。p53和Ki-67：腫瘤細(xì)胞核呈黃色-棕黃色計(jì)陽(yáng)性，且著色≥10%。VEGF：細(xì)胞呈棕黃色計(jì)陽(yáng)性，且≥10%。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法應(yīng)用SPSS 17.0軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,計(jì)數(shù)資料比較采用χ2檢驗(yàn),P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1不同年齡組PR、ER、C-erbB-2、VEGF、p53和Ki-67的表達(dá)不同年齡組ER、C-erbB-2、VEGF、p53和Ki-67陽(yáng)性表達(dá)率比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，≤50歲組的PR陽(yáng)性率高于>50歲組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見(jiàn)表1。

表1　不同年齡組PR、ER、C-erbB-2、VEGF、

PR：孕激素受體；ER：雌激素受體；C-erbB-2：跨膜酪氨酸激酶生長(zhǎng)因子受體基因；VEGF：血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子；p53：抑癌基因p53；Ki-67：細(xì)胞增殖核抗原

2.2不同大小腫瘤PR、ER、C-erbB、VEGF、p53和Ki-67的表達(dá)不同腫瘤大小的VEGF、p53和Ki-67陽(yáng)性表達(dá)率比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，PR、ER、C-erbB-2在不同大小腫瘤組的陽(yáng)性表達(dá)率比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01或P<0.05)，T≤2 cm的PR、ER陽(yáng)性率最高。見(jiàn)表2。

表2　不同腫瘤大小PR、ER、C-erbB、VEGF、

PR：孕激素受體；ER：雌激素受體；C-erbB-2：跨膜酪氨酸激酶生長(zhǎng)因子受體基因；VEGF：血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子；p53：抑癌基因p53；Ki-67：細(xì)胞增殖核抗原;aT≤2 cm比較，P<0.05

2.3不同臨床分期PR、ER、C-erbB-2、VEGF、p53和Ki-67的表達(dá)不同臨床分期的ER、VEGF、p53和Ki-67的陽(yáng)性率比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，PR、C-erbB-2在不同臨床分期中的陽(yáng)性率比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，其中PR臨床Ⅰ期的陽(yáng)性表達(dá)率最高，為59.36%，隨著分期增加陽(yáng)性率降低，而C-erbB的陽(yáng)性率在Ⅳ期最高，為46.39%，臨床Ⅰ期陽(yáng)性率最低。見(jiàn)表3。

表3　不同臨床分期PR、ER、C-erbB-2、VEGF、

PR：孕激素受體；ER：雌激素受體；C-erbB-2：跨膜酪氨酸激酶生長(zhǎng)因子受體基因；VEGF：血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子；p53：抑癌基因p53；Ki-67：細(xì)胞增殖核抗原；a與Ⅰ期比較，P<0.05

3討論

1980年以來(lái)，乳腺癌在我國(guó)大城市的發(fā)生率每年上升1.86%[2]。浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌是其中最常見(jiàn)的一種，它是威脅女性患者生命與健康的頭號(hào)殺手。因此早期發(fā)現(xiàn)乳腺癌，防止癌癥的進(jìn)一步惡化非常重要。通過(guò)免疫組織化學(xué)對(duì)乳癌患者的PR、ER、C-erbB-2、VEGF、p53和Ki-67進(jìn)行檢測(cè)，可以做出早期診斷并確定其臨床分期，同時(shí)可以指導(dǎo)臨床治療。本研究采用SP法分別檢測(cè)患者的PR、ER、C-erbB-2、VEGF、p53和Ki-67。

本研究結(jié)果顯示：①不同年齡組的PR陽(yáng)性率不同，低年齡組(≤50歲)高于高年齡組；ER在不同年齡組的陽(yáng)性率差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。而韓靜綺等[3]報(bào)道，ER、PR表達(dá)均與患者年齡無(wú)關(guān)。②腫瘤大小不同時(shí)，PR、ER陽(yáng)性率不同，腫瘤越小，PR、ER陽(yáng)性率越高(P<0.05)。而余輝等[4]研究表明，ER、PR表達(dá)與腫瘤大小無(wú)關(guān)。③臨床分期不同，PR的陽(yáng)性率不同，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，臨床Ⅰ期陽(yáng)性率最高，分期越晚，陽(yáng)性率越低；ER在不同臨床分期中的陽(yáng)性率不同。胡湘軍等[5]研究表明，臨床分期越早，ER、PR陽(yáng)性率越高。當(dāng)C-erbB-2陽(yáng)性率高時(shí)，說(shuō)明腫瘤細(xì)胞增殖旺盛，有較強(qiáng)的侵襲能力，導(dǎo)致腫瘤的浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移，提示惡性程度高，預(yù)后差[6]。本研究結(jié)果顯示：①C-erbB-2在不同年齡組的陽(yáng)性率差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；②C-erbB-2在腫瘤大小不同組時(shí)陽(yáng)性率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，腫瘤越小，陽(yáng)性率越低；當(dāng)處于臨床不同分期時(shí)，陽(yáng)性表達(dá)率差異不同，臨床分期越早，陽(yáng)性率越低，臨床Ⅳ期的C-erbB-2陽(yáng)性率最高，為46.39%?？梢?jiàn)，在判斷乳癌的預(yù)后時(shí)，C-erbB-2是一個(gè)較好的指標(biāo)。

研究顯示，Ki-67的表達(dá)表明腫瘤細(xì)胞增殖，并與惡性腫瘤的發(fā)展、轉(zhuǎn)移和預(yù)后高度相關(guān)[7]。而本研究結(jié)果表明，VEGF在不同年齡組、不同腫瘤大小組、不同臨床分期的陽(yáng)性表達(dá)率差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。Rohan等[8]報(bào)道，以p53蛋白表達(dá)的程度作為良、惡性程度判斷的標(biāo)準(zhǔn)之一。本研究結(jié)果還表明，VEGF作為促血管形成因子在不同分組中差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P>0.05)。

綜上所述，乳腺癌組織中PR、ER、C-erbB-2、p53等的異常表達(dá)均可幫助乳腺的診斷和提示預(yù)后，根據(jù)對(duì)上述指標(biāo)的檢測(cè)可以調(diào)整治療方案及對(duì)患者預(yù)后情況進(jìn)行早期判斷，但是由于目前許多文獻(xiàn)的報(bào)道結(jié)果尚存在很多不一致的意見(jiàn)，如何利用好乳腺癌組織中PR、ER、C-erbB-2、p53等的異常表達(dá)為臨床診療提供可靠依據(jù)，還需要進(jìn)行深入的研究和探討。

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Significance of Immunohistochemistry in the Differential Diagnosis of Breast Cancer

LIUXian-ming.

(DepartmentofPathology,SichuanProvincialPeople′sHospital,Jiangyou621700,China)

Abstract:ObjectiveTo investigate the clinical significance of immunohistochemistry in the differential diagnosis of breast cancer,and provide reference for clinical differential diagnosis.MethodsA total of 852 invasive breast cancer tissue specimens from Jiangyou City People′s Hospital from Jan. 2006 to Sep. 2013 were done immunohistochemical staining Streptavidin-Perosidase (the SP) assay. The positive rates of progesterone receptor (PR), estrogen receptor (ER), C-erB-2, vascular endothelial growth factor (VEGF),p53 and Ki-67 between different age groups (≤50 years dd 359 cases, >50 years dd 493 cases), differe tumor maximun size groups (T≤2 cm 395 cases, 2 cm5 cm 56 cases) and different clinical stage groups (stageⅠ251 cases, stage Ⅱ 346 cases, stage Ⅲ 158 cases, stage Ⅳ 97 cases) were compared respectivcly. ResultsPR-positive rate (58.77%),tumor size ≤2 cm(60.00%),early clinical stage in the lower age group were high and the differences were statistically significant(P<0.05);ER-positive rate (68.35%) of the tumor T ≤2 cm group was significantly higher than other tumor size groups(P<0.01), positive rate of different age,clinical stage groups was not statistically significantly different(P>0.05);C-erbB-2 positive rate in different tumor size groups,different clinical stage groups were statistically significantly different(P<0.05);VEGF,p53 and Ki-67 positive rate in different age groups,different tumor size groups,and different clinical stage groups was not statistically significantly different(all P>0.05).ConclusionThe PR,ER,C-erbB-2 immunohistochemistry index have great significance in differential diagnosis of breast cancer and can be used in clinical.

Key words：Invasive breast cancer; Immunohistochemical indicators; Streptavidin-perosidase; Differential diagnosis

doi：10.3969/j.issn.1006-2084.2015.03.062

中圖分類號(hào)：R36

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

文章編號(hào)：1006-2084(2015)03-0542-03

收稿日期：2014-01-13修回日期：2014-06-20編輯：伊姍