張建興,江志忠

(南方醫(yī)科大學(xué)第五附屬醫(yī)院心內(nèi)科，廣州 510900)

視黃醇結(jié)合蛋白、尿微量白蛋白檢測(cè)診斷糖尿病合并冠心病患者冠狀動(dòng)脈病變程度臨床價(jià)值

張建興,江志忠※

(南方醫(yī)科大學(xué)第五附屬醫(yī)院心內(nèi)科，廣州 510900)

摘要：目的探討視黃醇結(jié)合蛋白(RBP)、尿微量白蛋白(MA)用于預(yù)測(cè)合并糖尿病的冠心病患者冠狀動(dòng)脈病變程度的可能性。方法選取2013年10月至2015 年5月南方醫(yī)科大學(xué)第五附屬醫(yī)院收治的冠心病合并糖尿病患者43例作為糖尿病組，冠心病未合并糖尿病患者43例作為非糖尿病組，均行冠狀動(dòng)脈造影檢查，采用雙抗酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法檢測(cè)血清中RBP 4水平，采用比濁法檢測(cè)MA水平。結(jié)果糖尿病組RBP4和MA水平顯著高于非糖尿病組 [(70±15) μg/L比(43±9) μg/L,(68±16) μg/L比(34±10) μg/L]，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。糖尿病組患者的冠狀動(dòng)脈病變血管數(shù)和冠狀動(dòng)脈病變?cè)u(píng)分顯著高于非糖尿病組 [(2.64±0.84)支比(1.32±0.23)支、(8.2±3.3)分比(5.6±2.8)分]，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。聯(lián)合RBP4和MA與冠狀動(dòng)脈病變血管數(shù)呈正相關(guān)(r=0.803,0.892,P<0.01)，與冠狀動(dòng)脈病變?cè)u(píng)分呈正相關(guān)(r=0.821，0.874，P<0.05)。結(jié)論冠心病合并糖尿病患者的冠狀動(dòng)脈病變程度與RBP和MA密切相關(guān)，RBP、MA的檢測(cè)可為冠心病患者冠狀動(dòng)脈病變程度的診斷提供依據(jù)。

關(guān)鍵詞：糖尿?。还谛牟。灰朁S醇結(jié)合蛋白；尿微量白蛋白；病變程度

糖尿病是一種血糖水平慢性增高的代謝疾病，主要并發(fā)癥為糖尿病腎病[1-2]。近年來(lái)，隨著人們生活水平的提高，糖尿病的發(fā)生率逐年增長(zhǎng)[3]。糖尿病和冠心病關(guān)系密切，冠心病大部分是由于冠狀動(dòng)脈粥樣硬化所致[4]。糖尿病是引發(fā)冠心病的重要因素之一，冠心病合并糖尿病加重患者的冠狀動(dòng)脈病變程度，妨礙冠狀動(dòng)脈側(cè)支循環(huán)，使患者病死率上升，并且近年來(lái)冠心病合并糖尿病發(fā)病年輕化。視黃醇結(jié)合蛋白(retinol binding protein，RBP)4屬于脂質(zhì)運(yùn)載蛋白超家族，負(fù)責(zé)結(jié)合轉(zhuǎn)運(yùn)維生素A的代謝產(chǎn)物，作為脂肪因子參與胰島素抵抗，并且用于肝病及腎病的早期診斷[5-7]。尿微量白蛋白(microalbuminuria,MA)指尿中排泄的微量白蛋白，生理?xiàng)l件下尿液中水平較低，是預(yù)測(cè)糖尿病腎病的指標(biāo)，能夠反映腎臟異常蛋白質(zhì)滲漏。目前，MA是預(yù)測(cè)心血管風(fēng)險(xiǎn)的重要指標(biāo)[8-9]。本研究主要分析RBP、MA水平與冠狀動(dòng)脈病變程度的關(guān)系，探討RBP、MA用于預(yù)測(cè)合并糖尿病的冠心病患者冠狀動(dòng)脈病變程度的可能性。

1資料與方法

1.1一般資料選取2013年10月至2015 年5月南方醫(yī)科大學(xué)第五附屬醫(yī)院收治的冠心病合并糖尿病患者43例作為糖尿病組，冠心病未合并糖尿病患者43例作為非糖尿病組。其中糖尿病組男22例、女21 例，年齡30~76歲，平均(46±5) 歲；病程7~13年，平均(10.3±1.4)歲；非糖尿病組男20例、女23 例，年齡32~75歲，平均(47±5)歲，病程8~13年，平均(10.2±1.2) 歲；患者均診斷為冠心病，且行冠狀動(dòng)脈造影檢查。入選標(biāo)準(zhǔn)：心肌酶譜正常，冠狀動(dòng)脈造影未見顯著閉塞病變，發(fā)作前后心電圖存在明顯動(dòng)態(tài)演變。患者均排除心臟瓣膜病，心肌病，體質(zhì)量過(guò)輕，過(guò)度肥胖，全身免疫系統(tǒng)疾病，急慢性感染疾病，腫瘤，嚴(yán)重肝腎功能不全。兩組患者的性別、年齡、病程等一般資料比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。本研究經(jīng)本院倫理委員會(huì)審批，患者均簽署知情同意書。

1.2血管病變程度判定 采用德國(guó)飛利浦HSC型設(shè)備，優(yōu)維顯造影劑，Juikin′s導(dǎo)管技術(shù)，患者造影導(dǎo)管經(jīng)右橈動(dòng)脈進(jìn)入，多種常規(guī)體位投照，造影結(jié)果由兩位以上專家鑒定。

冠狀動(dòng)脈病變血管數(shù)評(píng)定標(biāo)準(zhǔn)：左主干病變?yōu)殡p支病變；除此，單支冠狀動(dòng)脈血管內(nèi)徑狹窄程度≥50%為1支血管病變；2支血管內(nèi)徑狹窄程度≥50%為2支血管病變；3支血管內(nèi)徑狹窄程度≥50%為3支血管病變；左主干合并右冠狀動(dòng)脈病變?yōu)?支血管病變。

根據(jù)美國(guó)心臟學(xué)會(huì)標(biāo)準(zhǔn)[10]將冠狀動(dòng)脈病變?cè)u(píng)分分為6個(gè)等級(jí)：5分為狹窄程度99%~100%；4分為狹窄程度90%~98%；3分為狹窄程度75%~89%；2分為狹窄程度50%~74%；1分為狹窄程度25%~49%；0分為狹窄程度≤24%。

1.3實(shí)驗(yàn)材料 抗人RBP4抗體(北京博奧森生物技術(shù)有限公司)；辣根酶標(biāo)記的羊抗兔IgG(稀釋度為1∶200～500)(北京博奧森生物技術(shù)有限公司)；微量移液器(德國(guó)艾本德)；UVP凝膠成像系統(tǒng)(美國(guó)VILBER LOURM)；DU800核酸蛋白分析儀(美國(guó)貝克曼公司)；渦旋混合儀VX-200型(美國(guó)萊伯特公司)；離心機(jī)3K30型(德國(guó)西格瑪公司)；超低溫冰箱(日本三洋電器集團(tuán))；-20 ℃冰箱SCD-2166XZ型(青島海爾)；電子天平(德國(guó)賽多利斯科學(xué)儀器(北京)有限公司)；全自動(dòng)特定蛋白分析儀ARRAY360(美國(guó)貝克曼公司)；酶標(biāo)儀MODEL450(美國(guó)伯樂(lè)公司)。

1.4檢測(cè)指標(biāo)所有患者入院24 h內(nèi)清晨空腹抽取靜脈血5 mL，采用雙抗酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法檢測(cè)血清中RBP4的水平；所有患者入院24 h內(nèi)清晨留取中段尿5 mL，患者的尿樣品不添加防腐劑，采用比濁法檢測(cè)尿中微量白蛋白的水平。

1.5檢測(cè)方法

1.5.1RBP4檢測(cè)采用雙抗酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法檢測(cè)，將患者血液樣本置于肝素鋰管，混勻，以離心半徑12 cm，轉(zhuǎn)速為3000 r/min離心10 min，分離血清，取0.5 mL上清置于聚對(duì)苯乙炔管，保存于-80 ℃待測(cè)，在酶標(biāo)板上包埋抗人RBP4單抗，抗人RBP4單抗結(jié)合待測(cè)樣品和標(biāo)準(zhǔn)品，添加生物素化的抗人RBP4抗體，形成免疫復(fù)合物，通過(guò)辣根酶標(biāo)記的羊抗兔IgG結(jié)合生物素，添加3,3′,5,5′-四甲基聯(lián)苯胺底物，顯藍(lán)色，加入硫酸終止液，顯黃色，在波長(zhǎng)450 nm處檢測(cè)樣品的光密度值，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線得到樣品RBP4濃度，RBP4濃度和光密度值成正比。

1.5.2MA檢測(cè)采用比濁法檢測(cè)，將患者的尿液樣品以離心半徑12 cm，轉(zhuǎn)速為3000 r/min，離心10 min。取10 μL上清置于離心管，加入50 μL抗血清，反應(yīng)溫度為37 ℃，在波長(zhǎng)340 nm 處檢測(cè)樣品的光密度值，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線得到樣品MA濃度。設(shè)備為全自動(dòng)特定蛋白分析儀ARRAY360，配套試劑和設(shè)備均由美國(guó)貝克曼公司提供。

2結(jié)果

2.1兩組患者RBP4和MA水平比較糖尿病組RBP4為(70±15) μg/L，MA為(68±16) μg/L；非糖尿病組RBP4為(43±9) μg/L，MA為(34±10) μg/L，糖尿病組的RBP4和MA水平均顯著高于非糖尿病組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=9.894,11.673,P<0.01)。

2.2兩組患者冠狀動(dòng)脈病變程度比較糖尿病組冠狀動(dòng)脈病變血管數(shù)為(2.64±0.84)支，冠狀動(dòng)脈病變?cè)u(píng)分為(8.2±3.3)分；非糖尿病組冠狀動(dòng)脈病變血管數(shù)為(1.32±0.23)支，冠狀動(dòng)脈病變?cè)u(píng)分為(5.6±2.8)分，糖尿病組患者的冠狀動(dòng)脈病變血管數(shù)和冠狀動(dòng)脈病變?cè)u(píng)分均顯著高于非糖尿病組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=9.939,3.898,P<0.01)。

2.3RBP4和MA與冠狀動(dòng)脈病變程度的關(guān)系RBP4和MA與冠狀動(dòng)脈病變血管數(shù)呈正相關(guān)(r=0.803,0.892,P<0.05)，與冠狀動(dòng)脈病變?cè)u(píng)分呈正相關(guān)(r=0.821，0.874，P<0.05)。

3討論

目前，冠心病是一種長(zhǎng)期慢性炎癥疾病，冠狀動(dòng)脈粥樣硬化是其主要原因[11-12]。動(dòng)脈粥樣硬化的病理過(guò)程為：?jiǎn)魏思?xì)胞長(zhǎng)期停留在血管，入侵血管內(nèi)膜，隨后轉(zhuǎn)化成巨噬細(xì)胞，導(dǎo)致趨化因子、炎性因子、氧化酶類及細(xì)胞外基質(zhì)等增生，形成血栓，動(dòng)脈粥樣斑塊纖維帽被降解，粥樣斑塊破裂，血栓脫落，血管痙攣，導(dǎo)致急性冠狀動(dòng)脈綜合征。目前，預(yù)防冠心病是醫(yī)療衛(wèi)生界研究的重要課題。RBP是一種單鏈蛋白質(zhì)，屬于脂質(zhì)運(yùn)載蛋白超家族，負(fù)責(zé)結(jié)合轉(zhuǎn)運(yùn)維生素A的代謝產(chǎn)物。研究表明，RBP參與胰島素抵抗，并與血脂異常、糖尿病腎病、體質(zhì)指數(shù)等有關(guān)[13-15]。降低血脂能夠降低冠心病的發(fā)生率，但不能治療冠心病。2型糖尿病及代謝綜合征患者體內(nèi)RBP4水平上升[16]。MA指尿中排泄的微量白蛋白，白蛋白是血液中的一種正常蛋白質(zhì)，生理?xiàng)l件下尿液中白蛋白水平較低。研究表明，MA是預(yù)測(cè)糖尿病腎病的指標(biāo)，能夠反映腎臟異常蛋白質(zhì)滲漏[15]。糖尿病患者腎小球?qū)Π椎鞍孜樟拷档?，使尿中白蛋白水平增加[17]。MA是冠狀動(dòng)脈病變?cè)u(píng)分的獨(dú)立因素，并且影響冠狀動(dòng)脈病變血管數(shù)。

本研究結(jié)果表明，糖尿病組患者的RBP4較非糖尿病組顯著上升。糖尿病患者體內(nèi)存在游離-RBP4正反饋信號(hào)，增強(qiáng)肝臟組織釋放RBP4，而且糖尿病患者腎小球過(guò)濾功能受損，因此，導(dǎo)致血清中RBP4水平上升。糖尿病組患者的MA較非糖尿病組顯著上升。一方面由于糖尿病患者血液黏滯，膠原硬化，腎小球過(guò)濾功能受損；另一方面，冠心病腎小球血壓較高，腎小球?qū)Π椎鞍孜樟拷档?，使尿中白蛋白水平增加。糖尿病組患者的冠狀動(dòng)脈病變血管數(shù)和冠狀動(dòng)脈病變?cè)u(píng)分較非糖尿病組均有顯著上升。研究表明，高血糖水平對(duì)冠狀動(dòng)脈病變起重要作用。高胰島素血癥引起血管內(nèi)平滑肌細(xì)胞增殖，細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)合成，引發(fā)動(dòng)脈粥樣硬化，導(dǎo)致冠心病。RBP4和MA與冠狀動(dòng)脈病變程度呈正相關(guān)(P<0.05)，與冠狀動(dòng)脈病變?cè)u(píng)分均呈正相關(guān)(P<0.05)。由此可見，RBP4和MA的診斷有利于早期發(fā)現(xiàn)患者病情，并進(jìn)行干預(yù)治療，延緩患者病情的發(fā)生、發(fā)展。糖尿病、冠心病早期，患者的體征和臨床癥狀不明顯，需要通過(guò)實(shí)驗(yàn)室檢查手段。冠心病等疾病的預(yù)測(cè)、診斷具有多種途徑，冠狀動(dòng)脈造影等技術(shù)存在創(chuàng)傷，且費(fèi)用較高，不能作為常規(guī)檢測(cè)手段。動(dòng)態(tài)心電圖等無(wú)創(chuàng)檢測(cè)手段僅能夠?qū)Σ糠止谛牟☆A(yù)測(cè)、診斷。因此，對(duì)冠心病患者進(jìn)行特殊準(zhǔn)確的指標(biāo)檢查是非常必要的，這樣才能夠做到冠心病的早預(yù)防、早診斷、早治療。

綜上所述，冠心病合并糖尿病患者的冠狀動(dòng)脈病變程度與RBP和MA密切相關(guān)，RBP和MA聯(lián)合檢測(cè)可以用于預(yù)測(cè)冠狀動(dòng)脈病變程度，并且為臨床診斷提供依據(jù)，為冠心病合并糖尿病患者的及時(shí)治療提供時(shí)機(jī)。

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關(guān)于作者署名的相關(guān)事項(xiàng)

1.署名的意義：①標(biāo)明論文的責(zé)任人，文責(zé)自負(fù)。②醫(yī)學(xué)論文是醫(yī)學(xué)科技成果的總結(jié)和記錄，是作者用智慧辛勤勞動(dòng)的成果，是應(yīng)得的榮譽(yù)，也是論文版權(quán)歸署作者的一個(gè)聲明。③便于編輯、讀者與作者的聯(lián)系、溝通，互相探討，共同提高。作者姓名在文題下按序排列，排序應(yīng)在投稿時(shí)確定，在編排過(guò)程中不應(yīng)再做更改；作者單位名稱要寫全稱(到科室)、所在城市及郵政編碼，位于作者署名下方；多位作者不同單位時(shí)要于姓名右上角標(biāo)明與單位排序相同的號(hào)碼。

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The Clinical Value of Retinol Binding Protein, Urinary Albumin Detection for Diagnosis of Severity of Coronary Artery Disease in Diabetes Mellitus Patients with Coronary Heart DiseaseZHANGJian-xing,JIANGZhi-zhong. (DepartmentofCardiology，theFifthAffiliatedHospitalofSouthernMedicalUniversity,Guangzhou510900,China)

Abstract:ObjectiveTo explore the feasibility for retinol binding protein(RBP) and urinary microalbuminuria(MA) to predict the lesion degree in coronary heart disease combined with diabetes mellitus.MethodsA total of 86 patients with coronary heart disease were chosen in the Fifth Affiliated Hospital of Southern Medical University from Oct.2013 to May 2015 as study group.43 cases with diabetes as diabetes group and 43 cases without diabetes as non-diabetes group.They all received coronary angiogram treatment,and enzyme-linked immunosorbent assay(ELISA) was used to measure the plasma concentrations of RBP4;turbidimetry was used to test urinary MA.ResultsSerum RBP4, urinary MA levels of the diabetes group were significantly higher than those in control group [(70±15) μg/L vs (43±9) μg/L,(68±16) μg/L vs (34±10) μg/L](P<0.05).Number and score of coronary artery lesion in diabetes group were significantly higher than those in the control group[(2.64±0.84) vessel vs (1.32±0.23) vessel,(8.2±3.3) point vs (5.6±2.8) point](P<0.05).The serum RBP4,urinary MA levels and lesion blood vessel number of coronary artery disease were positively correlated(r=0.803,0.892,P<0.01).The serum RBP4, urinary MA levels and grade of coronary artery disease were positively correlated(r=0.821，0.874，P<0.05).ConclusionThe lesion degree is closely related to RBP and MA in coronary heart disease combined with diabetes mellitus,which have clinical diagnostic value for the lesion degree of coronary heart disease.

Key words:Diabetes mellitus; Coronary heart disease; Retinol binding protein; Microalbuminuria; Lesion degree

收稿日期：2015-06-24修回日期：2015-07-27編輯：相丹峰

基金項(xiàng)目：廣州市醫(yī)藥衛(wèi)生科技項(xiàng)目(20151A011110)

doi：10.3969/j.issn.1006-2084.2015.22.045

中圖分類號(hào)：R587

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

文章編號(hào)：1006-2084(2015)22-4152-03