張建波

(平山縣人民醫(yī)院外2科，河北 平山 050400)

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nup88、Ataxin-3和PTEN在結(jié)直腸癌中表達(dá)關(guān)系的研究

張建波

(平山縣人民醫(yī)院外2科，河北 平山 050400)

摘要：目的檢測(cè)核孔蛋白復(fù)合體蛋白88(nup88)、脊髓小腦共濟(jì)失調(diào)癥相關(guān)蛋白3(Ataxin-3)和第10號(hào)染色體缺失的磷酸酶和張力蛋白同源等位基因(PTEN)在結(jié)直腸癌中的表達(dá)特點(diǎn)，探討三者的表達(dá)關(guān)系。方法選擇2011年1~12月平山縣人民醫(yī)院外2科103例結(jié)直腸癌術(shù)后患者作為觀察組，選擇68例正常結(jié)腸黏膜作為對(duì)照組，采用免疫組織化學(xué)檢測(cè)兩組nup88、Ataxin-3和PTEN的表達(dá)，分析其相關(guān)性。結(jié)果觀察組中nup88表達(dá)的陽性率顯著高于對(duì)照組[71.8%(74/103)比20.6%(14/68)]，觀察組中Ataxin-3和PTEN表達(dá)的陽性率顯著低于對(duì)照組[35.0%(36/103)比82.4%(56/68)，19.4%(20/103)比73.5%(50/68)]，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。觀察組中nup88、Ataxin-3和PTEN的表達(dá)在不同Dukes分期、有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、是否有癌結(jié)節(jié)及脈管浸潤(rùn)間陽性率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；線性相關(guān)分析顯示，觀察組中nup88、Ataxin-3與PTEN的表達(dá)無相關(guān)性(P>0.05)。結(jié)論結(jié)直腸癌中nup88、Ataxin-3和PTEN異常表達(dá)，但是三者不具有協(xié)同作用，3種蛋白可能是通過各自的通路發(fā)揮促腫瘤進(jìn)展的作用。

關(guān)鍵詞：結(jié)直腸癌；核孔蛋白復(fù)合體蛋白88；脊髓小腦共濟(jì)失調(diào)癥相關(guān)蛋白3；第10號(hào)染色體缺失的磷酸酶和張力蛋白同源等位基因

結(jié)直腸癌臨床常見，病變進(jìn)展中多種蛋白出現(xiàn)變化。核孔蛋白復(fù)合體蛋白88(nuclear pore complex protein 88，nup88)作為核孔蛋白的重要成員，可加速腫瘤細(xì)胞增殖，并參與物質(zhì)的轉(zhuǎn)運(yùn)，其對(duì)多種腫瘤有明顯的促進(jìn)作用，也對(duì)調(diào)節(jié)腫瘤的轉(zhuǎn)移有重要影響[1]。脊髓小腦共濟(jì)失調(diào)癥相關(guān)蛋白3(spinal cord cerebellar ataxia syndrome related proteins-3,Ataxin-3)是一種多聚谷氨酰胺蛋白，是泛素-蛋白酶體途徑中重要的去泛素化酶，在全身多種組織中表達(dá)。Ataxin-3的功能主要與細(xì)胞骨架形成、調(diào)控轉(zhuǎn)錄和細(xì)胞生長(zhǎng)周期的調(diào)節(jié)有關(guān)[2]。第10號(hào)染色體缺失的磷酸酶和張力蛋白同源物基因(phosphatase and tension homologue deletedon chromosome tem,PTEN)是抑癌基因，通過抑制細(xì)胞增殖和抑制腫瘤血管生成而發(fā)揮作用[3]。本實(shí)驗(yàn)應(yīng)用免疫組織化學(xué)技術(shù)，檢測(cè)結(jié)直腸癌中nup88、Ataxin-3和PTEN的表達(dá)，探討三者的表達(dá)特點(diǎn)及表達(dá)關(guān)系。

1資料與方法

1.1一般資料收集2011年1~12月平山縣人民醫(yī)院外2科行結(jié)直腸癌根治手術(shù)的患者作為觀察組，均經(jīng)病理學(xué)確診。共103例，其中男53例，女 50例，年齡54～78歲，平均(65±4)歲。其中結(jié)腸癌70例，直腸癌33例，高分化癌45例，中分化癌30例，低分化癌28例; Dukes分期A+B期63例，C+D期40例。另外選擇68例結(jié)直腸癌根治手術(shù)患者作為對(duì)照組，距離腫瘤邊緣>10 cm切端經(jīng)病理證實(shí)為正常結(jié)腸黏膜組織，其中男34例，女34例，年齡55～75歲，平均(66±4)歲。兩組性別、年齡等一般臨床資料比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。

1.2nup88、Ataxin-3和PTEN蛋白檢測(cè)將切除的組織制成厚度為4 μm的石蠟包埋切片，切片于50～60 ℃烘箱內(nèi)烤片30～40 min 后待測(cè)，nup88(檢測(cè)試劑盒購(gòu)自上海酶聯(lián)生物科技有限公司，批號(hào)：101017)、Ataxin-3(檢測(cè)試劑盒購(gòu)自上海金標(biāo)生物科技有限公司，批號(hào)：1011562)和PTEN(檢測(cè)試劑盒購(gòu)自上海美軒生物科技有限公司，批號(hào)：100772)均購(gòu)自北京中杉金橋公司，蛋白的檢測(cè)采用免疫組織化學(xué)法，應(yīng)用二步法進(jìn)行檢測(cè)，均在病理科完成，由經(jīng)驗(yàn)豐富的病理主管技師完成，嚴(yán)格質(zhì)量控制。

1.3結(jié)果的判定標(biāo)準(zhǔn)nup88、Ataxin-3和PTEN以在細(xì)胞質(zhì)中出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性反應(yīng)細(xì)胞，選擇有代表性的染色集中的腫瘤細(xì)胞密集區(qū)進(jìn)行判斷(400倍)，計(jì)數(shù)10個(gè)視野，計(jì)算陽性細(xì)胞百分率，以陽性細(xì)胞≥25%為陽性，<25%為陰性[2-3]。

2結(jié)果

2.1兩組 nup88、Ataxin-3和PTEN表達(dá)陽性率的比較觀察組中nup88表達(dá)的陽性率顯著高于對(duì)照組，Ataxin-3和PTEN表達(dá)的陽性率顯著低于對(duì)照組(P<0.01)，見表1。

2.2觀察組中nup88、Ataxin-3和PTEN陽性表達(dá)的病理特征觀察組中nup88、Ataxin-3和PTEN的表達(dá)陽性率在不同腫瘤Dukes分期、有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、是否有癌結(jié)節(jié)及脈管浸潤(rùn)間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05或P<0.01)，見表2。

表1　nup88、Ataxin-3和PTEN在觀察組與對(duì)照組中表達(dá)陽性率的比較　[例(%)]

nup88：復(fù)合體蛋白88；Ataxin-3:脊髓小腦共濟(jì)失調(diào)癥相關(guān)蛋白3；PTEN：張力蛋白同源等位基因；觀察組：取癌組織組；對(duì)照組：取正常結(jié)腸黏膜組織組

表2　觀察組中nup88、Ataxin-3和PTEN表達(dá)的陽性率在不同臨床特征中的比較　[例(%)]

nup88:復(fù)合體蛋白88；Ataxin-3:脊髓小腦共濟(jì)失調(diào)癥相關(guān)蛋白3；PTEN：張力蛋白同源等位基因；觀察組：取癌組織組

2.3觀察組中nup88、Ataxin-3與PTEN表達(dá)的相關(guān)性經(jīng)線性相關(guān)性分析顯示，觀察組中nup88、Ataxin-3與PTEN的表達(dá)無明顯相關(guān)(r=-0.231，P=0.372；r=0.043，P=0.417)。

3討論

泛素-蛋白酶體途徑是細(xì)胞內(nèi)重要的蛋白質(zhì)調(diào)控方式，其主要構(gòu)成成分包括泛素及啟動(dòng)酶和蛋白酶體系統(tǒng)，其在發(fā)揮作用時(shí)最重要的功能是降解需要精確調(diào)控的短半衰期蛋白和發(fā)生折疊異常的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)，并通過啟動(dòng)酶系統(tǒng)活化泛素，進(jìn)行有效的調(diào)控。Ataxin-3作為體內(nèi)重要的去泛素化酶，其異常表達(dá)時(shí)使對(duì)泛素-蛋白酶體途徑的平衡調(diào)節(jié)失調(diào)。Ataxin-3在體內(nèi)高表達(dá)，其低表達(dá)對(duì)惡性腫瘤的發(fā)生和進(jìn)展也有一定作用[4]。PTEN是第一個(gè)具有磷酸酯酶活性的腫瘤抑制基因[5]，其編碼產(chǎn)物具有磷酸酶活性，能使細(xì)胞內(nèi)第二信使磷脂酰肌醇(3,4,5)-三磷酸去磷酸化，負(fù)性調(diào)節(jié)磷脂肌醇3-激酶途徑，使細(xì)胞凋亡和(或)抑制細(xì)胞周期進(jìn)程，并誘導(dǎo)其停止在G1期，從而抑制細(xì)胞增殖[6]。Nup88是核孔復(fù)合物的一種，通過細(xì)胞核雙膜形成水溶性通道，連接細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)并進(jìn)行有效的物質(zhì)交換，以保證細(xì)胞周期和細(xì)胞生長(zhǎng)的進(jìn)行[7-8]。相關(guān)研究顯示，nup88在多種惡性腫瘤中高表達(dá)，并對(duì)腫瘤進(jìn)展起重要作用[9-10]。

本研究采用免疫組織化學(xué)技術(shù)檢測(cè)結(jié)直腸癌中nup88、Ataxin-3和PTEN的表達(dá)，結(jié)果顯示，觀察組中nup88表達(dá)的陽性率顯著高于對(duì)照組，觀察組中Ataxin-3和PTEN表達(dá)的陽性率顯著低于對(duì)照組，提示3種蛋白異常表達(dá)是腫瘤發(fā)生的重要因素。觀察組中nup88、Ataxin-3和PTEN的表達(dá)陽性率在不同Dukes分期、有關(guān)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、是否有癌結(jié)節(jié)及脈管浸潤(rùn)間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05或P<0.01)，提示3種蛋白參與腫瘤的進(jìn)展。nup88、Ataxin-3和PTEN異常表達(dá)時(shí)通過調(diào)解細(xì)胞因子、生長(zhǎng)因子和連接蛋白，進(jìn)而對(duì)生長(zhǎng)因子的生物利用度進(jìn)行有效調(diào)控，誘導(dǎo)細(xì)胞遷移，使腫瘤細(xì)胞具有侵襲性。由于Dukes分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、是否有癌結(jié)節(jié)及脈管浸潤(rùn)均為結(jié)直腸癌患者判斷預(yù)后和生物學(xué)行為的重要指標(biāo)，因此聯(lián)合檢測(cè)nup88、Ataxin-3和PTEN的表達(dá)可能與預(yù)后相關(guān)。是否有癌結(jié)節(jié)及脈管浸潤(rùn)均反映腫瘤的侵襲性生長(zhǎng)能力，因此3種蛋白異常表達(dá)是腫瘤浸潤(rùn)性生長(zhǎng)及播散的可能性標(biāo)志物。線性相關(guān)分析顯示，觀察組中nup88、Ataxin-3和PTEN的表達(dá)無相關(guān)性，提示三者不具有相關(guān)性。因此3種蛋白對(duì)結(jié)直腸癌發(fā)生、發(fā)展過程中的作用，可能是通過各自的通路發(fā)揮作用的。

綜上所述，結(jié)直腸癌中nup88、Ataxin-3和PTEN異常表達(dá)，但是三者不具有協(xié)同作用，3種蛋白可能是通過各自的通路發(fā)揮促腫瘤進(jìn)展的作用。

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The Research of Nup88,Ataxin-3 and PTEN Expression Relations in Colorectal CancerZHANGJian-bo.(SurgeryDepartmentTwo,PingshanCountyPeople′sHospital,Pingshan050400,China)

Abstract：ObjectiveTo detect the expression characteristics of nuclear pore complex protein 88 (nup88), spinal cord ceredellar ataxia syndrome related proteins 3 (Ataxin-3) and phosphatase and tensin homolog deleted on chromosome ten (PTEN) in colorectal cancer,focusing on the expression relationships between them.MethodsA total of 103 postoperative patients with colorectal cancer were chosen in Pingshan county in Surgery Department Two of Pingshan County People′s Hospital from Jan.to Dec.2011 as observation group,and another 68 cases of normal colonic mucosa were included as control group，and nup88,Ataxin-3 and PTEN expression of the two groups were detected using immunohistochemical method,and the correlation was analyzed.Resultsnup88 expression in observation group was significantly higher than that in control group[71.8%(74/103) vs 20.6%(14/68)],Ataxin-3 and PTEN expression rate in observation group were significantly lower than those in the control group[35.0%(36/103) vs 82.4%(56/68)，19.4%(20/103) vs 73.5%(50/68)],the difference were statistically significant(P<0.05).The expression of nup88,Ataxin-3 and PTEN in observation group and Dukes staging,lymph node metastasis,whether to have carcinoma nodules and vascular invasion were closely related;linear correlation analysis showed nup88,Ataxin-3 in the observation group and the expression of PTEN had no relevance(P>0.05).ConclusionThe expression of nup88,Ataxin-3 and PTEN in colorectal cancer is abnormal,but no synergy of them is observed,so the three kinds of proteins may play the role of promoting tumor progression through their respective pathways.

Key words:Colorectal cancer; Nuclear pore complex protein 88; Spinal cord cerebellar ataxia syndrome related proteins-3; Phosphatase and tensin homolog deleted on chromosome ten

收稿日期：2014-10-08修回日期：2014-11-30編輯：相丹峰

doi：10.3969/j.issn.1006-2084.2015.14.070

中圖分類號(hào)：R735

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

文章編號(hào)：1006-2084(2015)14-2674-03