潘放 任慶蘭

酪氨酸激酶ALK、ROS1、RET融合基因與肺癌臨床特征的關(guān)系分析

潘放 任慶蘭

目的探討肺癌酪氨酸激酶ALK、ROS1、RET融合基因與其臨床特征的關(guān)系。方法采用蛋白免疫印跡法檢測(cè)410例肺癌腫瘤組織標(biāo)本中ALK、ROS1、RET基因蛋白的表達(dá)情況，分析ALK、ROS1、RET基因突變陽性患者的臨床病理特征，并與陰性患者進(jìn)行比較。結(jié)果ALK、ROS1基因突變陽性患者性別和病理類型與RET基因突變陽性患者比較有顯著差異，差異具有計(jì)學(xué)意義(P＜0．05);所有基因突變陽性患者未發(fā)現(xiàn)同時(shí)存在2種及以上的基因突變同時(shí)發(fā)生的情況;基因突變陽性患者與陰性患者在性別、年齡(歲)、抽煙史、病理類型方面比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0．05)。結(jié)論ALK、ROS1、RET突變陽性患者臨床病理類型上有各自特征，三種基因在肺癌的表達(dá)中相互排斥。

肺癌;酪氨酸激酶;融合基因;臨床特征

(The Practical Journal of Cancer，2015，30:958～960)

肺癌是臨床常見惡性腫瘤，大量臨床研究表明肺癌與基因改變相關(guān)［1］。目前遺傳改變可對(duì)靶向藥物的臨床活性產(chǎn)生影響已經(jīng)獲得了多數(shù)專家的認(rèn)可，酪氨酸激酶基因突變?cè)诜伟┓肿又委煱悬c(diǎn)中的應(yīng)用較多［2］。酪氨酸激酶種類較多，其中間變性淋巴瘤激酶(anaplastic lymphoma kinase，ALK)、ROS1激酶(c－ros oncogene 1 receptor tyrosine kinase，ROS1)以及RET激酶(ret proto－oncogene，RET)融合基因作為肺癌靶向治療的新型潛在治療位點(diǎn)［3］，臨床研究相對(duì)較少?，F(xiàn)對(duì)肺癌酪氨酸激酶ALK、ROS1、RET融合基因與臨床特征的關(guān)系進(jìn)行分析，為肺癌的靶向治療提供參考，報(bào)告如下。

1 材料與方法

1．1 一般資料

選取2012年1月至2014年1月我院收治的410例肺癌患者作為研究對(duì)象。所有患者均經(jīng)常規(guī)影像學(xué)及組織病理學(xué)檢查確診，組織病理分型參照世界衛(wèi)生組織(WHO)肺癌組織學(xué)分類標(biāo)準(zhǔn)［4］。所有患者均經(jīng)常規(guī)纖維支氣管鏡下肺活檢取得新鮮肺癌或胸膜組織標(biāo)本共410例。腫瘤組織標(biāo)本取出后立即保存于液氮中，所有標(biāo)本均保存于－80℃低溫冰箱中待檢。其中男性患者338例，女性患者72例，患者年齡為歲，平均年齡為(58．77±8．91)歲。病理類型:鱗癌248例，腺癌62例，小細(xì)胞肺癌84例，其他16例。腫瘤分化程度:高分化75例，中分化159例，低分化176例。312例有抽煙史。

1．2 方法

所有410例腫瘤組織標(biāo)本均經(jīng)福爾馬林固定石蠟包埋后切片，采用蛋白免疫印跡(western blotting，WB)法檢測(cè)腫瘤組織標(biāo)本中ALK、ROS1、RET基因蛋白的表達(dá)情況，分析ALK、ROS1、RET基因突變陽性患者臨床病理特征，比較基因突變陽性患者與陰性患者臨床病理特征。

1．3 圖像采集及結(jié)果判定

使用400倍高倍顯微鏡采集圖片，隨機(jī)選取5個(gè)視野，每個(gè)視野下細(xì)胞數(shù)不低于100個(gè)，計(jì)數(shù)陽性表達(dá)細(xì)胞占總細(xì)胞數(shù)的百分比，取5個(gè)視野的平均值作為陽性細(xì)胞表達(dá)結(jié)果。

1．4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

應(yīng)用SPSS 19．0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)量資料結(jié)果用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示，治療前后及組間比較采用t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料以構(gòu)成比表示，采用χ2檢驗(yàn)。P＜0．05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2．1 ALK、ROS1、RET基因突變陽性患者臨床病理特征分布

ALK基因突變陽性患者12例，其中10例為基因融合，2例為野生型;ROS1基因突變陽性患者10例，其中8例為基因融合，2例為野生型;RET基因突變陽性患者4例，均為基因融合;ALK、ROS1基因突變陽性患者在性別和病理類型方面上與RET基因突變陽性患者有顯著差異，差異具有計(jì)學(xué)意義(P＜0．05)(表1)。所有基因突變陽性患者未發(fā)現(xiàn)同時(shí)存在2種及以上的基因突變同時(shí)發(fā)生的情況，表明ALK、ROS1與RET基因在肺癌的表達(dá)中相互排斥。

表1 ALK、ROS1、RET基因突變陽性患者臨床病理特征分析(例，%)

2．2 基因突變陽性與陰性患者臨床病理特征比較

基因突變陽性患者與陰性患者在性別、年齡、抽煙史、病理類型方面比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0．05) (表2)。

3 討論

ALK屬于1種跨膜受體的酪氨酸激酶，棘皮動(dòng)物微管相關(guān)蛋白4－間變性淋巴瘤激酶(EML4－ALK)融合基因是非小細(xì)胞肺癌的一個(gè)新的分子亞型［5］。臨床研究表明，EML4－ALK融合基因引發(fā)肺癌病變的機(jī)制與表皮生長因子受體突變誘發(fā)癌癥的機(jī)制十分相似，均表現(xiàn)出對(duì)癌基因的依賴特性［6］。本研究中ALK基因突變陽性患者的臨床特征主要為男性、年齡≥59歲、有抽煙史、病理類型以小細(xì)胞肺癌和腺癌為主。提示ALK基因突變已經(jīng)成為了肺癌的一個(gè)重要分子亞型［7］，而Audigier等［8］采用ALK抑制劑治療肺癌得到的前期臨床結(jié)果較為滿意，也證實(shí)了這一點(diǎn)。本研究中采用免疫印跡法檢測(cè)出的ALK融合基因陽性患者應(yīng)用免疫組化法進(jìn)行驗(yàn)證時(shí)均表現(xiàn)為弱表達(dá)，可能與ALK特異性抗體不適用于免疫組化技術(shù)有關(guān)［9］。提示不同抗體和檢測(cè)技術(shù)可能對(duì)研究結(jié)果產(chǎn)生較大影響［10］。

ROS1重排基因?yàn)榉切〖?xì)胞肺癌(NSCLC)的1個(gè)酪氨酸激酶受體，屬于NSCLC的重要臨床亞型基因［11］。由于ROS1基因陽性的肺癌患者數(shù)量較少，臨床上缺少對(duì)于ROS1基因陽性者的人口統(tǒng)計(jì)特征和融

合類型特異性特征的資料［12］，Cheng等［13］的研究中腺癌為ROS1基因陽性NSCLC患者的主要病理類型，而本研究中10例ROS1突變陽性患者臨床特征主要表現(xiàn)為男性、≥59歲、有抽煙史、病理類型以鱗癌為主，這可能與本研究410例患者中鱗癌較多有關(guān)。Chiari等［14］的研究結(jié)果顯示ROS1基因的表達(dá)與ALK基因相互排斥，本研究中未出現(xiàn)1例存在兩種及以上的基因突變同時(shí)發(fā)生的情況，表明ALK、ROS1與RET基因在肺癌的表達(dá)中相互排斥。

RET融合基因也為肺癌中的重要分子亞型，在NSCLC中表達(dá)率較低［15］。本研究中發(fā)現(xiàn)的4例RET基因突變陽性患者病理類型均為小細(xì)胞肺癌，與上述研究報(bào)道一致。而本研究中所有標(biāo)本均經(jīng)纖維支氣管鏡采集，提示經(jīng)纖維支氣管鏡采集的小標(biāo)本可以用來檢測(cè)肺癌患者的基因突變情況［16］。另外，本研究中4例RET基因突變陽性患者臨床特征主要為女性、無特定年齡段、抽煙史有無均可。提示RET融合基因表達(dá)與年齡或抽煙史無緊密聯(lián)系。另外，本研究對(duì)基因突變陽性患者與陰性患者臨床及病理特征進(jìn)行了比較，結(jié)果顯示基因突變陽性患者與陰性患者性別、年齡、抽煙史、病理類型分布上比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

總之，ALK、ROS1、RET突變陽性患者臨床和病理類型各有特征，3種基因在肺癌的表達(dá)中相互排斥。

表2 基因突變陽性患者與陰性患者臨床病理特征比較(例，%)

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Relation between Tyrosine Kinase ALK，ROS1，RET Fusion Gene and Clinical Features of Lung Cancer

PAN Fang，REN Qinglan．The First Affiliated Hospital of Chongqing Medical University，Chongqing，400042

ObjectiveTo explore the relation between tyrosine kinase ALK，ROS1，RET fusion gene and clinical features of lung cancer．MethodsThe gene expression for ALK，ROS1，RET in 410 cases of lung cancer were tested by Western blot．The clinicopathological characteristics of patients with positive and negative ALK、ROS1、RET gene mutation were compared．ResultsGender and pathological types between patients with positive ALK、ROS1 and RET gene mutation had significant difference(P＜0．05)．There was no cases with 2 types of gene mutation;There had no significant difference in gender，age，smoking history，pathological type between patients with positive and negative gene mutation(P＞0．05)．ConclusionALK，ROS1，RET positive mutation gene have different clinicopathological characteristics，the 3 gene are mutually exclusive in lung cancer．

Lung cancer;Tyrosine kinase;Fusion gene;Clinical features

10．3969/j．issn．1001－5930．2015．07．003

R734．2

:A

:1001－5930(2015)07－0958－03

2014－11－05

2015－04－07)

(編輯:吳小紅)

400042重慶醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院腫瘤科

任慶蘭