盧靜宜， 楊仁斌*， 傅 強， 蔣詩琪， 歐陽文森

( 1.湖南農(nóng)業(yè)大學農(nóng)業(yè)環(huán)境保護研究所,湖南長沙410128；2.湖南化工研究院，湖南長沙 410128)

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氣相色譜-氮磷檢測器測定辣椒及其土壤中的霜霉威殘留

盧靜宜1， 楊仁斌1*， 傅 強2， 蔣詩琪1， 歐陽文森1

( 1.湖南農(nóng)業(yè)大學農(nóng)業(yè)環(huán)境保護研究所,湖南長沙410128；2.湖南化工研究院，湖南長沙 410128)

[目的]建立辣椒和土壤中霜霉威殘留量的氣相色譜-氮磷檢測器(GC-NPD)測定方法。[方法]辣椒和土壤樣品以丙酮與水(7∶3，V/V)混合溶液提取，經(jīng)正己烷和二氯甲烷萃取凈化后，用氣相色譜-氮磷檢測器測定，外標法定量。[結(jié)果]霜霉威在0.05～10.00 mg/L范圍內(nèi)濃度和峰面積成良好的線性關系；方法的最低檢測質(zhì)量濃度為0.05 mg/kg；平均添加回收率為84.1%～96.3%，變異系數(shù)為0.8%～2.6%。[結(jié)論]該測定方法靈敏、穩(wěn)定，符合農(nóng)藥殘留分析方法的技術要求。

霜霉威；辣椒；氣相色譜-氮磷檢測器；殘留量分析方法

霜霉威是一種具有局部內(nèi)吸作用的低毒殺菌劑[1]，屬氨基甲酸酯類，對卵菌綱真菌有特效，廣泛適用于黃茄、辣椒、萵苣、馬鈴薯等蔬菜及煙草、草莓、草坪、花卉卵菌綱真菌病害的防治，如霜霉病、猝倒病、晚疫病、黑脛病等。我國已有許多廠家生產(chǎn)霜霉威，目前它是全球應用較廣泛的殺菌劑之一。國內(nèi)外已建立對霜霉威的檢測方法有高效液相色譜法(HPLC)[2]、超高效液相色譜與串聯(lián)四級桿質(zhì)譜聯(lián)用法(UPLC/MS/MS)、氣相色譜(GC)-氮磷檢測(NPD)法和氣相色譜(GC)-火焰離子化檢測器(FID)法[3-7]。目前已有霜霉威在黃瓜、煙草、菠菜、結(jié)球生菜和大蔥等各類果蔬上的殘留分析方法的研究報道[3-7]，但關于霜霉威在辣椒上的殘留量分析方法的研究尚未見報道。為此，筆者研究了辣椒及其土壤中霜霉威的前處理條件和GC-NPD測定方法，旨在為檢測辣椒和環(huán)境樣品中霜霉威的殘留量及評價霜霉威在辣椒和土壤環(huán)境中的安全性提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1儀器。GC-2014型高效氣相色譜儀(帶NPD及化學工作站，日本島津公司生產(chǎn))；KYC-1102C恒溫(全溫)雙層培養(yǎng)搖床；KQ-C玻璃儀器氣流烘干器；RE-2000型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器；DLSB-5L/25型低溫冷卻水液循環(huán)泵；SHZ-D(Ⅲ)循環(huán)水式真空泵；TP-220A電子天平；布氏漏斗；梨形抽濾瓶、500 ml分液漏斗、具塞磨口三角瓶等實驗室常用玻璃儀器。

1.1.2藥劑與試劑。2 500 mg/L霜霉威標準溶液由農(nóng)業(yè)部農(nóng)藥檢定所提供；甲醇為色譜純；二氯甲烷、正己烷、丙酮、氫氧化鈉、氯化鈉、無水硫酸鈉均為分析純； 鹽酸；蒸餾水。

1.2 方法

1.2.1樣品制備。

1.2.1.1土壤樣品。土壤樣品去掉砂石和動植物殘體等非土壤組分后，混勻，過830 μm篩，制成待測樣品貯于玻璃瓶中(同時稱2份測定水分，計算含水率)。

1.2.1.2辣椒樣品。辣椒除去果梗后切碎、勻漿，制成待測樣品貯于塑料瓶中。不能及時測定的待測樣品貯存于-20 ℃冰箱。

1.2.2樣品提取。稱取勻漿辣椒(土壤)樣品20.0 g于250 ml具塞三角瓶中，加入80 ml丙酮-水(體積比7∶3)混合溶液，再加入1 mol/L鹽酸2 ml，在恒溫搖床中振蕩30 min，經(jīng)布氏漏斗減壓過濾，用30 ml丙酮-水(體積比7∶3)混合溶液分次洗滌殘渣和抽濾瓶，合并抽濾液待凈化。

1.2.3樣品提取液凈化。將“1.2.2”抽濾液轉(zhuǎn)移至500 ml分液漏斗中，加20 ml飽和氯化鈉溶液，用正己烷萃取2次，每次用量30 ml，棄去正己烷層，水層再加入80 ml水，加4 mol/L氫氧化鈉溶液10 ml，然后用二氯甲烷萃取3次，每次用量40 ml，收集下層萃取液，經(jīng)無水硫酸鈉干燥后收集于250 ml具塞三角瓶中，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(45 ℃)上濃縮至近干，用色譜甲醇定容至4 ml，待GC-NPD測定。

1.2.4氣相色譜檢測條件。用GC-2014型高效氣相色譜儀(帶NPD及化學工作站)進行測定；色譜柱為DB-FFAP型石英毛細管柱(15 m×530.0 μm×1.0 μm；進樣口溫度240 ℃；檢測器溫度260 ℃，柱溫采用程序升溫：起始溫度150 ℃，以10 ℃/min的速率升至200 ℃，保留3 min；載氣為氮氣，流速10.0 ml/min；尾吹80 kPa；不分流；進樣量為2 μl。在上述色譜條件下，霜霉威的相對保留時間為2.9 min；化學工作站外標法定量。

2 結(jié)果與分析

2.1 前處理條件的選擇與優(yōu)化

2.1.1提取劑的選擇。根據(jù)霜霉威的特性，選擇強極性的甲醇、乙腈、丙酮、丙酮-水(體積比7∶3)分別作為辣椒和土壤樣品的提取液。結(jié)果表明，乙腈提取和丙酮提取的添加回收率較低，在80%左右；丙酮-水(體積比7∶3)提取液的回收率在87%左右；甲醇提取液的回收率最高，均在92%以上。同時乙腈和丙酮作提取液時提取率不穩(wěn)定，重現(xiàn)性較差。甲醇雖然提取效果好，但在操作中存在過濾困難的問題。丙酮-水(體積比7∶3)作為提取劑的提取效果較好且回收率穩(wěn)定，雖然提取的雜質(zhì)較多，但可在后續(xù)的凈化過程中去除，因此選用丙酮-水(體積比7∶3)作為辣椒和土壤樣品中霜霉威的提取溶劑。

2.1.2凈化條件的選擇。提取液中含水，不能直接濃縮，選用液液萃取法對提取液進行凈化。萃取劑選用二氯甲烷，但由于二氯甲烷與丙酮互溶，所以要先對提取液進行反萃取達到除去丙酮而不帶走農(nóng)藥的目的。正己烷不溶于水，但能與丙酮互溶，且為弱極性，不易溶解霜霉威，因此選用正己烷作為反萃取劑，反萃取2次，每次用量30 ml。反萃取后留下的水相分別嘗試用二氯甲烷萃取1、2和3次進行比較，每次用量40 ml。結(jié)果表明，用二氯甲烷萃取1次時，霜霉威的平均添加回收率為73.3%，達不到農(nóng)藥殘留檢測的要求；萃取2和3次時，霜霉威的平均添加回收率均在80%以上，萃取3次時回收率能達到85%，且雜質(zhì)較少，無需再進行其他凈化步驟。因此，選擇用正己烷每次30 ml反萃取2次，再用二氯甲烷每次40 ml萃取3次對提取液進行凈化。

2.2 線性范圍將2 500 mg/L的霜霉威標準溶液用色譜甲醇逐級稀釋成10.0、5.0、1.0、0.5、0.2、0.1 mg/L系列梯度標準溶液，在“1.2.4”氣相色譜條件下進行檢測。以霜霉威標準溶液濃度為橫坐標、色譜峰峰面積為縱坐標繪制標準曲線。當霜霉威標準工作溶液的質(zhì)量濃度在0.1～10.0 mg/L范圍內(nèi)時，濃度和峰面積成良好的線性關系，線性回歸方程為y=275 734.267 1x-7 063.314 5，R2=0.999 9，滿足外標法定量檢測的要求。

2.3 方法的準確度和精密度取未施用過霜霉威的辣椒和菜地土壤，按照“1.2.1”方法制成樣品。對辣椒和土壤樣品分別進行3個不同濃度(0.05、0.10、1.00 mg/kg)的添加回收率試驗，每個添加濃度設置5組平行處理和空白對照。由表1可知，辣椒和土壤樣品中的霜霉威平均添加回收率為84.1%～96.3%，變異系數(shù)在0.8%～2.6%，符合農(nóng)藥殘留分析的要求。霜霉威在辣椒、土壤樣品中的氣相色譜見圖1～3。

2.4 方法的靈敏度在“1.2.4”色譜檢測條件下，儀器對霜霉威的最小檢出量為5.0×10-10g；霜霉威在辣椒和土壤中的最低檢測濃度均為0.05 mg/kg。該方法靈敏度高，穩(wěn)定性好，符合農(nóng)藥殘留分析方法的技術要求。

表1 霜霉威在辣椒和土壤中的添加回收率和變異系數(shù)(n=5) %

2.5 實際樣品測定該方法用于測定了2012年66.5%霜霉威鹽酸鹽水劑在辣椒上殘留試驗研究的長沙和廣州的辣椒和土壤樣品。為了進一步驗證辣椒中霜霉威殘留量測定方法，在上述樣品中選取幾個不同霜霉威殘留量的辣椒和土壤樣品進行5次重復測定，結(jié)果表明，該方法靈敏、穩(wěn)定(表2)。

表2 不同霜霉威殘留量辣椒、土壤樣品重復測定結(jié)果(n=5)

注：c-l-d代表長沙辣椒動態(tài)；c-l-c代表長沙辣椒殘留；g-l-d代表廣州辣椒動態(tài)；g-l-c代表廣州辣椒殘留；c-t-d代表長沙土壤動態(tài)；c-t-c代表長沙土壤殘留；g-t-d代表廣州土壤動態(tài)；g-t-c代表廣州土壤殘留。

3 結(jié)論

建立了用丙酮與水的混合溶液提取，正己烷和二氯甲烷萃取凈化，GC-NPD測定辣椒和土壤中霜霉威的殘留量分析方法，添加回收率為84.1%～96.3%，變異系數(shù)為0.8%～2.6%，辣椒和土壤中霜霉威最低檢測質(zhì)量濃度均為0.05 mg/kg。該方法的靈敏度、準確度和精密度均符合國家農(nóng)業(yè)行業(yè)標準《農(nóng)藥殘留試驗準則(NY/T 788-2004)》的要求。該方法可用于檢測辣椒、土壤中霜霉威的殘留量，也為研究霜霉威在辣椒和土壤中的殘留規(guī)律、環(huán)境行為及安全性評價提供了檢測方法，也為檢測其他蔬菜中霜霉威殘留量提供了參考。

[1] 李飛飛,黃榮茂,胡德禹，等.氣相色譜測定土壤中霜霉威的殘留[J].農(nóng)藥,2010,49(2): 131.

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[3] 袁玉偉.菠菜中常用農(nóng)藥殘留動態(tài)及其限量研究[D].北京：中國農(nóng)業(yè)科學院,2008:48-54.

[4] 張學杰,付萌,郭科，等.霜霉威吡蟲啉腐霉利在結(jié)球生菜上的消解動態(tài)及相關因子的影響[J]. 農(nóng)業(yè)環(huán)境科學學報,2010,29(1):180-184.

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Residue Analysis of Propamocarb in Peppers and Soil by GC-NPD

LU Jing-yi1, YANG Ren-bin1*, FU Qiang2et al

(1. Institute of Agro-Environment Protection, Hunan Agricultural University, Changsha, Hunan 410128; 2. Hunnan Research Institute of Chemical Industry, Changsha, Hunan 410128)

[Objective] GC-NDP was established for determination of the propamocarb residue in peppers and soil. [Method] Peppers and soil samples were extracted with acetone-water mixed solution (7∶3,V/V), extracted by n-hexane and dichloromethane, and detected by GC-NPD. The external standard method was adopted for quantification. [Result] The results showed that there was a good linear relationship between the target substance concentration in the 0.05-10.00 mg/L range and peak area. The minimum detectable concentration was 0.05 mg/kg. The average recoveries in peppers and soil were from 84.1% to 96.3%, and the variation coefficients were from 0.8% to 2.6%. [Conclusion] The measurement method is sensitive and stable, meets the technical requirements of pesticide residue analysis.

Propamocarb; Peppers; GC-NPD; Residue analysis

農(nóng)業(yè)部農(nóng)藥殘留項目(2012F365)。

盧靜宜(1989- )，女，湖南岳陽人，碩士研究生，研究方向：環(huán)境污染物及檢測技術。*通訊作者，教授，從事環(huán)境污染物及檢測技術、農(nóng)業(yè)環(huán)境污染治理、農(nóng)藥殘留檢測技術研究。

2014-12-02

S 482.2

A

0517-6611(2015)02-149-03