王洪剛，郭興，高智濤，范冬茹

(黑龍江省伊春林業(yè)科學(xué)院，黑龍江 伊春 153000)

小興安嶺食藥用真菌黃酮含量的測(cè)定

王洪剛，郭興，高智濤，范冬茹

(黑龍江省伊春林業(yè)科學(xué)院，黑龍江 伊春 153000)

以小興安嶺林區(qū)常見多孔真菌、常種植的可食真菌為試驗(yàn)材料，對(duì)其黃酮類化合物含量進(jìn)行檢測(cè)，為黃酮類化合物在化妝品、醫(yī)藥、食品工業(yè)中的應(yīng)用提供理論依據(jù)。試驗(yàn)結(jié)果表明，各品種中黃酮類化合物含量最高的是樺褐孔菌，其含量達(dá)到8.98mg/g，野生食藥用真菌和可栽培食用菌6種及其菌糠中均含有黃酮類化合物。

食藥用真菌；黃酮；含量

食藥用菌(Mushroom)古稱蕈菌或菌蕈，俗稱蘑菇，是一類具有肉質(zhì)、膠質(zhì)、木質(zhì)、革質(zhì)子實(shí)體，并有食用與藥用價(jià)值的大型菌物，通常是指肉眼可見、可以用手直接采摘、大小達(dá)到厘米級(jí)、單個(gè)子實(shí)體重量為50mg以上的大型菌物。

近幾年，天然產(chǎn)物有效成分以其安全、有效性、功能性，廣泛應(yīng)用于醫(yī)藥、食品、化工原料、化妝品、飼料等多個(gè)領(lǐng)域，同時(shí)也為中藥新藥的研究和發(fā)展帶來了新的契機(jī)，并取得了良好的效果和效益。劉火安等用大孔樹脂法從葛根中分離出純度較高的葛根黃酮[1]。毛杏飛等用不同的方法提取白花蛇舌草中總黃酮,并確定了最佳的提取條件[2]。應(yīng)國清等通過用D201大孔強(qiáng)堿性離子交換樹脂分離銀杏葉中的黃酮類化合物的研究,確定了最佳的提取條件,并分離出純度較高的黃酮類化合物[3]。趙瑞艷等從樹葺葉提取出黃酮類化合物并對(duì)其的抗氧化性進(jìn)行研究[4]。張妍從山碴果提取分離總黃酮并進(jìn)行體外抗腫瘤活性的研究[5]。研究表明，天然黃酮物質(zhì)具有抗腦缺血的作用、心肌缺血作用、抗心律失常作用、鎮(zhèn)痛作用、保肝護(hù)肝作用、對(duì)消化性潰瘍的保護(hù)作用、抗病毒、抗腫瘤作用等。此外，還有研究表明，天然黃酮類物質(zhì)有降壓、降血脂、抑制血小板聚集等多種藥理作用，說明天然黃酮物質(zhì)確有多種生物學(xué)活性，且該類天然產(chǎn)物種類繁多，在植物中廣泛存在，毒性較低，應(yīng)是今后新藥開發(fā)研究中一個(gè)值得重視的資源，有很大的開發(fā)利用前景。

本研究以小興安嶺林區(qū)常見多孔真菌、常種植的可食真菌為試驗(yàn)材料，為食藥用真菌的菌種及成品的銷售推廣提供了理論數(shù)據(jù)，為黃酮類化合物在化妝品、醫(yī)藥、食品工業(yè)中的應(yīng)用提供理論依據(jù)；加速食用菌資源的有效開發(fā)利用，生產(chǎn)出具有預(yù)防和治療多種疾病的藥品和天然保健品。

1 材料

1.1 供試菌株

采集及分類野生食藥用真菌12種；收集可栽培食用菌6種及其菌糠。

表1 供試食藥真菌

1.2 實(shí)驗(yàn)儀器

BAO-35A精密鼓風(fēng)干燥箱 施都凱儀器設(shè)備(上海)有限公司；AL-104高精度電子天平 梅特勒-托利多儀器(上海)有限公司超聲波；TU-1901雙光束紫外可見分光光度計(jì) 北京普析通用儀器有限責(zé)任公司；HH-2水浴鍋 金壇市雙捷實(shí)驗(yàn)儀器廠；超聲波細(xì)胞破碎儀 上海之信儀器有限公司。

1.3 試驗(yàn)藥品

乙醇(分析純)；甲醇(分析純)；氫氧化鈉(分析純)；鹽酸(分析純)；亞硝酸鈉(分析純)；硝酸鋁(分析純)；蘆丁(≥98%)。

2 方法

2.1 食藥用真菌黃酮類化合物的提取工藝流程

食藥用真菌子實(shí)體→烘干→粉碎→準(zhǔn)備稱取→配成70%乙醇料液→超聲波160W，30min→離心→反復(fù)提取3次→合并收集濾液→濃縮→真空干燥。

2.2 黃酮類化合物的含量檢測(cè)

2.2.1 原理。黃酮類化學(xué)結(jié)構(gòu)為2-苯基色原酮，分子中具有酚羥基， 可與Al3+在堿性溶液中顯色，在一定濃度范圍內(nèi)，其濃度與吸光度符合比耳定律，可進(jìn)行比色定量。

2.2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作。精密吸取標(biāo)準(zhǔn)蘆丁對(duì)照品使用液(200μg/mL)0.0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0mL，分別置于10mL比色管中，各加60%乙醇至5mL，加5%NaNO2溶液0.5mL，搖勻放置6min，再加10%A1(NO3)3溶液0.5mL，搖勻，再放置6min，加4%NaOH溶液4mL，搖勻放置10～20min。在510nm波長處，以第一管溶液作空白分別測(cè)定吸光度，以吸光度對(duì)濃度進(jìn)行回歸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

2.2.3 樣品的測(cè)定。精密吸取黃酮提取液1.0mL于10mL比色管中，按各加60%乙醇至5mL進(jìn)行操作，加5% NaNO2溶液0.5mL，搖勻放置6min；再加10%Al(NO3)3溶液0.5mL，搖勻放置6min；加4%NaOH溶液4mL，搖勻放置10～20min。在510nm波長處，以第一管溶液作空白分別測(cè)定吸光度，以吸光度對(duì)濃度進(jìn)行回歸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

2.2.4 計(jì)算

式中：X為樣品中總黃酮的含量(以蘆丁計(jì))，%；A為樣品提取液中黃酮的量，μg；m為樣品的質(zhì)量，g。

3 結(jié)果與分析

3.1 食藥用真菌黃酮類化合物標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立

圖1 黃酮類化合物的標(biāo)準(zhǔn)曲線

經(jīng)紫外可見光分光光度計(jì)檢測(cè)，將所得的數(shù)據(jù)進(jìn)行回歸處理，得到回歸方程Y=0.01085X+0.01437(R2=0.9978)。

3.2 高含黃酮類化合物食藥用真菌的篩選

表2 食藥用真菌中黃酮類化合物的含量

對(duì)采集的野生食藥用真菌12種、可栽培食用菌6種及其菌糠進(jìn)行高含黃酮類化合物食藥用真菌的篩選，各品種中黃酮類化合物的含量見表2。

由表2中可以看出，各品種中黃酮類化合物含量最高的是樺褐孔菌，其含量達(dá)到8.98 mg/g，野生食藥用真菌和可栽培食用菌6種及其菌糠中均含有黃酮類化合物。

4 結(jié)論

對(duì)采集的野生食藥用真菌12種、可栽培食用菌6種及其菌糠進(jìn)行高含黃酮類化合物食藥用真菌的篩選，各品種中黃酮類化合物含量最高的是樺褐孔菌，其含量達(dá)到8.98 mg/g，野生食藥用真菌和可栽培食用菌6種及其菌糠中均含有黃酮類化合物。樺褐孔菌中富含黃酮類化合物，對(duì)其精深加工具有較好的市場(chǎng)前景。

[1]劉火安,賈云，戴傳云,等.葛根總黃酮分離純化的研究[J].生物技術(shù)通訊,2005,6(5):522-524.

[2]毛杏飛, 羅佳波.白花蛇舌草中總黃酮提取分離工藝的研究[J].中藥材,2002,25(7):499-500.

[3]應(yīng)國清.銀杏葉黃酮類化合物的分離純化[J].中國生化藥物雜志,2006,27(1):43-45.

[4]趙瑞艷,徐雅琴.樹毒葉片中黃酮類物質(zhì)提取及抗氧化性研究[J].食品科學(xué),2006,22(2):104-106.

[5]張妍.山碴果總黃酮的提取分離及體外抗腫瘤活性[J].中草藥,2004,35(7):787-789.

Determination of Xiaoxing’an of Mushroom Flavonoids Content

Wang Honggang，Guo Xing，Gao Zhitao，F(xiàn)an Dongru

(Yichun Academy of Heilongjiang Province Forestry science, Yichun,Heilongjiang 153000)

In this study, in the lesser Xiaoxing’an mountains of common porous fungi, often cultivated edible fungi as tested materials, To detect the content of flavonoid compounds, To provide a theoretical basis for the application of flavonoid in the cosmetics, pharmaceutical, food industry; The experiment indicates that the, The flavonoids content in each breed is the highest of Inonotus obliquus, its content reached 8.98 mg/g, wild edible fungus and cultivation of edible fungi 6 and fungus bran contains flavonoids.

Mushroom;Flavonoids; Content

2015-09-07

黑龍江省森林工業(yè)總局基金項(xiàng)目(sgzjQ2012014)

王洪剛(1984-)，男，工程師，從事林業(yè)研究，E-mail:whg00119@163.com。

R927.2

A

DOI.:10.13268/j.cnki.fbsic.2015.06.005