劉賀，　關(guān)琪軒，　金成山，　郭建鵬，2*

( 1.延邊大學(xué)藥學(xué)院，吉林 延吉 133002；

2.延邊大學(xué)長(zhǎng)白山生物資源與功能分子教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室， 吉林 延吉 133002 )

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長(zhǎng)白山地區(qū)野生興安升麻中升麻素的含量測(cè)定

劉賀1，關(guān)琪軒1，金成山1，郭建鵬1，2*

( 1.延邊大學(xué)藥學(xué)院，吉林 延吉 133002；

2.延邊大學(xué)長(zhǎng)白山生物資源與功能分子教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室， 吉林 延吉 133002 )

摘要：采用高效液相色譜法對(duì)長(zhǎng)白山地區(qū)的野生興安升麻中升麻素的含量進(jìn)行測(cè)定，檢測(cè)條件為：檢測(cè)波長(zhǎng)為254 nm、 色譜柱為Thermo ODS-2HYPERSIL (4.6 mm×250 mm， 5 μm)、流動(dòng)相為甲醇-水(體積比為42∶58)、線性度(r)高于0.999 9、平均回收率為100.45%.測(cè)定結(jié)果表明,不同樣品間升麻素含量的差異較小，平均含量為0.24 mg/g.該方法簡(jiǎn)便、靈敏、準(zhǔn)確可靠、重復(fù)性好，可用于興安升麻中升麻素的含量測(cè)定. 興安升麻； 升麻素； 高效液相 R927.2

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

升麻為毛茛科植物大三葉升麻CimicifugaheracleifoliaKom.、興安升麻Cimicifugadahurica(Turcz.) Maxim或升麻CimicifugafoetidaL.的干燥根莖，是常用的中藥材，主要產(chǎn)于東三省、山西、河北、四川等地.升麻主要用于風(fēng)熱頭痛、麻疹不暢、齒痛口瘡、咽喉腫痛等多種癥狀[1].升麻還是朝醫(yī)學(xué)傳統(tǒng)方劑習(xí)用藥材，為“太陰人”藥，主要用于中氣虛弱或氣虛下陷所致久瀉脫肛、子宮脫垂以及因氣虛不能攝血所致的婦女崩漏不止等病癥[2].

目前，在升麻藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中的含量測(cè)定項(xiàng)，有異阿魏酸含量[3]等檢測(cè)指標(biāo).升麻素是升麻藥材的特有成分之一[4]，也是升麻中色原酮類的有效成分[5]，具有抗菌、降壓、鎮(zhèn)靜、抑制心肌、減慢心率、抑制過敏性炎癥的藥理作用[6].本文采用高效液相色譜法[7-8]建立了興安升麻藥材中升麻素含量的測(cè)定方法，并測(cè)定了長(zhǎng)白山地區(qū)野生興安升麻樣品中的升麻素含量，為了解興安升麻藥材質(zhì)量信息以及制定藥材標(biāo)準(zhǔn)提供參考.

1儀器與試藥

儀器有Primaide高效液相色譜儀(日立)，超聲波清洗機(jī)JPS-40(深圳市潔泰超聲洗凈設(shè)備有限公司)，R206旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(廣州華生儀器廠).

升麻素對(duì)照品由中國(guó)藥品生物制品檢驗(yàn)所提供(批號(hào)為111710-200602)，甲醇為色譜純，水為超純水，其余試劑均為分析純.

興安升麻采收于長(zhǎng)白山地區(qū)山地林緣地帶(表1)，均經(jīng)延邊大學(xué)藥學(xué)院呂慧子研究室鑒定.

表1　興安升麻藥材來源

2方法與結(jié)果

2.1　升麻藥材的采收及加工

秋季采挖，除去泥土，曬至須根干時(shí)，除去須根，曬干.

2.2　溶液的制備

2.2.1對(duì)照品溶液的制備取升麻素對(duì)照品，精密稱定，加甲醇制成0.15 mg/mL溶液.

2.2.2供試品溶液的制備稱取升麻粗粉4 g，加入蒸餾水100 mL，超聲提取30 min;提取液過濾，離心，取上清液濃縮，定容至25 mL， 0.45 μm微孔濾膜過濾，濾液作為供試品溶液.

2.3　色譜條件

色譜柱為Thermo ODS-2HYPERSIL (4.6 mm×250 mm， 5 μm),柱溫為30 ℃； 流動(dòng)相為甲醇-水(42∶58,體積比)； 檢測(cè)波長(zhǎng)為254 nm， 流速為1.0 mL/min， 進(jìn)樣量為10 μL.以外標(biāo)法定量.對(duì)照品及供試品溶液的色譜圖如圖1所示.

圖1　升麻素對(duì)照品(A)和升麻藥材(B)的色譜圖

2.4　線性關(guān)系

量取對(duì)照品溶液5、10、15、20、25、30 μL，注入色譜儀，測(cè)定峰面積，以峰面積(Y)對(duì)進(jìn)樣量(X)進(jìn)行回歸，結(jié)果得升麻素線性回歸方程為Y=3.8E+5X-62 323，r=0.999 9.升麻素進(jìn)樣濃度在0.75~4.5 μg范圍內(nèi)，升麻素進(jìn)樣量與峰面積呈良好的線性關(guān)系.

2.5　精密度

取對(duì)照品溶液,按2.3中色譜條件測(cè)定升麻素峰面積值，結(jié)果顯示升麻素峰面積的RSD值為0.52%(n=6)，表明儀器精密度良好.

2.6　重復(fù)性

取同一供試品溶液，按2.3中色譜條件測(cè)定，結(jié)果顯示升麻素峰面積的RSD值為0.90%(n=6)，表明本方法重現(xiàn)性良好.

2.7　穩(wěn)定性

分別在0、2、4、8、12、24 h，按2.3中色譜條件測(cè)定供試品溶液，結(jié)果顯示升麻素峰面積的RSD值為0.96%(n=6)，表明供試品溶液在24 h內(nèi)相對(duì)穩(wěn)定.

2.8　加樣回收率

量取已知含量升麻素的供試品溶液9份，分別精密加入對(duì)照品適量，按2.2.2中方法制備供試品溶液，按2.3中色譜條件測(cè)定，結(jié)果如表2所示.

2.9　樣品測(cè)定

按上述測(cè)定方法對(duì)不同批次樣品進(jìn)行測(cè)定，以外標(biāo)法計(jì)算升麻素含量，測(cè)定結(jié)果見表3，樣品來源見表1.測(cè)定結(jié)果表明，長(zhǎng)白山地區(qū)野生興安升麻樣品中的升麻平均含量為0.24 mg/g.

表2　加樣回收率考察結(jié)果

表3　樣品中升麻素含量　　mg/g

3討論

3.1　藥材前處理?xiàng)l件的選擇

分別采用水、60%乙醇和無水乙醇為提取溶劑進(jìn)行超聲提取，結(jié)果表明，以水為提取溶劑時(shí)升麻素的提取率最高.在此基礎(chǔ)上，對(duì)料液比及提取時(shí)間進(jìn)行了考察，結(jié)果表明：料液比為1∶25，提取時(shí)間為60 min時(shí)提取率最佳.

3.2　流動(dòng)相與流速的選擇

對(duì)比考察甲醇-0.1 mol/L磷酸水溶液(40∶60,體積比)、甲醇-水(40∶60,體積比)、甲醇-水(42∶58,體積比)以及乙腈-水等流動(dòng)相[9-10]，其中甲醇-水(42∶58,體積比)為流動(dòng)相時(shí)被測(cè)物質(zhì)能夠達(dá)到基線分離，分離效果較理想，且重現(xiàn)性良好，故確定其為流動(dòng)相.考察不同流速對(duì)被測(cè)物質(zhì)分離度的影響[11-13]，結(jié)果表明流速為1.0 mL/min時(shí)的分離效果最好.

4結(jié)論

本文所建立的升麻素含量測(cè)定方法簡(jiǎn)便可行，定量準(zhǔn)確，專屬性強(qiáng)，具有良好的重復(fù)性，可以為升麻藥材中升麻素的含量測(cè)定提供參考.測(cè)定結(jié)果顯示，在長(zhǎng)白山地區(qū)范圍內(nèi)，不同產(chǎn)地樣品中升麻素的含量無顯著差異.

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Determination of Cimifugin in the wildCimicifugadahuricaon Changbai Mountains

LIU He1，GUAN Qixuan1，JIN Chengshan1，GUO Jianpeng1,2*

( 1.CollegeofPharmacy,YanbianUniversity,Yanji133002,China； 2.KeyLaboratoryofNaturalResourcesof

ChangbaiMountain&FunctionalMolecules(YanbianUniversity),MinistryofEducation,Yanji133002,China)

Abstract：High performance liquid chromatography (HPLC) method is established for determination of Cimifugin in the wildCimicifugadahuricaon Changbai Mountains. The detection wavelength is 254 nm, the chromatographic column is Thermo ODS-2HYPERSIL (4.6 mm×250 mm, 5 μm), and the mobile phase is methanol-water (42∶58). The coefficient of correlation (r) is 0.999 9; the average recovery is 100.45%. Results show that there is no difference for the contents of Cimifugin in theCimicifugadahuricaon Changbai Mountains, the average content was 0.24 mg/g. The method is simple, accurate, reliable, sensitive and reproducible, thus it can be used for determining Cimifugin in theCimicifugadahurica.

Keywords：Cimicifugadahurica; Cimifugin; high performance liquid chromatography

文章編號(hào)：1004-4353(2015)04-0356-03

*通信作者：郭建鵬(1971—)，男，教授，研究方向?yàn)橹兴幮聞┬团c新技術(shù).

收稿日期：2015-10-22基金項(xiàng)目： 吉林省科技發(fā)展計(jì)劃項(xiàng)目(20140204034YY,20130727071YY)