劉小平，樊尚榮，彭燕婷，張慧萍

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·用藥指導(dǎo)·

外陰陰道念珠菌病的念珠菌種類及抗真菌藥物敏感性分析

劉小平，樊尚榮，彭燕婷，張慧萍

目的 明確外陰陰道念珠菌病(VVC)患者分離的念珠菌種類及對抗真菌藥物的敏感性。方法 選取2003年4月—2012年9月就診于北京大學(xué)深圳醫(yī)院婦科門診的3 141例VVC患者為研究對象。采集念珠菌標(biāo)本進(jìn)行培養(yǎng)，采用API Candida鑒定分離菌株，采用Rosco紙片擴(kuò)散法進(jìn)行抗真菌藥敏試驗。結(jié)果 共分離出3 182株念珠菌(從41例患者中分離出兩種念珠菌)。其中白念珠菌分離最多，占85.0%(2 705株)，其次依次為光滑念珠菌(338株)、近平滑念珠菌(49株)、熱帶念珠菌(31株)、釀酒酵母菌(23株)、克柔念珠菌(15株)、無名念珠菌(11株)、紅酵母菌(6株)、魯希特念珠菌(2株)及土生念珠菌(2株)。白念珠菌對氟康唑、伊曲康唑、咪康唑、克霉唑及制霉菌素的耐藥率分別為1.1%(18/1 612)、2.2%(36/1 612)、4.2%(68/1 612)、0.9%(14/1 612)、0。結(jié)論 白念珠菌是VVC主要致病菌，白念珠菌對抗真菌藥物的耐藥不常見。

念珠菌病，外陰陰道；念珠菌屬；敏感性

劉小平，樊尚榮，彭燕婷，等.外陰陰道念珠菌病的念珠菌種類及抗真菌藥物敏感性分析[J].中國全科醫(yī)學(xué)，2015，18(7)：834-837.[www.chinagp.net]

Liu XP,Fan SR,Peng YT,et al.Species and antifungal susceptibility of Candida in patients with vulvovaginal candidiasis[J].Chinese General Practice，2015，18(7)：834-837.

外陰陰道念珠菌病(vulvovaginal candidiasis，VVC)是女性尋求婦科護(hù)理的最常見原因，白念珠菌是VVC患者的主要致病菌。研究顯示非白念珠菌的患病率在增加，主要與光滑念珠菌有關(guān)。非白念珠菌常對唑類耐藥，一旦被感染很難治愈，非白念珠菌感染的患者數(shù)目增加，使VVC的診斷和治療更加困難[1-3]。本研究對2003—2012年北京大學(xué)深圳醫(yī)院婦科門診VVC患者的念珠菌種類以及念珠菌對抗真菌藥物敏感性進(jìn)行報道，以期了解念珠菌種類及其對抗真菌藥物敏感性的變化，指導(dǎo)臨床選擇適宜的抗真菌藥物。

1 對象與方法

1.1 研究對象 選取2003年4月—2012年9月就診于北京大學(xué)深圳醫(yī)院婦科門診的3 141例VVC患者為研究對象。VVC診斷依據(jù)主要包括：外陰瘙癢、灼痛、黏膜充血和白帶增多；陰道分泌物鏡檢及念珠菌培養(yǎng)陽性。排除已知合并其他生殖道感染，如滴蟲性陰道炎、細(xì)菌性陰道病或沙眼衣原體感染者。本研究由醫(yī)院的倫理委員會批準(zhǔn)，所有患者均簽署知情同意書。

1.2 標(biāo)本采集 用滅菌棉拭子從陰道側(cè)壁取分泌物，將棉拭子置0.9%氯化鈉溶液試管內(nèi)送檢。采用鹽水濕片法直接顯微鏡檢查，見到有卵圓形芽生孢子或假菌絲為念珠菌陽性。對所有鏡檢陽性患者同時采集標(biāo)本進(jìn)行真菌培養(yǎng)及藥敏試驗。

1.3 方法 (1)真菌培養(yǎng)：分離平板采用科瑪嘉顯色培養(yǎng)基37 ℃培養(yǎng)24～48 h。采用法國梅里埃公司生產(chǎn)的API Candida鑒定分離菌株。菌種保存在脫脂牛乳培養(yǎng)基中，-70 ℃。(2)藥敏試驗：應(yīng)用Rosco(A/S Rosco，Taastrup，Denmark)藥片擴(kuò)散法對檢出的念珠菌進(jìn)行體外藥敏試驗。操作方法見文獻(xiàn)[4]介紹。根據(jù)制造商的說明判定結(jié)果，氟康唑、咪康唑、克霉唑、益康唑和酮康唑，抑菌圈直徑≥20 mm為敏感(S)；直徑12～19 mm為中介(I)；直徑≤11 mm為耐藥(R)。制霉菌素和伊曲康唑，抑菌圈直徑≥15 mm為敏感(S)；直徑10～14 mm為中介(I)；無抑菌圈為耐藥(R)。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS 10.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。計數(shù)資料以相對數(shù)表示，組間比較采用χ2檢驗，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 VVC患者一般情況 3 141例VVC患者年齡為18～55歲，平均為(30±7)歲。其中1 224例以往有VVC病史，405例患有復(fù)發(fā)性VVC，396例在VVC之前有抗生素治療史，129例有食物或藥物過敏史、過敏性疾病史。

2.2 念珠菌種類 3 141例VVC患者，共分離出3 182株念珠菌(從41例患者中分離出兩種念珠菌)。其中白念珠菌2 705株(占85.0%)；2003—2007、2008—2012年白念珠菌分離率分別為88.3%(1 294/1 466 )、82.2%(1 411/1 716),二者比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=22.64,P<0.01)。見表1。

表1 2003—2012年VVC患者念珠菌種類及分布情況(株)

2.3 抗真菌藥物敏感性 對其中1 941例VVC患者分離的念珠菌進(jìn)行抗真菌藥敏試驗，白念珠菌與非白念珠菌對氟康唑、咪康唑、克霉唑藥敏結(jié)果分布間差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；而對伊曲康唑藥敏結(jié)果分布間差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)；二者對制霉菌素均無耐藥(見表2)。不同年份白念珠菌對氟康唑、克霉唑、伊曲康唑藥敏結(jié)果分布間差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)；而對咪康唑藥敏結(jié)果分布間差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)；各年對制霉菌素均無耐藥(見表3)。與唑類敏感念珠菌相比，對某一種唑類耐藥的念珠菌對其他唑類耐藥率增加，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01，見表4)。

3 討論

3.1 念珠菌種類 Sobel等[5]報道的393例復(fù)雜VVC病例，其中96%是與白念珠菌有關(guān)。Barnhart等[6]報道的復(fù)雜型VVC的念珠菌類型中，91%由白念珠菌引起。Richter等[7]在VVC患者中分離出593株念珠菌，其中包括420株白念珠菌(70.8%)和112株光滑念珠菌(18.9%)。Fan等[4]研究發(fā)現(xiàn)，89.5%的VVC患者可分離出白念珠菌，7.9%可分離出光滑念珠菌。近年來研究顯示，白念珠菌的檢出率為46.9%～76.3%[8-12]。白念珠菌在VVC患者中的分離率差異可能反映了研究對象的不同。在這些報道中，所獲得的念珠菌通常來源于頑固性VVC患者和那些用常規(guī)顯微鏡檢查未能診斷的患者，導(dǎo)致白念珠菌的檢出率可能降低。本研究中，白念珠菌仍是引起VVC最常見的念珠菌種類(占85.0%)。在不同研究中不同的年齡分布也可以解釋VVC患者中白念珠菌檢出率差異。非白念珠菌種多見于老年患者。Holland等[13]研究顯示，白念珠菌和非白念珠菌感染患者的平均年齡分別是33歲和43歲。本研究中，2008—2012年比2003—2007年白念珠菌分離率降低的原因有：(1)非白念珠菌在VVC人群中所占比例上升；(2)非白念珠菌在所研究的VVC人群中比例上升，后者可能與研究者所在醫(yī)院復(fù)雜的VVC病例增加相關(guān)。

3.2 念珠菌對抗真菌藥物的敏感性 白念珠菌對大多數(shù)唑類敏感，但大多數(shù)非白念珠菌菌種對唑類耐藥[14-17]。不同研究顯示，從VVC患者分離的念珠菌對制霉菌素的耐藥性不同，Richter等[7]發(fā)現(xiàn)念珠菌對制霉菌素都敏感，Consolaro等[18]研究發(fā)現(xiàn)45%的VVC患者念珠菌對制霉菌素劑量依賴敏感。本研究支持Richter等[7]的研究結(jié)果，VVC患者分離出的念珠菌對制霉菌素敏感。制霉菌素對白念珠菌的高敏感率，可能與過去20余年廣泛應(yīng)用唑類而制霉菌素應(yīng)用較少有關(guān)。本研究發(fā)現(xiàn)，白念珠菌對抗真菌藥物的耐藥少見，非白念珠菌對唑類耐藥率高于白念珠菌，所有念珠菌是對制霉菌素敏感。唑類抗真菌藥物存在交叉耐藥，說明VVC患者的念珠菌對某一種唑類耐藥時，很可能對其他唑類耐藥，在治療藥物選擇時可選擇非唑類抗真菌藥物或增加藥物劑量以達(dá)到治療效果。

由于從VVC患者分離的念珠菌仍然是以白念珠菌為主，且白念珠菌對大多數(shù)唑類敏感，經(jīng)驗性治療建議首選唑類抗真菌藥；大多數(shù)非白念珠菌菌種對唑類抗真菌藥物耐藥，鑒定念珠菌種類和藥敏試驗對于非白念株菌引起的VVC是必要的；白念珠菌和非白念珠菌都對制霉菌素敏感，對于反復(fù)發(fā)作或無條件做鑒定和藥敏試驗的患者，制霉菌素是適宜的藥物。

表2 VVC患者分離的念珠菌對抗真菌藥物的敏感性〔株(%)〕

注：S為敏感，I為中介，R為耐藥；*為白念珠菌與非白念珠菌藥敏結(jié)果分布情況比較 ；-代表無該數(shù)據(jù)

表3 不同年份VVC患者分離的白念珠菌對抗真菌藥物的敏感性〔株(%)〕

注：-代表無該數(shù)據(jù)

表4 VCC患者唑類抗真菌藥物的交叉耐藥情況〔株(%)〕

注：-代表無該數(shù)據(jù)

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(本文編輯：崔沙沙)

Species and Antifungal Susceptibility of Candida in Patients with Vulvovaginal Candidiasis

LIUXiao-ping,FANShang-rong,PENGYan-ting,etal.

DepartmentofClinicalLaboratory,PekingUniversityShenzhenHospital,Shenzhen518036,China

Objective To determine species and antifungal drug susceptibility of Candida from patients with vulvovaginal candidiasis(VVC).Methods We enrolled 3 141 patients with VVC who received treatment in gynecological clinic of Peking University Shenzhen Hospital from April,2003 to September,2012.Specimens of Candida were collected from enrolled patients,API Candida system was used to identify the species,and Rosco Disk Diffusion method was employed to test drug susceptibility.Results A total of 3 182 strains of two species′ candida were extracted from 41 patients.C.albicans was the predominant species(2 705 strains,85.0%) in VVC,followed by C.glabrata(338 strains),C.parapsilosis(49 strains)，C.tropicalis(31 strains)，Saccharomyces cerevisiae(23 strains)，C.krusei(15 strains)，Candida famata(11 strains)，Rhodotorula sp.(6 strains)， C.lusitaniae(2 strains) and Candida humicola(2 strains).The drug resistance rate of C.albicans to fluconazole,itraconazole,miconazole,clotrimazole,and nystatin were 1.1%(18/1 612),2.2%(36/1 612),4.2%(68/1 612),0.9%(14/1 612)and 0.Conclusion Candida albicans is the predominant Candida species in patients with vulvovaginal candidiasis.Resistance of vaginal C.albicans to antifungal agents is infrequent.

Candidiasis,vulvovaginal;Candida;Sensitivity

深圳科技創(chuàng)新委員會課題(201201001，ZDSY20120619145501681)

518036廣東省深圳市，北京大學(xué)深圳醫(yī)院檢驗科(劉小平)，婦產(chǎn)科(樊尚榮,彭燕婷，張慧萍)

樊尚榮，518036廣東省深圳市，北京大學(xué)深圳醫(yī)院婦產(chǎn)科；E-mail:fanshangrong@163.com

R 519.3

A

10.3969/j.issn.1007-9572.2015.07.025

2014-12-01；

2015-01-25)