殷旭旺，李文香，白海鋒、2，劉鋼，周瑋

(1．大連海洋大學(xué)遼寧省水生生物學(xué)重點實驗室，遼寧大連116023;2．陜西省水產(chǎn)研究所，陜西西安710086)

刺參Apostichopus japonicus主要分布于潮間帶至深海海域，絕大多數(shù)營底棲生活，附著在礁石、泥沙和海藻叢生的地帶［1］，主要以底質(zhì)表面附著的單細胞藻類、海藻碎片、有機碎屑、微生物和腐殖質(zhì)等為食［2］，其中底棲硅藻是重要的食物來源［3］。

隨著刺參育苗技術(shù)的提高，中國北方沿海刺參人工養(yǎng)殖迅速崛起，成為一種新興的海洋產(chǎn)業(yè)［4-5］。刺參室內(nèi)工廠化培育主要應(yīng)用人工配合飼料，但人工配合飼料配方混雜、營養(yǎng)不平衡，水質(zhì)污染嚴重，養(yǎng)殖效果不穩(wěn)定，已成為制約刺參產(chǎn)業(yè)發(fā)展的瓶頸之一［6］。近年來，海洋中的天然餌料(如大型海藻)廣泛應(yīng)用于魚類、蝦類、貝類和棘皮動物的海水養(yǎng)殖中，并取得了較好的效果［7］，受到人們的關(guān)注［8-9］。此后，有學(xué)者陸續(xù)研究了大型海藻飼料對刺參苗種繁育及幼體生長的影響［10-14］，但是，針對大型海藻碎屑對小規(guī)格幼刺參培育效果的研究尚未見報道。本研究中，分析了投喂不同海藻飼料對體質(zhì)量為 (1．25±0．02)g幼參的生長和養(yǎng)殖水環(huán)境中氨氮含量的影響，旨在為優(yōu)化刺參配合飼料及提高其苗種培育的經(jīng)濟和生態(tài)效益提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料

試驗用刺參幼參購自大連市莊河寶發(fā)海珍品養(yǎng)殖公司，體質(zhì)量為 (1．25±0．02)g，采回后暫養(yǎng)于實驗室玻璃鋼循環(huán)水槽中，溫度保持在 (18±1)℃，鹽度為28～31，暫養(yǎng)前2天不投喂，此后每天投喂適量“益參寶”幼參全價配合飼料，投喂量為幼參體質(zhì)量的5%～8%，日投喂兩次(9:00，17:00)，暫養(yǎng)10 d，后2天停止投喂，選健康的個體進行試驗。

1.2 方法

1．2．1 飼料的制備 試驗用裙帶菜Undaria pinnatifida購于水產(chǎn)品批發(fā)市場，孔石莼Ulva pertusa和角叉菜Chondrus ocellatus采自大連市黑石礁海區(qū)附近的潮間帶。將新鮮的海藻用淡水反復(fù)清洗，清除其中的砂石粒、小型軟體動物和甲殼動物、大型原生動物等，清洗干凈后，將海藻置于自來水中煮沸1．5 min，以清除細菌及微生物的代謝產(chǎn)物［15］。

海藻碎屑懸浮液的制備:將新鮮海藻預(yù)處理后，取一定量藻體放入粉碎機 (MX-J210GP)中，加入少量消毒海水 (100℃，5 min)研磨，研磨后的海藻碎屑懸浮液分次通過孔徑為60 μm的篩絹網(wǎng)過濾，將濾液 (碎屑顆粒大小為1～15 μm)于4℃下保存。投喂前將飼料濾液進行抽濾，烘干 (60℃，24 h)后稱重，以確定海藻碎屑懸浮液中碎屑的干質(zhì)量。測定3個重復(fù)樣品，取平均值即為飼料濃度 (干質(zhì)量，g/mL)。

海藻干粉的制備:將新鮮海藻陰干后放入搖擺式粉碎機內(nèi) (XY-280B)粉碎1 min后，再經(jīng)孔徑為60 μm的篩絹過濾，所得海藻干粉放入冰箱中冷凍保存。

用上述兩種加工方法獲得的海藻飼料須在7 d內(nèi)使用。

1．2．2 試驗設(shè)計與飼養(yǎng)管理 試驗分為8組，投喂8種不同海藻飼料，飼料配方設(shè)計為干飼料組P1(75%孔石莼干粉+25%海泥)、P2(75%角叉菜干粉+25%海泥)、P3(75%裙帶菜干粉+25%海泥)、干混合飼料組MP(25%孔石莼干粉 +25%角叉菜干粉+25%裙帶菜干粉+25%海泥)、鮮飼料組F1(75%孔石莼碎屑+25%海泥)、F2(75%角叉菜碎屑+25%海泥)、F3(75%裙帶菜碎屑+25%海泥)、鮮混合飼料組MF(25%孔石莼碎屑+25%角叉菜碎屑+25%裙帶菜碎屑+25%海泥)。每組設(shè)3個平行，每個平行放6頭幼參。試驗在容積為25 L的藍色塑料水槽中進行，每個水槽加海水20 L，用100 W加熱棒控溫，水溫為 (18±1)℃，鹽度為28～31，光照周期為10 L∶14D。

試驗期間，連續(xù)充氣，每天換水兩次，日換水量為100%，投喂前換水，每天9:00和17:00投喂，過量投喂，投喂量為刺參總質(zhì)量的4%～5%，共飼養(yǎng)60 d。換水前收集殘餌和糞便，于65℃下烘干至恒重，干燥保存。每5天徹底清洗一次水槽，定期觀察并記錄刺參的生長狀態(tài)及水體的氨氮變化。

1．2．3 指標(biāo)的測定與計算 試驗開始前隨機選取30頭幼參，置于65℃下烘干至恒重，作為試驗初始樣品的干質(zhì)量。把刺參輕輕放在干濾紙上30 s后，由固定人員快速稱重，以減少操作誤差。

試驗結(jié)束時，測定投喂不同海藻飼料條件下，幼參的特定生長率 (SGR)、存活率 (SR)、攝食率 (IR)、排糞率 (FPR)和飼料轉(zhuǎn)化率 (FCE)，同時測定刺參培養(yǎng)水環(huán)境中氨氮的含量，其計算公式為

其中:W0和Wt分別為試驗初始和結(jié)束時幼參的干質(zhì)量 (g);t為試驗時間 (d);C為攝食的飼料干質(zhì)量 (g);F為排出糞便的干質(zhì)量 (g)。

1.3 數(shù)據(jù)處理

用 SPSS 19．0軟件進行單因素方差分析(One-way ANOVA)，檢驗不同飼料組刺參的特定生長率、攝食率、排糞率和餌料轉(zhuǎn)化率的差異性，當(dāng)差異顯著時，用Duncan法進行組間多重比較，顯著性水平設(shè)為0．05。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同飼料組幼參的生長

從表1可見:試驗初始各組的幼參濕質(zhì)量和干質(zhì)量均無顯著性差異 (P＞0．05);試驗結(jié)束時，鮮孔石莼飼料組 (F1)幼參的濕質(zhì)量最大，為(2．57 ±0．17)g，且顯著高于其他組 (P ＜0．05)，其次為F2組和F3組，P2組幼參的濕質(zhì)量最小，為 (1．49±0．07)g;各組幼參干質(zhì)量的差異性與濕質(zhì)量相似，F(xiàn)1組幼參的干質(zhì)量明顯大于其他組(P＜0．05);F1組幼參的 SGR值最高，為 (1．38±0．13)%/d，且顯著高于其他組 (P＜0．05)，P2組刺參的SGR值最小，為 (0．63±0．11)%/d，且與MP和F2處理組有顯著性差異 (P＜0．05)。

2.2 不同飼料組幼參的存活率

從表1可見:F1組和F3組幼參的存活率最高，均為100%，P1組存活率最低，為83．33% ±13．61%;8個飼料組之間均無顯著性差異 (P＞0．05)?？傮w來看，鮮海藻組幼參的存活率高于海藻干粉組。

表1 不同飼料組仿刺參幼參的特定生長率和成活率 (mean±S.E.)Tab.1 Specific growth rate and survival rate of juvenile sea cucumber Apostichopus japonicus in different diet treatment groups

2.3 各組幼參的飼料轉(zhuǎn)化率

從表2可見:F1組幼參的飼料轉(zhuǎn)化率最高，為7．65% ±1．38%，且顯著高于其他組 (P＜0．05)，飼料系數(shù)最小;F3組的飼料轉(zhuǎn)化率最低，為3．97% ±0．37%，但僅與 F1組有顯著性差異(P＜0．05)?？傮w來看，無論是鮮海藻飼料組還是海藻干粉飼料組，孔石莼組的飼料轉(zhuǎn)化率均較高。

2.4 各組幼參的攝食率和排糞率

從表2可見:F1組幼參的攝食率最高，為(0．088 ±0．007)g/(g·d)，且顯著高于其他組(P＜0．05)，其次為MP和MF組，P2組刺參的攝食率最小，為 (0．051±0．004)g/(g·d)，且與干粉飼料組中的P1組和P3組無顯著性差異 (P＞0．05)，但與MP組有顯著性差異 (P＜0．05);鮮海藻處理組的F2、F3和MF組間攝食率無顯著性差異 (P＞0．05)?？傮w來看，鮮海藻組幼參的攝食率高于海藻干粉組。

從表2可見，F(xiàn)1組幼參的排糞率最高，為(0．008 ±0．002)g/(g·d)，且顯著高于其他組(P ＜ 0．05)，F(xiàn)2、F3 組 最 低，均 為 (0．002 ±0．001)g/(g·d)，且與MF組無顯著性差異 (P＞0．05);孔石莼干粉組P1組與P2、P3組間有顯著性差異 (P＜0．05)，但與MP組無顯著性差異 (P＞0．05)?？傮w來看，無論是鮮海藻飼料組還是海藻干粉飼料組，孔石莼組的排糞率均較高。

表2 不同飼料組刺參幼參的生長參數(shù)和水體中的氨氮含量 (mean±S.E.)Tab.2 Growth parameters of juvenile sea cucumber Apostichopus japonicus and ammonia nitrogen content in water in different diet treatment groups

2.5 各組養(yǎng)殖水體中氨氮的含量

從表2可見，F(xiàn)1組水體中的平均氨氮含量最低，為 (0．005±0．003)mg/L，且顯著低于其他各組 (P＜0．05)，而其他各組間均無顯著性差異(P＞0．05)?？傮w來看，鮮海藻飼料對氨氮含量的影響比海藻干粉要低，且隨著幼參的生長，除MP和F1組外，各組水體的氨氮含量均呈下降趨勢。試驗結(jié)束時，各組水體中氨氮的含量分別為:P1(0．003 ±0．003)mg/L、P2(0．016 ± 0．006)mg/L、P3(0．002 ± 0．002)mg/L、MP(0．016 ± 0．004)mg/L、F1(0．007 ± 0．004)mg/L、F2(0．015 ±0．005)mg/L、F3(0．009 ± 0．008)mg/L、MF(0．008 ±0．001)mg/L，均低于 0．02 mg/L。

3 討論

在刺參工廠化培育過程中，稚參和幼參階段的飼料種類主要有海浮泥 (含大量底棲硅藻)、大型海藻粉或者磨碎液、人工配合飼料和各種添加劑等，大型海藻主要有鼠尾藻Sargassum thunbergii、馬尾藻 Sargassum kjellmanianwn、大葉藻 Zostera marina、海帶Laminaria japanica等。目前，關(guān)于不同飼料對刺參幼參生長和存活的影響研究較多［12-14，16］。大量研究表明，孔石莼能有效促進刺參的生長［17］，且附著變態(tài)后的稚參期，投喂孔石莼碎屑效果最佳［10］。Liu 等［18］和 Xia 等［19］對刺參投喂不同大型海藻時發(fā)現(xiàn)，石莼組刺參的增長率和攝食率高于其他組。本研究中，幼參 (1．25 g±0．02 g)攝食鮮孔石莼時生長最快，這與以上研究結(jié)果基本一致。但是，本試驗中發(fā)現(xiàn)，投喂孔石莼干粉飼料時，刺參幼參的生長和存活率處于中等水平，這可能是鮮孔石莼在加工成干粉過程中營養(yǎng)成分發(fā)生改變或者有一定程度的損失，因而不能很好地滿足幼參的營養(yǎng)需求。

本研究中，幼參攝食鮮孔石莼時生長最快，飼料系數(shù)最低，表明鮮孔石莼比其他海藻飼料的促生長作用較大，刺參攝食鮮孔石莼能獲得更多的營養(yǎng)物質(zhì)。有研究指出，鮮孔石莼碎屑富含纖維素、碳水化合物、蛋白質(zhì)、各種微量元素和多不飽和脂肪酸等，其中蛋白質(zhì)和氨基酸的含量較高 (接近干質(zhì)量的 40%)［20］。Fu 等［21］研究認為，在刺參腸道中，消化酶種類較多，但活力最高的是蛋白酶。說明刺參消化蛋白質(zhì)的能力較強，對食物中蛋白質(zhì)的需求量也較高［22］，如幼參的最適蛋白質(zhì)需求量為18．21% ～ 24．18%［23-24］。因此，在幼參培育過程中，營養(yǎng)豐富的孔石莼適宜作為幼參的主要飼料，但單一的海藻往往不能滿足刺參的生長需求，添加一些富含蛋白質(zhì)和脂肪的人工配合飼料能明顯促進刺參的生長［22］。

刺參以攝食沉積物為主，能量分配模式與其他水產(chǎn)動物不同，排糞能較高，生長能較低［25-27］。本試驗中，攝食鮮孔石莼的刺參攝食率明顯高于其他飼料組，攝食所獲取的能量除一部分用于較高的排糞率和其他活動外，大部分用于生長需求。除鮮孔石莼組外，鮮海藻飼料組刺參的攝食率較海藻干粉組高，而排糞率較低，投喂鮮孔石莼試驗組水中的氨氮平均含量明顯低于其他組，而投喂孔石莼干粉的水體氨氮含量最高。這種差異的原因，應(yīng)從海藻和刺參自身的生理生態(tài)學(xué)分析，可能是海藻所含營養(yǎng)物質(zhì)和刺參排氨不同所致。

綜上所述，在幾種常見且易獲得的海藻飼料中，投喂鮮孔石莼磨碎液培育幼參的效果最佳。

［1］廖玉麟．中國動物志 棘皮動物門 海參綱［M］．北京:科學(xué)出版社，1997．

［2］常亞青，丁君，宋堅，等．海參、海膽生物學(xué)研究與養(yǎng)殖［M］．北京:海洋出版社，2004．

［3］隋錫林．海參增養(yǎng)殖［M］．北京:農(nóng)業(yè)出版社，1990．

［4］張春云，王印庚，榮小軍．國內(nèi)外海參自然資源、養(yǎng)殖狀況及存在問題［J］．海洋水產(chǎn)研究，2004，25(3):89-97．

［5］宋修武．大力發(fā)展海參健康養(yǎng)殖培育海洋漁業(yè)經(jīng)濟發(fā)展新亮點［J］．齊魯漁業(yè)，2005，22(1):1-2．

［6］袁成玉．海參飼料研究的現(xiàn)狀與發(fā)展方向［J］．水產(chǎn)科學(xué)，2005，25(1):71-75．

［7］常巧玲，孫建義．海藻飼料資源及其在水產(chǎn)養(yǎng)魚中的應(yīng)用研究［J］．飼料工業(yè)，2006，27(2):62-64．

［8］隋錫林，胡慶明．幼參人工配合飼料的研究［J］．水產(chǎn)科學(xué)，1986，5(3):22-25．

［9］唐黎，王吉橋，許重．不同發(fā)育期的幼體和不同規(guī)格刺參消化道中四種消化酶的活性［J］．水產(chǎn)科學(xué)，2007，26(5):275-277．

［10］殷旭旺，林華劍，閔文武，等．投喂不同餌料對刺參海上網(wǎng)箱育苗幼體培育效果的影響［J］．大連海洋大學(xué)學(xué)報，2014，29(2):126-130．

［11］于麗娜，鄢娜，魯媛媛，等．刺參北方海區(qū)網(wǎng)箱生態(tài)繁育技術(shù)初步探討［J］．水產(chǎn)養(yǎng)殖，2013(3):11-13．

［12］王吉橋，隋曉楠，顧公明，等．不同餌料搭配及投餌量對仿刺參稚、幼參生長和成活的影響［J］．水產(chǎn)科學(xué)，2008，27(2):55-58．

［13］朱建新，曲克明，李健，等．不同處理方法對滸苔飼喂稚幼參效果的影響［J］．漁業(yè)科學(xué)進展，2009，30(5):108-112．

［14］呂航，崔相東，王巧晗，等．不同餌料對刺參幼參的生長、耗氧和排氨的影響［J］．中國海洋大學(xué)學(xué)報:自然科學(xué)版，2013，43(12):25-29．

［15］Yin X W，Min W W，Lin H J，et al．Population dynamics，protein content，and lipid composition of Brachionus plicatilis fed artificial macroalgal detritus and Nannochloropsis sp．diets［J］．Aquaculture，2013，380/383:62-69．

［16］王吉橋，叢文虎，姜玉聲，等．底棲硅藻種類和密度對仿刺參幼體和稚參生長與成活的影響［J］．大連海洋大學(xué)學(xué)報，2010，25(3):203-209．

［17］朱建新，劉慧，冷凱良，等．幾種常用餌料對稚幼參生長影響的初步研究［J］．海洋水產(chǎn)研究，2007，28(5):48-53．

［18］Liu Y，Dong S L，Tian X L，et al．The effect of different macroalgae on the growth of sea cucumber(Apostichopus japonicus Selenka)［J］．Aquaculture Research，2010，41:881-885．

［19］Xia S D，Yang H S，Zhang L L，et al．Effects of different seaweed diets on growth，digestibility，and ammonia-nitrogen production of the sea cucumber Apostichopus japonicus(Selenka)［J］．Aquaculture，2012，338/341:304-308．

［20］Sargent J R，McEvoy L A，Estevez A，et al．Lipid nutrition of marine fish during early development:current status and future directions［J］．Aquaculture，1999，179(1/4):217-229．

［21］Fu X Y，Xue C H，Miao B，et al．Characterization of proteases from the digestive tract of sea cucumber(Stichopus japonicus):high alkaline protease activity［J］．Aquaculture，2005，246(1/4):321-329．

［22］王吉橋，唐黎，許重，等．仿刺參消化道的組織學(xué)及其4種消化酶活力的周年變化［J］．水產(chǎn)科學(xué)，2007，26(9):481-484．

［23］朱偉，麥康森，張百剛，等．刺參稚參對蛋白質(zhì)和脂肪需求量的初步研究［J］．海洋科學(xué)，2005，29(3):54-58．

［24］Sun H，Liang M，Yan J，et al．Nutrient requirements and growth of the sea cucumber，Apostichopus japonicus［C］//Advances in sea cucumber aquaculture and management．Rome:FAO，2004:327-331．

［25］崔奕波．魚類生物能量學(xué)的理論與方法［J］．水生生物學(xué)報，1989，13(4):369-383．

［26］Tian X L，Dong S L．The effect of thermal amplitude on the growth of Chinese shrimp Fenneropenaeus chinensis［J］．Aquaculture，2006，251(2/4):516-524．

［27］Zheng Z H，Dong S L，Tian X L．Effects of intermittent feeding of different diets on growth of Litopenaeus vannamei［J］．Journal of Crustacean Biology，2008，28:21-26．