張新新,梁晉如,趙文娜,郝群峰,孫文基，王 燕

(1.西北大學(xué) 陜西省生物醫(yī)藥重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室, 陜西 西安 710069;2.陜西生物科技有限公司,陜西 西安 710061)

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·生命科學(xué)·

氣相色譜法測(cè)定瑞克衛(wèi)瑞消毒液中桂皮醛和丁香酚的含量

張新新1,梁晉如1,趙文娜1,郝群峰2,孫文基1，王 燕1

(1.西北大學(xué) 陜西省生物醫(yī)藥重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室, 陜西 西安 710069;2.陜西生物科技有限公司,陜西 西安 710061)

建立氣相色譜法測(cè)定瑞克衛(wèi)瑞消毒液中桂皮醛和丁香酚的含量。 采用SE-30毛細(xì)管柱(30 m×0.32 mm, 0.25 μm);載氣:N2;FID檢測(cè)器;檢測(cè)器溫度240℃,進(jìn)樣口溫度220℃,分流比10∶1,程序升溫。采用氣相色譜法測(cè)定瑞克衛(wèi)瑞消毒液中桂皮醛和丁香酚的含量,桂皮醛在0.070～0.242 mg·mL-1范圍內(nèi),呈良好的線(xiàn)性關(guān)系(R2=0.999 1),平均回收率為98.93%;丁香酚在0.230～0.761 mg·mL-1范圍內(nèi),呈良好的線(xiàn)性關(guān)系(R2=0.999 6),平均回收率為99.58%。所建立的氣相色譜法,方便易行,重復(fù)性好,可以對(duì)瑞克衛(wèi)瑞消毒液桂皮醛和丁香酚的含量進(jìn)行測(cè)定。

氣相色譜;瑞克衛(wèi)瑞消毒液;桂皮醛;丁香酚;含量測(cè)定

瑞克衛(wèi)瑞消毒液(陜衛(wèi)消證字(2010)第0062號(hào))由肉桂、丁香、花椒、苦參和辛夷等中草藥精制而成,是由純中草藥制作而成的消毒液,主要用于物體及玩具表面的清潔,具有很強(qiáng)的殺菌作用。它含有桂皮醛和丁香酚,桂皮醛具有明顯的抗菌、消炎作用[1-3],丁香酚具有驅(qū)蟲(chóng)及抗菌作用[4-6],為消毒液的主要活性成分。兩種成分具有揮發(fā)性,適合GC法分析,所以本文建立GC法同時(shí)測(cè)定瑞克衛(wèi)瑞消毒液中桂皮醛[7-10]和丁香酚[11-16]的含量,并對(duì)方法學(xué)進(jìn)行考察。以期為其質(zhì)量控制提供一種簡(jiǎn)便易行的測(cè)定方法。

1 儀器與試劑

G-3900日立氣相色譜儀,氫火焰離子化檢測(cè)器,Anastar 色譜工作站。SPH-200氫氣發(fā)生器和SPB-3全自動(dòng)空氣源。瑞克衛(wèi)瑞消毒液由陜西生物科技有限公司提供;桂皮醛(批號(hào):20101025)對(duì)照品上海雙香助劑廠提供,丁香酚對(duì)照品由上海飛樣化工廠提供,無(wú)水乙醇為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

SE-30毛細(xì)管柱(30 m×0.32 mm, 0.25 μm);程序升溫:起始柱溫80℃,保留時(shí)間2 min,以20℃/min的速率升到150℃保留4 min,以10℃/min的速率升到170℃,最后以30℃/min的速率升到230℃保留8 min;載氣:氮?dú)?檢測(cè)器:FID;分流比10∶1;檢測(cè)器溫度:240℃;進(jìn)樣口溫度:220℃。在此條件下,桂皮醛和丁香酚色譜峰完全分離,并且他們兩者之間也呈良好的分離。理論塔板數(shù)按桂皮醛峰和丁香酚峰計(jì)算應(yīng)不低于10 000,見(jiàn)圖1。

圖1 氣相色譜圖Fig.1 GC chromatograms

2.2 對(duì)照品溶液的配制

2.2.1 桂皮醛溶液的配制 用200 μL移液槍精密吸取密度為1.05 g·mL-1的桂皮醛對(duì)照品溶液10 μL,加入到100 mL量瓶中,加無(wú)水乙醇溶解定容至刻度,配成濃度為0.105 mg·mL-1的溶液。

2.2.2 丁香酚溶液的配制 用200 μL移液槍精密吸取密度為1.067 g·mL-1的丁香酚對(duì)照品溶液10 μL,加入到25 mL量瓶中,加無(wú)水乙醇溶解定容至刻度,配成濃度為0.42 mg·mL-1的溶液。

2.3 供試品溶液的配制

用1 000 μL移液槍精密吸取500 μL瑞克衛(wèi)瑞消毒液,加入到10 mL量瓶中,用無(wú)水乙醇溶解定容至刻度,搖勻,即得。

2.4 系統(tǒng)適用性實(shí)驗(yàn)

2.4.1 線(xiàn)性關(guān)系考察

1)桂皮醛線(xiàn)性關(guān)系 分別精密吸取1 μL濃度為0.084 mg·mL-1，0.105 mg·mL-1，0.126 mg·mL-1，0.157 mg·mL-1和0.210 mg·mL-1的桂皮醛對(duì)照品溶液進(jìn)入氣相色譜儀,按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行測(cè)定,以桂皮醛濃度為橫坐標(biāo)和桂皮醛吸收峰面積為縱坐標(biāo)進(jìn)行線(xiàn)性回歸得到方程:Y=1 472X-441.5 (R2=0.999 1)。結(jié)果表明桂皮醛在0.070～0.242 mg·mL-1范圍內(nèi)關(guān)系良好。

2)丁香酚線(xiàn)性關(guān)系 分別精密吸取1 μL濃度為0.242 mg·mL-1，0.336 mg·mL-1，0.420 mg·mL-1，0.504 mg·mL-1和0.630 mg·mL-1的丁香酚對(duì)照品溶液進(jìn)入氣相色譜儀,按“2.1” 項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行測(cè)定,以丁香酚濃度為橫坐標(biāo)和丁香酚吸收峰面積為縱坐標(biāo)進(jìn)行線(xiàn)性回歸得到方程:Y=4 313X+112.1 (R2=0.999 6)。結(jié)果表明丁香酚在0.230～0.761 mg·mL-1范圍內(nèi)關(guān)系良好。

2.4.2 精密度試驗(yàn) 精密吸取瑞克衛(wèi)瑞消毒液(批號(hào):1103037)供試品溶液1μL,連續(xù)進(jìn)樣6次,測(cè)定桂皮醛峰面積分別為383，393，407，409，412和414,丁香酚峰面積分別為3 003，3 073，3 108，3 127，3 153和3 176。結(jié)果表明，桂皮醛含量的RSD(n=6)值為3.05%,丁香酚含量的RSD(n=6)值為1.20%,說(shuō)明儀器精密性良好。

2.4.3 重復(fù)性試驗(yàn) 取瑞克衛(wèi)瑞消毒液(批號(hào):1103036)按照“2.3”配制供試品溶液方法制備6份溶液,按“2.1”項(xiàng)下條件,進(jìn)樣1 μL測(cè)定峰面積。結(jié)果表明，桂皮醛含量平均值為0.79 mg·mL-1,RSD(n=6)為2.20%,丁香酚含量平均值為6.67 mg·mL-1,RSD(n=6)為3.67%。說(shuō)明氣相色譜法重復(fù)性良好。

2.4.4 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取瑞克衛(wèi)瑞消毒液(批號(hào):1103038)按照“2.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液,然后分別在0, 2, 6, 10, 16h進(jìn)樣1 μL。按照“2.1”色譜條件進(jìn)行峰面積測(cè)定。結(jié)果表明，桂皮醛含量平均值是0.92 mg·mL-1,RSD為2.3%,丁香酚含量平均值為7.15 mg·mL-1,RSD為2.2%,表明樣品在16 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.4.5 回收率試驗(yàn) 精密量取已知含量的6份瑞克衛(wèi)瑞消毒液樣品(批號(hào):1103036)各5 mL,置100 mL量瓶中,再分別精密加入密度為1.05 g·mL-1的桂皮醛對(duì)照品溶液4 μL和密度為1.067 g·mL-1的丁香酚對(duì)照品溶液30 μL。按照“2.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液,按“2.1”項(xiàng)下條件進(jìn)樣1 μL,計(jì)算樣品加樣回收率。結(jié)果表明，桂皮醛平均加樣回收率是98.93%,RSD(n=6)為3.28%,丁香酚平均回收率為99.58%,RSD(n=6)為2.58%。結(jié)果如表1和表2所示。

表1 桂皮醛加樣回收率試驗(yàn)Tab.1 The results of cinnamaldehyde recovery

表2 丁香酚加樣回收率試驗(yàn)Tab.2 The results of eugenol recovery

2.5 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

分別取3批樣品按照“2.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，平行試驗(yàn)兩份。按照“2.1”項(xiàng)下的色譜條件，測(cè)定瑞克衛(wèi)瑞消毒液中桂皮醛和丁香酚的含量，結(jié)果見(jiàn)表3。

表3 瑞克衛(wèi)瑞消毒液桂皮醛和丁香酚含量測(cè)定結(jié)果(n=2)Tab.3 The content of cinnamaldehyde and eugenol in Ruikeweirui disinfectant fluid

3 討 論

3.1 進(jìn)樣方式的選擇

桂皮醛和丁香酚為揮發(fā)油中的主要成分。采用頂空進(jìn)樣方法測(cè)定瑞克衛(wèi)瑞消毒液中桂皮醛和丁香酚的含量時(shí),發(fā)現(xiàn)桂皮醛和丁香酚不能夠全部從溶液中蒸發(fā)出來(lái)。但是，溶液中一些容易揮發(fā)的成分被蒸出來(lái),影響桂皮醛和丁香酚的含量測(cè)定,使測(cè)定結(jié)果不準(zhǔn)確,因此進(jìn)樣方式采用直接進(jìn)樣。

3.2 柱子的選擇

用PEG-20M毛細(xì)管色譜柱能夠使桂皮醛和丁香酚呈現(xiàn)良好的分離效果,其中桂皮醛出峰時(shí)間為14.767 min左右,丁香酚出峰時(shí)間為16.283 min左右。但是,程序升溫的過(guò)程很長(zhǎng),完成一次進(jìn)樣測(cè)定大約需要40 min的時(shí)間。而選用SE-30毛細(xì)管色譜柱,桂皮醛和丁香酚的出峰時(shí)間分別為8.492 min左右和10.200 min左右,桂皮醛和丁香酚呈現(xiàn)較好的分離效果。用此毛細(xì)管色譜柱進(jìn)行含量測(cè)定,完成一次進(jìn)樣大約需要20 min的時(shí)間,程序縮短到原來(lái)的一半,在很大的程度上節(jié)約了時(shí)間。

3.3 時(shí)間的選擇

用SE-30毛細(xì)管色譜柱摸索條件的時(shí)候發(fā)現(xiàn),80℃保留2 min,150℃保留4 min,170℃不保留,230℃保留8 min,是比較理想的程序升溫條件。一方面程序升溫的時(shí)間較短;另一方面在230℃時(shí)保留的時(shí)間不宜過(guò)短也不宜過(guò)長(zhǎng)。如果過(guò)短,使得每次留在柱子上的雜質(zhì)過(guò)多,影響柱子的壽命。如果過(guò)長(zhǎng),會(huì)使程序升溫的時(shí)間過(guò)長(zhǎng)。通過(guò)對(duì)比發(fā)現(xiàn)，8 min的時(shí)間比較理想。

采用此方法對(duì)陜西生物科技有限公司的瑞克衛(wèi)瑞消毒液中桂皮醛和丁香酚的含量進(jìn)行測(cè)定,結(jié)果簡(jiǎn)便可行,重復(fù)性也較好。

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(編 輯徐象平)

Determination of cinnamaldehyde and eugenol in Ruikeweirui disinfectant fluid by GC method

ZHANG Xin-xin1, LIANG Jin-ru1, ZHAO Wen-na1, HAO Qun-feng2，SUN Wen-ji1, WANG Yan1

(1.Biomedicine Key Laboratory of Shaanxi Province, Northwest University, Xi′an 710069, China; 2.Shaanxi Biological Technology Co.Ltd, Xi′an 710061, China)

Establishing GC method to determine cinnamaldehyde and eugenol in Ruikeweirui disinfectant fluid. SE-30(30 m×0.32 mm, 0.25 μm) capillary column was used with nitrogen as carrier gas and FID as detector.The column temperature rise programming with split ratio of 10∶1.The detector temperature was 240℃ and the sample injection temperature was 220℃. The linear range of the content of cinnamaldehyde and eugenol in Ruikeweirui disinfectant fluid by GC method was 0.070～0.242 mg·mL-1(R2=0.999 1) and 0.230～0.661 mg·mL-1(R2=0.999 6), respectively,which showed good linearity, and the average recovery was 98.93% and 99.58%, respectively. The methods is convenient, reliable and reproducible so that it can be used to determine cinnamaldehyde and eugenol in Ruikeweirui disinfectant fluid.

GC; Ruikeweirui disinfectant fluid; cinnamaldehyde; eugenol; content determination

2014-04-11

教育部高等學(xué)校博士學(xué)科點(diǎn)專(zhuān)項(xiàng)科研基金資助項(xiàng)目(20126202230026)

張新新，男，內(nèi)蒙古赤峰人，從事天然產(chǎn)物提取與分離研究。

王燕，女，寧夏固原人，工程師，從事藥物分析(儀器)研究。

R284.1

：ADOI：10.16152/j.cnki.xdxbzr.2015-02-017