韓兆國，孫夕林，申寶忠

隨著惡性腫瘤的發(fā)病率和死亡率的逐年遞增，基于組織形態(tài)學改變的常規(guī)影像學檢查、病理學檢查及血清學檢查在內(nèi)的傳統(tǒng)腫瘤診斷方式已無法滿足臨床需求，且其檢查結果滯后于疾病發(fā)展，無法準確反映腫瘤早期的進展情況。而惡性腫瘤的傳統(tǒng)治療包括手術、化療、放療由于其效果的局限性并伴隨嚴重的毒、副作用亦無法滿足療效需求。近年來，N Engl J Med、Nature、Science文章指出：21世紀疾病的診療已經(jīng)跨入分子水平時代，癌癥早期發(fā)生與發(fā)展的始動因素是分子水平的異常，在早期可以通過其特殊的“分子特征”與正常細胞相區(qū)別[1-4]。這些具有“分子特征”的基因、蛋白質(zhì)等稱為“分子靶點”。它們參與了癌癥增殖、侵襲、血管新生和轉移等惡性生物學進程，決定癌癥生物學特性[5，6]。依據(jù)這些特殊的“分子靶點”既可以實現(xiàn)癌癥的分類和分型，又可以作為靶點進行干預。生命科學研究證實，針對這些“分子靶點”進行靶向診斷和干預，在癌癥診療中具有巨大價值[7，8]。

分子成像技術借助靶向分子成像探針，對體內(nèi)特異性的分子靶點進行在體、實時、動態(tài)、定性定量成像，將復雜的生物學過程（如基因表達、信號傳導、蛋白質(zhì)之間相互作用等）變成直觀的圖像進行揭示。PET、SPECT以及其與CT和（或）MR的融合成像設備因其高靈敏度、高準確性、高穩(wěn)定性及無創(chuàng)性等特點而被廣泛應用于分子成像領域的研究。c-Met受體為一種酪氨酸激酶型受體，其異?；罨诙喾N惡性腫瘤如肺癌、惡性膠質(zhì)瘤、卵巢癌、胃癌、結直腸癌、腎癌等的發(fā)生發(fā)展過程中均起重要作用[9]。c-Met靶向分子成像可在體實時顯示c-Met的表達水平、活化狀態(tài)，對于存在c-Met表達腫瘤的早期檢出、c-Met靶向治療藥物受益人群的篩選、抗腫瘤藥物的療效監(jiān)測與評價、預后評估等有重要意義[10]。

c-Met正常與異常信號通路及腫瘤靶向治療

1.c-Met正常信號通路

c-Met基因是1984年由Cooper等[11]首先發(fā)現(xiàn)的一個原癌基因，其位于染色體7q21～q31，編碼的蛋白產(chǎn)物為酪氨酸激酶跨膜 受 體，稱c-Met（cellular-mesenchymal to epithelial transition factor），又稱MET，屬于受體型酪氨酸激酶（receptor tyrosine kinase，RTK）家族一員，其天然配體為間質(zhì)起源細胞產(chǎn)生的肝細胞生長因子／離散因子（HGF／SF）[12]，共同形成HGF／c-Met信號通路。成熟的c-Met受體是由跨膜片段β鏈（145kDa）和胞外片段α鏈（50kDa）組成的異二聚體復合物[13，14]，其胞外功能區(qū)的sema結構域（β鏈）為特異性HGF結合區(qū)域，胞內(nèi)則包含具有負性調(diào)控激酶活性的JM結構域、酪氨酸激酶結構域等。當c-Met與HGF結合后，c-Met胞內(nèi)區(qū)的4個酪氨酸殘基發(fā)生自身磷酸化，進而募集Gab-1、Grb-2、Shc和c-Cb1等銜接蛋白，接著通過復雜的機制引發(fā)一系列的磷酸化反應，活化PI-3K、ERK1／2、PLC-γ、STATs和FAK等重要的信號分子，進而調(diào)節(jié)細胞的增殖、存活、分化、形態(tài)發(fā)生和運動調(diào)控[15]，從而廣泛參與人體的多種正常生理活動。

2.c-Met異常信號通路

正常情況下，c-Met與HGF的結合是維持正常生理功能所必須的，并且受到機體嚴密調(diào)控，但在多種惡性腫瘤中存在HGF／c-Met信號通路的異常活化。HGF／c-Met信號通路的異常激活機制包括配體依賴途徑：HGF的旁分泌和自分泌，非配體依賴途徑：c-Met基因的過表達、突變、擴增、異位、重排及抑制因子的缺失等[16-18]。活化后，c-Met能促進DNA合成和細胞分裂、抑制癌細胞凋亡、促進癌細胞增殖；還可以促進癌細胞的侵襲和轉移。HGF／c-Met信號通路的異?；罨ㄟ^破壞鈣粘蛋白等粘附分子和細胞骨架的連接作用，最終導致細胞間粘附作用的減弱；該通路的異?；罨嗫赏ㄟ^增加癌細胞MMPs和uPA的表達來促進降解細胞外基質(zhì)（ECM）以增加癌細胞轉移能力；同時活化的c-Met信號通路通過影響Rho、Rac、和Cdc42等分子的功能，作用于肌動蛋白纖維骨架來增強癌細胞的運動能力。c-Met信號通路異?；罨罂梢酝ㄟ^多種方式直接或間接促進新生血管的形成，進而促進腫瘤的發(fā)生發(fā)展[19]。另外，研究表明c-Met的異常表達還與EGFR分子靶向治療耐藥直接相關。

3.c-Met與腫瘤靶向治療

c-Met異常表達于多種實體瘤中，參與癌細胞的生長、侵襲、和轉移，因此針對c-Met靶點的腫瘤分子靶向治療具有重要意義。c-Met分子靶向藥物主要分為拮抗劑、抗體、小分子抑制劑，具體包括與HGF競爭性結合c-Met的生物拮抗劑NK1、NK2、NK4[20]；中 和HGF活 性 的 抗HGF單 克 隆 抗 體AMG102、AV-299等，他們可與其他分子靶向藥物發(fā)揮協(xié)同作用[21]；可以阻斷HGF與c-Met結合及抑制c-Met二聚化的抗c-Met單克隆抗體met-MAb、LY2875358等，臨床研究顯示此類藥物能夠延長c-Met陽性NSCLC患者的PFS及OS；非選擇性c-Met小分子抑制劑主要有Crizotinib、Cabozantinib、Foretinib等，以及選擇性c-Met小分子抑制劑有Tivantinib、AMG337、BMS-777607等。同時，對于EGFR抑制劑耐藥的NSCLC患者，聯(lián)合使用c-Met抑制劑可取的顯著療效[22]。

近年來，以c-Met為靶點的分子靶向藥物研究廣泛，發(fā)展迅速，已經(jīng)有多種藥物經(jīng)FDA批準用于臨床，但不加篩選的患者治療使用導致以c-Met為分子靶點的靶向治療總體有效率偏低。研究表明約40%的肺癌患者有c-Met的過表達，且表達水平在NSCLC細胞系中存在異質(zhì)性[23，24]。研究證明，c-Met異?；罨瘜δ[瘤預后有直接的影響，其表達與預后成負相關。

4.c-Met的檢測方法

目前c-Met異?；罨臋z測方法主要是分子病理以及血清學檢查。分子病理學檢查主要有以下幾種：①用于檢測c-Met表達水平的免疫組化（IHC）、westren-blot等；②用于檢測c-Met基因拷貝數(shù)的熒光原位雜交法（FISH）、實時熒光定量PCRTaqMan探針法；③DNA直接測序。這些檢測方法的特異性和敏感性各不相同，雖然因其準確性很高而被視作“金標準”，但分子病理檢查作為有創(chuàng)檢查其適用人群有限，無法反復取病理組織，且無法準確診斷異質(zhì)性豐富的腫瘤，因此不能合理的制定和調(diào)整治療方案；加之，各實驗室標準難以統(tǒng)一，不同檢測方法一致性不佳、可重復性不強，另外費用較高、耗時較長，準備階段復雜，總之分子病理學檢查無法用于c-Met異常表達腫瘤的臨床常規(guī)篩查。血清學檢查因其簡單、便捷、可重復性強而廣泛用于腫瘤的初步篩查，但同時血清學檢查敏感性較低、無法準確提供腫瘤原發(fā)灶及轉移灶的位置信息、檢查結果滯后于腫瘤進展，且檢查結果與病理學檢查存在一定差異[25-27]。因此，亟需一種實時、在體、準確監(jiān)測腫瘤c-Met異常表達狀態(tài)的方法，以指導臨床治療方案的制定和調(diào)整。

圖1 U87MG模型注射探針后各時間點的在體熒光成像（左：cMBP-GGG-Cy5.5；右：cMBP-AOC-Cy5.5），圖像減去背景熒光后給予偽彩處理，紅色箭頭指腫瘤（T）和腎臟（K）[30]。

靶向c-Met的分子成像

c-Met靶向分子成像可以快速準確的實時、定量檢測c-Met異常表達水平及活化狀態(tài)，對于篩選c-Met靶向藥物

1.抗體、多肽類分子成像探針

光學分子成像探針：Moshitch等[28]構建綠色熒光蛋白GFP-met嵌合體，并建立轉基因動物模型，經(jīng)激光共聚焦顯微成像發(fā)現(xiàn)GFP-met在腫瘤周圍區(qū)域亦有單個細胞的GFP-met高表達，證明c-Met表達與早期腫瘤侵襲及轉移相關。Zhang等[29]構建包含熒光素酶基因D-Luciferin和c-Met基因的表達載體，穩(wěn)定轉染表達c-Met的人膠質(zhì)瘤細胞系D54和U87，并通過活體光學成像準確監(jiān)測選擇性c-Met抑制劑SU11274對c-Met的生物活性變化。Kim等[30]利用Cy5.5標記c-Met特異性結合肽cMBP構建了兩種c-Met光學分子成像探針：cMBP-AOC-Cy5.5和cMBP-GGG-Cy5.5，并利用小動物活體成像系統(tǒng)IVIS在體評價了腦膠質(zhì)瘤U87MG模型對分子成像探針的攝取程度。注射4nmol的cMBP-GGG-Cy5.5和cMBPAOC-Cy5.5后的在體熒光成像結果（圖1）顯示cMBP-AOCCy5.5的成像效果均優(yōu)于cMBP-GGG-Cy5.5，分子成像探針注射24h后，cMBP-AOC-Cy5.5的腫瘤／肌肉達到33.71±3.34，提示cMBP-AOC-Cy5.5更適合用于U87MG模型的分子成像。隨后進行阻斷成像研究，平均阻斷幅度為35%，進一步驗證探針靶向性。Liu等[31]利用熒光染料Cy5標記了高特異性、高親和性結合c-Met的多肽GE137，合成c-Met靶向的光學分子成像探針Cy5-GE137，并對SKOv3動物模型（c-Met高表達人卵巢癌細胞系）進行c-Met在體光學分子成像。結果顯示，探針注射后2～3h之間腫瘤達到最強信號強度，并具有較高信噪比，其后腫瘤信號逐漸衰減，持續(xù)到注射后8h消失，證實該分子成像探針良好的靶向性。

圖2 MKN-45動物模型注射76Br-onartuzumab和89Zr-df-onartuzuma后不同時間點的PET圖像[10]。

Lu等[32]采用熒光強度高、穩(wěn)定性好的量子點（QD）標記抗c-Met單鏈抗體Ms20，合成c-Met靶向分子成像探針Ms20-QD，并對高表達c-Met的人肺癌細胞系H1993動物模型進行優(yōu)勢人群、實時療效檢測、預后評估等具有重要意義。目前，c-Met受體靶向分子成像研究已經(jīng)有一些報道，其關鍵在于靶向分子成像探針的構建及其成像質(zhì)量的評估，按照標記方法和標記對象的不同，c-Met靶向分子成像探針可以分成抗體、多肽類和小分子類分子成像探針。光學分子成像研究。結果顯示，探針注射6h后，腫瘤區(qū)域的熒光強度與對照組相比特異性增高，注射24h后的組織分布結果顯示腫瘤明顯選擇性高攝取Ms20-QD。同時實驗發(fā)現(xiàn)Ms20具有較好的細胞內(nèi)化作用，將其與聚乙二醇修飾的脂質(zhì)體阿霉素復合體（liposomal doxorubicin，LD）偶聯(lián)，合成靶向的藥物遞系統(tǒng)Ms20-LD，可同時實現(xiàn)抗腫瘤藥物的靶向遞送，以提高療效、減輕細胞毒性。該研究結果表明Ms20在分子靶向診療一體化方面極具應用潛力。

核醫(yī)學分子成像探針：Hay等[33]用125I標記抗HGF和抗c-Met單克隆抗體的混合物（抗HGF單抗通過特異性結合HGF而間接靶向c-Met受體）研發(fā)了用于SPECT成像的分子成像探針，對表達c-Met的人源性腫瘤SK-LMS-1和S-114動物模型及鼠源性腫瘤DA3和M-114動物模型進行靶向分子成像研究，SPECT動態(tài)成像顯示所有腫瘤都明顯攝取了該探針，但人源性腫瘤動物模型攝取和清除更快，提示其在人類腫瘤中診斷的潛力。鑒于單克隆抗體體內(nèi)半衰期長、滲透性差、且具有免疫源性等缺點，Jiao等[34]用125I標記性能更佳、更易代謝的人源性抗c-Met抗體片段hFab-Met-1，合成了c-Met靶向的SPECT分子成像探針125IhFab-Met-1，并對高表達c-Met的SKLMS-1／HGF（HGF／c-Met自分泌依賴性人平滑肌肉瘤細胞系）動物模型進行分子成像。結果顯示，靜脈注射探針5～8h后腫瘤大量攝取，一直持續(xù)到24h。SPECT成像同時顯示動物甲狀腺對該分子成像探針亦有較高的攝取，但是否具有特異性有待進一步研究。Zhao等[35]用125I標記人源性抗c-Met抗體Met-pep1同樣對SK-LMS-1／HGF動物模型進行分子成像研究，得到類似結果。其后，Knudsen等[36]利用125I標記特異性c-Met單克隆抗體MET4，合成分子成像探針125I-MET4，對高表達c-Met的SK-LMS-1／HGF動物模型和MNNG-HOS（人骨肉瘤細胞系）動物模型進行分子成像，成像效果良好，且生物分布研究表明，該分子成像探針探針顯示出很長的生物半衰期，約150個小時，因此限制了其臨床轉化。

Kim等[37]構建以125I-cMBP為基礎的125I-cMBP-GGG和125I-cMBP-AOC兩種分子成像探針，對U87MG動物模型進行SPECT／CT成像研究，并通過阻斷實驗證實探針靶向性。結果顯示，探針注射4h后，125I-cMBP-GGG有最高的腫瘤攝取和腫瘤／血液比，且融合圖像顯示更為清晰；同時發(fā)現(xiàn)這兩種分子成像探針均存在正常胰腺組織的非特異性高攝取。而在Kim的另一研究中，cMBP-AOC-Cy5.5的腫瘤攝取高于cMBP-GGGCy5.5，且沒有胰腺的高攝取。分析其原因，胰腺低攝取Cy5.5標記的分子成像探針可能是由于Cy5.5水解酶的存在，使得胰腺攝取Cy5.5標記的有效分子成像探針減少，125I卻不存在這種情況；而cMBP-AOC-Cy5.5的腫瘤攝取高于cMBP-GGGCy5.5則是由于cMBP-AOC-Cy5.5這種綴合物與腫瘤細胞的相互作用增加。

圖3 a）H441動物模型注射分子成像探針89Zr-PRS-110后不同時間點的軸面及冠狀面PET成像（白色箭頭所指為腫瘤）；b）不同時間點的腫瘤及各器官SUV值[42]。

圖4 U87MG及MDA-MB-231動物模型注射分子成像探針64 Cu-NOTA-rh-HGF和64 Cu-NOTA-dnrh-HGF后各時間點的PET圖像（白色箭頭所指為腫瘤）[43]。

在此基礎之上，Kim又[38]在羧基端接上連接1，2，3-苯三唑，以實現(xiàn)更加穩(wěn)定的99mTc標記，標記率達到85%～90%，進一步優(yōu)化分子成像探針合成，發(fā)現(xiàn)當cMBP連接三個甘氨酸時親和力最高（0.06μmol），且在體外U87MG細胞攝取實驗中攝取率也最高，同時利用阻斷實驗也進一步驗證其特異性，顯示其用于c-Met靶向分子成像的潛力。但該探針的在體評測及分子成像研究尚在研究階段，至今未有成果發(fā)表。Kim的研究成果表明cMBP-Linker-NH2結構可作為放射性核素分子成像探針合成及靶向放射性治療藥物合成的基礎結構，并可通過Linker修飾或放射性核素替換來優(yōu)化此結構。

目前，利用125I標記的抗體、多肽類示蹤劑已被研發(fā)并用于體外細胞學及小動物在體成像研究。然而，125I標記的分子成像探針由于其對甲狀腺的特異性損傷而不適合于臨床應用研究。與125I相比較，99mTc標記的抗體、多肽類分子成像探針其標記方法便捷、簡單，同時能夠獲得滿意的臨床圖像而更好廣泛的用于c-Met靶向分子成像探針的構建。

Petrelli等[39]發(fā)現(xiàn)鼠源性抗c-Met抗體DN30能夠特異性地與c-Met胞外結合域結合（Kd＝2.64×10-9M）。Perk等[40]利用89Zr（t1／2＝78.4h，）和131I（t1／2＝199.2h）對DN30進行了標記，分別合成PET分子成像探針89Zr-N-sucDf-DN30和131IN-sucDf-DN30，并對對荷人胃癌細胞GTL-16（Met高表達）動物模型和荷人頭頸鱗癌細胞FaDu（Met低表達）動物模型進行PET成像研究。在GTL-16動物模型中，與131I-N-sucDf-DN30相 比，89Zr-N-sucDf-DN30顯 示出了較高的腫瘤攝取（12.2±4.3%ID／g～19.6±3.3%ID／g，1～5d），89Zr-N-sucDf-DN30的腫瘤／正常組織（肝脾除外）攝取比均高于131I-N-sucDf-DN30，與生物分布結果一致，鑒于這些對比分析，作者選用89Zr-N-sucDf-DN30進行pet成像的研究。兩種模型的PET動態(tài)成像顯示，腫瘤至少在1d后清晰顯影，GTL-16模型的腫瘤顯影更清晰，且SUV值隨時間減小，同時小至11mg的腫瘤也能清晰顯影，PET圖像與分布結果有很好的相關性（R2＝0.98），證明分子成 像 探 針89Zr-N-sucDf-DN30具有良好的臨床轉化潛力。Jagoda等[10]用76Br和89Zr分 別 標 記 抗c-Met單臂單克隆抗體onartuzumab，合成靶向c-Met的分子成像探針76Br-onartuzumab和89Zr-df-onartuzumab。對MKN-45、SUN-16、U87MG三種c-Met表達水平依次遞減的人腫瘤細胞動物模型進行PET成像。成像結果（圖2）顯示，腫瘤特異性高攝取76Br-onartuzumab和89Zrdf-onartuzumab且與細胞c-Met表達水平一致，即MKN-45模型攝取最高，且兩種探針都在腫瘤、血液、腎臟和肺中存在較高攝取。在MKN-45模型，76Bronartuzumab在注射18～48h后腫瘤攝取達到相對恒定（3%ID／g）、腫瘤／肌肉比值范圍4：1～6：1，然而89Zr-df-onartuzumab的腫瘤攝取持續(xù)增加到探針注射后120h（23%ID／g）、腫瘤／肌肉比范圍20：1～27：1。以上結果表明，76Br-onartuzumab和89Zr-df-onartuzumab在注射48h內(nèi)都可清晰顯示圖像，但48h以后89Zr-df-onartuzumab的成像質(zhì)量明顯提高，因此89Zr-df-onartuzumab更適合c-Met表達腫瘤的早期診斷和預后判斷。阻斷成像進一步驗證探針特異性。

Li等[41]用抗-c-Met單鏈抗體片段H2與cys二聚體連接，用89Zr標記合成分子成像探針89Zr-DFO-H2-cys-dimers（Kd＝0.7nmol／l），同時對低MET表達的Hcc827和gefitinib抵抗且高表達MET的Hcc827-GR6兩種NSCLC動物模型進行PET成像的研究。在含有MET陰性（C6）腫瘤模型對比成像研究中，結果顯示，陽性組注射探針4h、20h后的攝取均明顯高于陰性組，體外分布實驗亦支持此結果（Hcc827：C6＝1.1±0.1%ID／g：0.47±0.02%ID／g、Hcc827-GR6：C6＝1.8±0.2%ID／g：0.65±0.15%ID／g）。為更好的對比兩種MET陽性腫瘤的探針攝取程度，作者在同一支裸鼠上建立兩種腫瘤模型進行成像，結果顯示，Hcc827-GR6攝取明顯高于Hcc827，與體外分布結果一致。

anticalin是一種基于人類脂質(zhì)運載體的新型小分子蛋白制劑，體積更小、更穩(wěn)定、特異性配體選擇性更好，并具有較好的組織、細胞穿透性，近年來被廣泛用于科研和臨床。Terwisscha等[42]開發(fā)出一種特異性結合c-Met的anticalin：PRS-110（Kd＝0.6noml／L，57kDa），并標記89Zr合成靶向c-Met的分子成像探針89Zr-PRS-110，進行分子成像研究。c-Met高表達H441動物腫瘤模型PET圖像及SUV值如（圖3）所示，可見腫瘤明顯的特異性攝取探針，6～24h腫瘤攝取探針持續(xù)增加（P＜0.05），48h、96h的攝取值無明顯差別，而c-Met低表達U87-MG及c-Met無表達A2780動物模型成像效果較差。表明該分子成像探針可用于c-Met靶向的分子成像，并能準確反映c-Met的表達水平。

Luo等[43]利用人重組HGF（rh-HGF）與p-SCN-Bn-NOTA連接，并經(jīng)行64Cu標記構建c-Met靶向的分子成像探針64Cu-NOTA-rh-HGF，對U87MG細胞（c-Met高表達）及MDA-MB-231細胞（c-Met低表達）進行流式細胞儀分選等實驗，證實rh-HGF對c-Met高親和力、特異性結合。隨后對U87MG和MDA-MB-231動物模型并進行64Cu-NOTA-rh-HGF的PET成像（圖4）。結果顯示，U87MG腫瘤明顯高攝取，并在探針注射9h后達到最高（6.7±1.8%ID／g）；而MDA-MB-231動物模型腫瘤攝取明顯較低（探針注射9h后SUV：1.8±0.6%ID／g）。隨后作者利用熱變性rh-HGF（dnrh-HGF）替代rh-HGF合成分子成像探針64Cu-NOTA-dnrh-HGF，并在U87動物模型中顯示明顯較低的腫瘤攝取，進一步驗證64Cu-NOTA-rh-HGF的靶向性。Luo的研究成果表明該分子成像探針可用于c-Met靶向的分子成像研究，但含有大量HGF的分子成像探針注入體內(nèi)勢必會引起強烈的生物學效應，因此限制了其對于c-Met表達腫瘤患者的臨床應用。

MR分子成像探針：Towner等[44]構建了含超順磁性鐵納米粒子的靶向c-Met的分子成像探針SPIO-anti-c-Met，用于c-Met高表達腫瘤模型的MR分子成像研究，結果發(fā)現(xiàn)腫瘤區(qū)域的T2WI信號和T2值相對于MR平掃明顯減低。為進一步優(yōu)化分子成像探針結構，Towner等[45]以SPIO-anti-c-Met為基礎，在堿性介質(zhì)中將超順磁性鐵納米粒子與右旋糖酐進行表面絡合，以進一步增加探針的組織相容性和穩(wěn)定性，同時以非特異性IgG代替抗c-Met抗體合成探針作為對照組，MR結果顯示與MR平掃對比，實驗組模型腫瘤區(qū)域明顯的T2信號降低、T2值減小，而對照組無變化，證實該分子成像探針具備良好的靶向性。隨后，Towner等[46]采用MRI經(jīng)典對比劑Gd構建靶向c-Met的分子成像探針anti-c-Met-Gd-DTPA-albumin，首次對c-Met過表達的大鼠神經(jīng)膠質(zhì)瘤模型進行MR成像。結果顯示腫瘤區(qū)域靶向增強，腫瘤T1值降低、T1高信號，并至少持續(xù)24h，48h后MR信號恢復正常。鑒于MR在臨床中的廣泛應用，開發(fā)出c-Met靶向性良好的MR分子成像探針將極大推動c-Met靶向分子成像研究的臨床轉化。

2.小分子類探針

盡管目前，c-Met靶向分子成像已經(jīng)進行了大量研究，但多是利用靶向c-Met受體胞外段的分子成像探針進行成像，這類分子成像探針多是基于特異性結合c-Met的蛋白、多肽類抗體，其代謝多經(jīng)由肝膽系統(tǒng)和泌尿系統(tǒng)，因此腹部會有大量放射性攝取，背景噪聲偏高，無法進行腹部原發(fā)腫瘤或轉移灶的準確診斷，同時這類探針體積往往較大，靶點結合效率和正常器官組織的清除效率均較慢，大大限制了其臨床應用研究的進展。而靶向RTK胞內(nèi)區(qū)域的小分子類成像探針則具備較小的體積、性能穩(wěn)定優(yōu)異等優(yōu)勢，可以高效快速的結合靶點，并在非特異性組織中清除較快，且合成小分子探針水溶性較高及經(jīng)由肝、腎組織代謝較少，故有效降低腹部的非特異性攝取，提高信噪比。但是迄今未有采用小分子類c-Met靶向分子成像探針進行成像研究的正式報道。

鑒于其他RTK類如EGFR靶向小分子成像探針的開發(fā)已取得巨大成就，并廣泛用于臨床，構建c-Met靶向的小分子成像探針在理論上是可行的。現(xiàn)有經(jīng)過認證的2-吲哚酮類小分子c-Met酪氨酸激酶抑制劑，通過特異性結合c-Met胞內(nèi)區(qū)域的ATP結合位點，進而阻斷c-Met磷酸化；如果以該類小分子抑制劑為先導物進一步優(yōu)化結構并進行放射性標記，構建c-Met靶向的小分子成像探針將大大縮短研究周期。但利用現(xiàn)有選擇性c-Met小分子抑制劑合成分子成像探針尚有一些困難需要克服：①如何實現(xiàn)對現(xiàn)有小分子化學結構的穩(wěn)定標記；②穩(wěn)定標記后的化合物不能改變原結構的靶向性及安全性；③標記后的化合物在脂溶性與水溶性方面需要達到合理的平衡，既不能影響分子成像探針的跨膜傳送，又得合理減少非特異性攝取。穩(wěn)定、安全、高效的c-Met靶向小分子成像探針對于常規(guī)篩查c-Met異?；罨哂兄匾饬x，可用于指導制定c-Met異常表達腫瘤患者的治療方案及預后評估、分析EGFR-TKI耐藥機制并調(diào)整治療方案、完善腫瘤多靶點治療策略等，極具臨床應用前景。

展望

隨著對c-Met受體在基礎領域研究的不斷深入，c-Met受體分子成像研究已經(jīng)取得一些研究成果。采用熒光標記的探針技術在細胞學水平研究中獲得可喜的數(shù)據(jù)，為進一步的活體動物研究和臨床研究奠定了基礎，同時采用單光子（125I、99mTc）或正電子核素（89Zr）標記的抗體、多肽類示蹤劑的研究也取得很好的經(jīng)驗。這主要是因為采用125I、99mTc、89Zr等容易實現(xiàn)對多肽類、抗體類探針的標記，但是目前還沒有利用18F、11C等臨床應用技術成熟的放射性核素標記的探針以及小分子類探針，同時c-Met靶向分子成像探針探針的臨床前研究及臨床轉化研究還在探索階段，這些都將是今后研究的重點和方向。尤其是親和性高、靶向性強、安全、穩(wěn)定高效的c-Met靶向的小分子成像探針將對c-Met靶向分子成像研究和臨床轉化產(chǎn)生極大推動，對于實現(xiàn)惡性腫瘤患者c-Met異常表達狀態(tài)的無創(chuàng)、在體、實時準確監(jiān)測具有重要意義，為臨床篩選c-Met抑制劑受益人群、指導腫瘤多靶點聯(lián)合治療及個體化治療方案的制定、療效監(jiān)測及預后評估提供重要依據(jù)。

[1]Herbst RS，Heymach JV，Lippman SM，et al.Lung cancer[J].N Engl J Med，2008，359（13）：1367-1380.

[2]Cancer Genome Atlas Research，N.Comprehensive genomic characterization of squamous cell lung cancers[J].Nature，2012，489（7417）：519-525.

[3]Kan Z，et al.Diverse somatic mutation patterns and pathway alterations in human cancers[J].Nature，2010，466（7308）：869-873.

[4]Greaves M，Maley CC.Clonal evolution in cancer[J].Nature，2012，481（7381）：306-313.

[5]Keller KE，Tan IS，Lee YS.SAICAR stimulates pyruvate kinase isoform M2and promotes cancer cell survival in glucose-limited conditions[J].Science，2012，338（6110）：1069-1072.

[6]Straussman R，Morikawa T，Shee K，et al.Tumour micro-environment elicits innate resistance to RAF inhibitors through HGF secretion[J].Nature，2012，487（7408）：500-504.

[7]Smith CC，Wang Q，Chin CS，et al.Validation of ITD mutations in FLT3as a therapeutic target in human acute myeloid leukaemia[J].Nature，2012，485（7397）：260-263.

[8]Messersmith WA，Ahnen DJ.Targeting EGFR in colorectal cancer[J].N Engl J Med，2008，359（17）：1834-1836.

[9]Gumustekin M，Kargi A，Bulut G，et al.HGF／c-Met overexpressions，but not met mutation，correlates with progression of nonsmall cell lung cancer[J].Pathol Oncol Res，2012，18（2）：209-218.

[10]Jagoda EM，Lang L，Bhadrasetty V，et al.Immuno-PET of the hepatocyte growth factor receptor Met using the 1-armed antibody onartuzumab[J].J Nucl Med，2012，53（10）：1592-1600.

[11]Cooper CS，Park M，Blair DG，et al.Molecular cloning of a new transforming gene from a chemically transformed human cell line[J].Nature，1984，311（5981）：29-33.

[12]Wang J，Gui Z，Deng L，et al.c-Met upregulates aquaporin 3expression in human gastric carcinoma cells via the ERK signalling pathway[J].Cancer Lett，2012，319（1）：109-117.

[13]Maulik G，Shrikhande A，Kijima T，et al.Role of the hepatocyte growth factor receptor，c-Met，in oncogenesis and potential for therapeutic inhibition[J].Cytokine Growth Factor Rev，2002，13（1）：41-59.

[14]Sattler M，Ma PC，Salgia R.Therapeutic targeting of the receptor tyrosine kinase Met[J].Cancer Treat Res，2004，119：121-138.

[15]van der Voort R，Taher TE，Derksen PW，et al.The hepatocyte growth factor／Met pathway in development，tumorigenesis，and B-cell differentiation[J].Adv Cancer Res，2000，79（1）：39-90.

[16]Follenzi A，Bakovic S，Gual P，et al.Cross-talk between the proto-oncogenes Met and Ron[J].Oncogene，2000，19（27）：3041-3049.

[17]Jo M，Stolz DB，Esplen JE，et al.Cross-talk between epidermal growth factor receptor and c-Met signal pathways in transformed cells[J].J Biol Chem，2000，275（12）：8806-8811.

[18]Kuniyasu H，Yasui W，Kitadai Y，et al.Frequent amplification of the c-met gene in scirrhous type stomach cancer[J].Biochem Biophys Res Commun，1992，189（1）：227-232.

[19]Trusolino L，Bertotti A，Comoglio PM.A signaling adapter function for alpha6beta4integrin in the control of HGF-dependent invasive growth[J].Cell，2001，107（5）：643-654.

[20]Kishi Y，Kuba K，Nakamura T，et al.Systemic NK4gene therapy inhibits tumor growth and metastasis of melanoma and lung carcinoma in syngeneic mouse tumor models[J].Cancer Sci，2009，100（7）：1351-1358.

[21]E.Van Cutsem，Tabernero CE.A randomized，phase I／II trial of AMG 102or AMG 479in combination with panitumumab（pmab）compared with pmab alone in patients（pts）with wildtype（WT）KRAS metastatic colorectal cancer（mCRC）：safety and efficacy results[J].J Clinical Oncology，2011，29：366-367.

[22]Rosen PJ，Sweeney CJ，Park DJ，et al.A phase Ib study of AMG 102in combination with bevacizumab or motesanib in patients with advanced solid tumors[J].Clin Cancer Res，2010，16（9）：2677-2687.

[23]Ma PC，Tretiakova MS，MacKinnon AC，et al.Expression and mutational analysis of MET in human solid cancers[J].Genes Chromosomes Cancer，2008，47（12）：1025-1037.

[24]Ma PC，Kijima T，Maulik G，et al.c-MET mutational analysis in small cell lung cancer：novel juxtamembrane domain mutations regulating cytoskeletal functions[J].Cancer Res，2003，63（19）：6272-6281.

[25]Schiller JH.Noninvasive monitoring of tumors[J].N Engl J Med，2008，359（4）：418-420.

[26]Goldstraw P，Ball D，Jett JR，et al.Non-small-cell lung cancer[J].Lancet，2011，378（9804）：1727-1740.

[27]Molina R，F(xiàn)ilella X，Auge JM，et al.Tumor markers（CEA，CA 125，CYFRA 21-1，SCC and NSE）in patients with non-small cell lung cancer as an aid in histological diagnosis and prognosis.Comparison with the main clinical and pathological prognostic factors[J].Tumour Biol，2003，24（4）：209-218.

[28]Moshitch-Moshkovitz S，Tsarfaty G，Kaufman DW，et al.In vivo direct molecular imaging of early tumorigenesis and malignant progression induced by transgenic expression of GFP-Met[J].Neoplasia，2006，8（5）：353-363.

[29]Zhang L，Virani S，Zhang Y，et al.Molecular imaging of c-Met tyrosine kinase activity[J].Anal Biochem，2011，412（1）：1-8.

[30]Kim EM，Park EH，Cheong SJ，et al.In vivo imaging of mesenchymal-epithelial transition factor（c-Met）expression using an optical imaging system[J].Bioconjug Chem，2009，20（7）：1299-1306.

[31]Liu S，Zheng Y，Volpi D，et al.Toward operative in vivo fluorescence imaging of the c-Met proto-oncogene for personalization of therapy in ovarian cancer[J].Cancer，2015，121（2）：202-213.

[32]Lu RM，Chang YL，Chen MS，et al.Single chain anti-c-Met antibody conjugated nanoparticles for in vivo tumor-targeted imaging and drug delivery[J].Biomaterials，2011，32（12）：3265-3274.

[33]Hay RV，Cao B，Skinner RS，et al.Radioimmunoscintigraphy of tumors autocrine for human met and hepatocyte growth factor／scatter factor[J].Mol Imaging，2002，1（1）：56-62.

[34]Jiao Y，Zhao P，Zhu J，et al.Construction of human naive Fab library and characterization of anti-met Fab fragment generated from the library[J].Mol Biotechnol，2005，31（1）：41-54.

[35]Zhao P，Grabinski T，Gao C，et al.Identification of a met-binding peptide from a phage display library[J].Clin Cancer Res，2007，13（20）：6049-6055.

[36]Knudsen BS，Zhao P，Resau J，et al.A novel multipurpose monoclonal antibody for evaluating human c-Met expression in preclinical and clinical settings[J].Appl Immunohistochem Mol Morphol，2009，17（1）：57-67.

[37]Kim EM，Park EH，Cheong SJ，et al.Characterization，biodistri-bution and small-animal SPECT of125I-labeled c-Met binding peptide in mice bearing c-Met receptor tyrosine kinase-positive tumor xenografts[J].Nucl Med Biol，2009，36（4）：371-378.

[38]Kim EM，Joung MH，Lee CM，et al.Synthesis of99mTc-labeled 1，2，3-triazole-4-yl c-met binding peptide as a potential c-met receptor kinase positive tumor imaging agent[J].Bioorg Med Chem Lett，2010，20（14）：4240-4243.

[39]Petrelli A，Circosta P，Granziero L，et al.Ab-induced ectodomain shedding mediates hepatocyte growth factor receptor down-regulation and hampers biological activity[J].Proc Natl Acad Sci USA，2006，103（13）：5090-5095.

[40]Perk LR，Stigter-van Walsum M，Visser GW，et al.Quantitative PET imaging of Met-expressing human cancer xenografts with89Zr-labelled monoclonal antibody DN30[J].Eur J Nucl Med Mol Imaging，2008，35（10）：1857-1867.

[41]Li K，Tavare R，Zettlitz KA，et al.Anti-MET immunoPET for non-small cell lung cancer using novel fully human antibody fragments[J].Mol Cancer Ther，2014，13（11）：2607-2617.

[42]Terwisscha van Scheltinga AG，Lub-de Hooge MN，Hinner MJ，et al.In vivo visualization of MET tumor expression and anticalin biodistribution with the MET-specific anticalin89Zr-PRS-110 PET tracer[J].J Nucl Med，2014，55（4）：665-671.

[43]Luo H，Hong H，Slater MR，et al.PET of c-Met in Cancer with64Cu-Labeled hepatocyte growth factor[J].J Nucl Med，2015，56（5）：758-763.

[44]Towner RA，Smith N，Tesiram YA，et al.In vivo detection of c-MET expression in a rat hepatocarcinogenesis model using molecularly targeted magnetic resonance imaging[J].Mol Imaging，2007，6（1）：18-29.

[45]Towner RA，Smith N，Asano Y，et al.Molecular magnetic resonance imaging approaches used to aid in the understanding of the tissue regeneration marker Met in vivo：implications for tissue engineering[J].Tissue Eng Part A，2010，16（2）：365-371.

[46]Towner RA，Smith N，Doblas S，et al.In vivo detection of c-Met expression in a rat C6glioma model[J].J Cell Mol Med，2008，12（1）：174-186.