石婭萍，蔣淼，閔志強

青黛單次給藥胃腸毒性研究

石婭萍，蔣淼，閔志強

目的：考察青黛是否具有胃腸毒性。方法：觀察單次給予青黛對正常小鼠腸推進(jìn)，胃排空及排便的影響。結(jié)果：1g．kg-1青黛（相當(dāng)于臨床劑量20倍），可促進(jìn)正常小鼠的腸推進(jìn)及排便(P ＜0.05， P ＜0.01)，對小鼠胃排空有促進(jìn)趨勢，但無統(tǒng)計學(xué)意義(p＞0.05)。結(jié)論：青黛可能存在一定的胃腸毒性，但具體機理未知，還需進(jìn)一步試驗驗證。

青黛；胃腸毒性；單次給藥

青黛是一味具有良好藥效作用的常用中藥，但隨著青黛在臨床上的廣泛應(yīng)用，一些復(fù)方青黛制劑不良反應(yīng)報告有所增加[1～5]。這些不良反應(yīng)主要表現(xiàn)為胃腸道反應(yīng)，但未發(fā)現(xiàn)單獨報道青黛胃腸不良反應(yīng)的有關(guān)文獻(xiàn)，因此以上不良反應(yīng)是否為青黛造成存在疑問。本研究擬通過對小鼠胃腸道功能影響試驗，模擬青黛臨床短期給藥，觀察青黛可能引起的臨床不良反應(yīng)，尤其是對消化道的影響，為說明青黛是否具有胃腸毒性提供理論依據(jù)，指導(dǎo)臨床安全用藥。

1 材料和方法

1.1 試藥

青黛飲片，四川江油恒源藥業(yè)提供，批號120301；生大黃飲片，購自成都百信藥業(yè)。苦味酸，規(guī)格：25g/瓶，批號：20130501，臺山市眾誠化工有限公司。中性紅，規(guī)格：25g/瓶，批號：20100914，天津市瑞金特化學(xué)品有限公司。醫(yī)用活性炭，規(guī)格：500g/包，批號：20130622，重慶北碚精細(xì)化工廠。阿拉伯膠，規(guī)格：250g/瓶，批號：20130122，成都科龍化工試劑廠。葡聚糖藍(lán)-2000，規(guī)格： 5g/瓶，CAS：87915-38-6，Amresco。

1.2 動物

KM小鼠，Ⅰ級，150只，體重18～22 g，雌雄各半。來源：成都達(dá)碩生物科技有限公司。生產(chǎn)許可證號：SCXK（川）2013-24。合格證號：NO.0016230。

1.3 儀器

余姚金諾TU10001B型電子天平（d=0.1g），余姚市金諾天平儀器有限公司；德國Sartorius BS124S型電子天平，德國Sartorius股份有限公司。紫外分光光度儀。

1.4 實驗藥液的制備

青黛藥液：試驗時用純化水配制成所需濃度的混懸液，每次給藥前搖勻后使用。

大黃藥液：取生大黃加3倍量的冷水，浸泡20min，加熱煎煮15min，趁熱濾過，濾液減壓濃縮至含生藥1g．mL-1[6]。

2 方法與結(jié)果

2.1 分組及給藥

每個實驗KM小鼠50只，雌雄各半，體重18～22g，按體重隨機分為正常對照組、大黃組、青黛高、中、低劑量組，共5組，每組10只。青黛組小鼠單次灌胃給予青黛飲片混懸液(10mL．kg-1)，給藥前禁食不禁水24h，以1g．kg-1劑量作為高劑量，相當(dāng)于臨床倍數(shù)20倍，中、低劑量分別為0.5、0.25g．kg-1，分別相當(dāng)于10、5倍臨床人用劑量。大黃組小鼠同法給予大黃藥液，劑量10g．kg-1[6]，相當(dāng)于臨床倍數(shù)=40倍。正常對照組給予等體積純化水(10ml．kg-1)。

2.2 青黛對正常小鼠腸推進(jìn)功能影響

灌胃給予受試物，給藥前禁食不禁水24h以上,給藥40min后各組均按20ml/ kg的劑量給予炭末混懸液，20 min后頸椎脫臼處死動物，立即剖開腹腔，測量腸管長度及炭末推進(jìn)長度，計算炭末推進(jìn)率：炭末推進(jìn)率(%)= [炭末推進(jìn)長度(cm)/小腸總長度(cm)]×100%。結(jié)果見表1。

表1 青黛飲片對正常小鼠腸推進(jìn)功能的影響試驗結(jié)果(±sD)

表1 青黛飲片對正常小鼠腸推進(jìn)功能的影響試驗結(jié)果(±sD)

注：各給藥組與對照組比較 * p＜0.05 ** p＜0.01

組 別 炭末推進(jìn)率(%)正常對照組 67.19±11.12大黃組 82.30±8.85**青黛高劑量組 77.75±8.19*青黛中劑量組 74.10±6.07青黛低劑量組 69.26±9.93

表1顯示，10g．kg-1生大黃飲片能促進(jìn)小鼠腸炭末推進(jìn)率(p＜0.05)，表明試驗方法可信。 1g．kg-1青黛飲片能促進(jìn)小鼠腸炭末推進(jìn)率(p＜0.05)，有促進(jìn)腸推進(jìn)作用。0.5g．kg-1青黛飲片也能促進(jìn)小鼠腸炭末推進(jìn)率，但無統(tǒng)計學(xué)意義(p＞0.05)。

2.3 青黛對正常小鼠排便功能影響

灌胃給予受試物，給藥前禁食不禁水24h以上，給藥40min后各組均按0.5ml/只給予炭末混懸液。各鼠分置于鋪有濾紙的燒杯內(nèi)進(jìn)行觀察，記錄小鼠排黑便的時間、糞便性狀和數(shù)目，以及糞便沾染肛門情況。結(jié)果見表2。

表2 青黛飲片對正常小鼠排便功能的影響試驗結(jié)果(±sD)

表2 青黛飲片對正常小鼠排便功能的影響試驗結(jié)果(±sD)

注：各給藥組與對照組比較 * p＜0．05 ** p＜0．01

組 別 首次排黑便時間(min) 6h排便數(shù)(次)正常對照組 236.3±31.2 3.7±1.4大黃組 185.0±35.8** 8.7±3.4**青黛高劑量組 209.8±37.8 6.1±2.2**青黛中劑量組 211.6±31.3 3.8±1.6青黛低劑量組 239.6±41.7 4.1±2.4

生大黃飲片灌胃給藥3h后小鼠在首次排便，6h觀察期內(nèi)排便數(shù)顯著增加(p＜0.01)，同時觀察發(fā)現(xiàn)小鼠均出現(xiàn)稀便，符合生大黃瀉下功效，表明試驗方法可信。1g．kg-1青黛飲片能增加小鼠排便次數(shù)(p＜0.01)，但對排便時間無顯著影響(p＞0.05)，同時觀察發(fā)現(xiàn)個別小鼠出現(xiàn)稀便，表明該劑量有一定促進(jìn)排便作用。0.5g．kg-1及0.25g．kg-1劑量組對小鼠排便次數(shù)及排便時間均未造成影響(p＞0.05)。

2.4 青黛對正常小鼠胃排空功能影響

灌胃給予受試物，給藥前禁食不禁水24 h以上，給藥1 h后，每只動物灌入2%葡聚糖藍(lán)-2000溶液0.4mL，20 min后頸椎脫臼處死動物，立即剖開腹腔仰臥固定，開腹，自幽門括約肌處取胃，沿大彎側(cè)剪開，將胃內(nèi)色素殘留物充分洗于5 mL超純水中，3500 rpm離心15 min，取上清液，在分光光度儀上620 nm測吸光度(A)為胃內(nèi)色素殘留量。胃內(nèi)色素殘留率=胃內(nèi)殘留色素吸光度/標(biāo)準(zhǔn)管胃內(nèi)色素吸光度×100%。結(jié)果見表3。

表3 青黛飲片對正常小鼠胃排空功能的影響試驗結(jié)果(±sD)

表3 青黛飲片對正常小鼠胃排空功能的影響試驗結(jié)果(±sD)

注：各給藥組與對照組比較 * p＜0.05

組 別 胃殘留率(%)正常對照組 51.10±13.17大黃組 34.96±19.36*青黛高劑量組 38.91±22.16青黛中劑量組 46.52±26.74青黛低劑量組 42.80±21.32

生大黃飲片給藥后能促進(jìn)小鼠胃排空(p＜0.05)。從數(shù)值上看，各劑量青黛飲片能降低小鼠胃殘留率，但無統(tǒng)計學(xué)意義(p＞0.05)。

3 討論

針對青黛在臨床上暴露出的一系列胃腸道毒性反應(yīng)特征，本次試驗設(shè)計了與胃腸道功能密切相關(guān)的腸推進(jìn)，胃排空及排便這三個指標(biāo)進(jìn)行考察，觀察青黛是否具有胃腸毒性。試驗結(jié)果證明青黛對胃腸道功能有一定影響，特別是1g/kg青黛（相當(dāng)于臨床劑量20倍），可促進(jìn)小鼠的腸推進(jìn)及排便功能，其余數(shù)據(jù)也表明在1g/kg劑量以下，也可能存在胃腸道毒性反應(yīng)。在下一步還將進(jìn)行多次給藥試驗，結(jié)合兩次結(jié)果，以期初步確定青黛是否具有胃腸道毒性。

本次試驗由于經(jīng)費有限，未能對青黛胃腸道毒性的機理進(jìn)行深入研究。分析其胃腸道毒性的原因可能與青黛藥性有關(guān)，青黛為苦寒藥物，中醫(yī)認(rèn)為苦寒傷胃，因此有些患者出現(xiàn)胃腸反應(yīng)。按現(xiàn)代科學(xué)解釋，可能為青黛中某種成分對胃腸道有一定刺激，但毒性成分類別及其具體機理還需進(jìn)一步試驗確證。青黛在傳統(tǒng)中醫(yī)中一直作為清熱涼血使用，對臨床使用而言，其胃腸毒性具有兩面性，好的一面對一些熱毒較甚，特別是兼有熱結(jié)便秘的患者來說，其促進(jìn)排便的副作用有助于體內(nèi)熱邪排除體外，起到“釜底抽薪”的副作用。而壞的一面是，若病人本身脾胃虛弱，或有胃腸道潰瘍，在使用青黛時可能會誘發(fā)胃腸不良反應(yīng)。

綜上，本次實驗發(fā)現(xiàn)單次給予1g/kg青黛，可促進(jìn)小鼠的腸推進(jìn)及排便功能，證實青黛可能存在一定的胃腸毒性，但具體機理未知，還需進(jìn)一步試驗驗證。

[1] 李國良,梁洪彥.復(fù)方青黛丸致便血2例[J].中國農(nóng)村醫(yī)學(xué), 1996,21(8):49.

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[3] 范慧英,杜玉蘭,欒紅.復(fù)方青黛丸致胃出血3例[J].中華皮膚科雜志, 1995,28(5):328.

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[6] 譚松生,周學(xué)軍.生大黃煎液與生大黃粉對小鼠瀉下作用的比較研究[J].湖南師范大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版), 2009, 6(1) :60.

（責(zé)任編輯：何瑤）

Research on gastrointestinal toxicity of Qingdai after single administration

SHI Ya-ping, JIANG Miao, MIN Zhi-qiang //( School of Pharmacy, Chengdu University of Traditional Chinese Medicine; National Key Laboratory Breeding Base of Systematic Research, Development and Utilization of Chinese Medicine Resources, Chengdu 611137, Sichuan)

Objective:To investigate the gastrointestinal toxicity of Qingdai.Method:To observe the effect of Qingdai on intestinal propulsion, gastric emptying and defecation in normal mice after single administration .Result:1g/kg indigo (equivalent to 20 times of clinical dose) can promote intestinal propulsion and defecation of normal mice (P ＜0.05 or P ＜0.01). A tendency of promotion of gastric emptying can be observed with no statistical signifcance (p＞0.05).Conclusion:Qingdai may have certain gastrointestinal toxicity, but the mechanism is unknown which need further experimental verifcation.

Qingdai; gastrointestinal toxicity; single administration

R285.5

A

1674-926X(2015)04-004-02

成都中醫(yī)藥大學(xué)?；痦椖浚呵圜煳改c道毒性研究（編號：ZRMS201333）

成都中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院 四川省中藥資源系統(tǒng)研究與開發(fā)利用重點實驗室—省部共建國家重點實驗室培育基地，四川 成都 611137

石婭萍（1978-），女，講師，博士，主要從事中藥安全性評價研究Tel:18982260169 Email:stone78520@163.com

閔志強（1979-），男，講師，博士，主要從事中藥藥性理論與臨床應(yīng)用研究Tel:13880641950 Email:minzq@qq.com

2015-03-30