黃崇元，白春蘭，朱暢榮，李德榮

(西雙版納州動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，云南 景洪 666100)

按照國家規(guī)定生豬必須進(jìn)行豬口蹄疫、豬瘟、高致病性豬藍(lán)耳病的強(qiáng)制免疫。傳統(tǒng)免疫采取先進(jìn)行豬口蹄疫、豬瘟兩種疫苗的免疫，15～30d后再進(jìn)行高致病性豬藍(lán)耳病的免疫。這種免疫方法工作量大，免疫間隔時(shí)間短，養(yǎng)殖戶難以接受，免疫次數(shù)多，免疫反應(yīng)及反應(yīng)死亡增加，高致病性豬藍(lán)耳病推遲免疫，會出現(xiàn)免疫空白，發(fā)生高致病性豬藍(lán)耳病的風(fēng)險(xiǎn)增加。“321”免疫(三種疫苗、兩點(diǎn)注射、一次完成)是將豬瘟活疫苗用稀釋液稀釋后再與等量的高致病性豬藍(lán)耳病活疫苗混合(或高致病性豬藍(lán)耳病活疫苗用稀釋液稀釋后再與等量的豬瘟活疫苗混合)，注射到豬耳后頸部一側(cè)，另一側(cè)注射口蹄疫疫苗的一種免疫方法。這種免疫新技術(shù)能否推廣，關(guān)鍵看3種病的免疫抗體水平能否達(dá)到國家規(guī)定的群體保護(hù)標(biāo)準(zhǔn)，免疫保護(hù)力能否全程保護(hù)。本研究采用不同免疫方法后的豬，進(jìn)行連續(xù)3次抗體監(jiān)測，通過比較分析，得出“321”免疫新技術(shù)在西雙版納州高溫、高濕條件下是可行的，現(xiàn)將情況報(bào)道如下。

1 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)

1.1 實(shí)驗(yàn)地點(diǎn)

景洪市勐養(yǎng)鎮(zhèn)曼景坎村曼滿小組、勐海縣勐海鎮(zhèn)茶場副業(yè)隊(duì)、西雙版納州種豬場。

1.2 監(jiān)測時(shí)限

2013年9—12月。

1.3 實(shí)驗(yàn)材料

(1)豬用活疫苗專用稀釋液，云南生物制藥有限公司生產(chǎn)，生產(chǎn)批號:20130206;生產(chǎn)日期:20130206;有效期至:20150205。

(2)豬口蹄疫O型合成肽疫苗，申聯(lián)生物醫(yī)藥(上海)有限公司生產(chǎn)，批準(zhǔn)文號:獸藥生字(2009)090297056;批號:20130106;生產(chǎn)日期:20130115;有效期至:20140114。

(3)豬瘟活疫苗(脾淋源)，云南生物制藥有限公司生產(chǎn)，批準(zhǔn)文號:獸藥生字(2011)250061001;生產(chǎn)批號:2013011;生產(chǎn)日期:130129;有效期至:140128。

(4)高致病性豬繁殖與呼吸綜合征活疫苗(HuN4-F12株)，上海海利生物技術(shù)股份有限公司生產(chǎn)，批準(zhǔn)文號:獸藥生字(2011)09001C74;生產(chǎn)批號:20130110;有效期至:20140721。

(5)口蹄疫抗體檢測試劑盒，韓國金諾生產(chǎn)，批號10745456;有效期至:20140527。

(6)豬瘟病毒抗體競爭EL ISA檢測試劑盒，北京金諾百特科技有限公司生產(chǎn)，生產(chǎn)批號:107HS469。

(7)高致病性豬藍(lán)耳病檢測試劑盒，北京天元泰生物科技有限公司生產(chǎn)，批號:2-VETPRA-035;有效期至:201407。

(8)試驗(yàn)需要準(zhǔn)備注射器、針頭、冷藏包、真空采血管、采血針、酒精棉球、干棉球、保定繩、試驗(yàn)記錄本等。

(9)試驗(yàn)動(dòng)物為45～60日齡末免疫過口蹄疫、豬瘟、高致病性豬藍(lán)耳病的健康仔豬。

1.4 實(shí)驗(yàn)方法

(1)選擇景洪市勐養(yǎng)鎮(zhèn)曼景坎村曼滿小組8戶農(nóng)戶飼養(yǎng)的符合要求并經(jīng)“321”免疫的仔豬25頭;選擇勐海縣勐海鎮(zhèn)茶場副業(yè)隊(duì)4戶村民飼養(yǎng)的符合要求并經(jīng)“321”免疫的仔豬15頭;選擇州種豬場飼養(yǎng)的未免疫過3種疫苗且符合要求的仔豬20頭，隨機(jī)進(jìn)行分組，傳統(tǒng)免疫10頭，“321”免疫10頭。

(2)“321”免疫用稀釋液稀釋豬瘟疫苗(或高致病性豬藍(lán)耳病疫苗)，再稀釋等量高致病性豬藍(lán)耳病疫苗(或豬瘟疫苗)。一側(cè)注射混合疫苗，另一側(cè)注射口蹄疫疫苗，傳統(tǒng)免疫先進(jìn)行豬瘟和口蹄疫的免疫，20d后再進(jìn)行高致病性豬藍(lán)耳病的免疫。

(3)先將疫苗恢復(fù)至常溫后稀釋，大豬使用12×25號針頭、小豬使用12×20號針頭，保證深部肌肉注射;注射部位在仔豬耳后3～5cm的頸部兩側(cè)肌肉進(jìn)行。

(4)免疫后20d、40d、60d采血，分離血清進(jìn)行免疫抗體水平測定。

(5)大豬采用耳靜脈采血法，小豬采用前腔靜脈采血法。無菌采血5～10mL，可自然析出血清或離心分離血清，血清冷凍保存。

(6)按照檢測試劑盒的說明進(jìn)行監(jiān)測，只做定性結(jié)果分析。

2 監(jiān)測結(jié)果

2.1 豬口蹄疫免疫抗體監(jiān)測結(jié)果

采用“321”免疫新技術(shù)共監(jiān)測50頭，連續(xù)3次的監(jiān)測結(jié)果(免疫后20d、40d、60d)，免疫合格數(shù)和免疫抗體群體合格率為44頭、88%;47頭、94%;47頭、94%。采用傳統(tǒng)免疫法共監(jiān)測10頭，免疫合格數(shù)和群體免疫合格率為8頭、80%;9頭、90%;9頭、90%。

2.2 豬瘟免疫抗體監(jiān)測結(jié)果

采用“321”免疫新技術(shù)共監(jiān)測50頭，連續(xù)3次的監(jiān)測結(jié)果(免疫后20d、40d、60d)，免疫合格數(shù)和免疫抗體群體合格率為42頭、84%;43頭、86%;45頭、90%。采用傳統(tǒng)免疫法共監(jiān)測10頭，免疫合格數(shù)和群體免疫合格率為8頭、80%;9頭、90%;9頭、90%。

2.3 高致病性豬藍(lán)耳病免疫抗體監(jiān)測結(jié)果

采用“321”免疫新技術(shù)共監(jiān)測50頭，連續(xù)3次的監(jiān)測結(jié)果(免疫后20d、40d、60d)，免疫合格數(shù)和免疫抗體群體合格率為42頭、84%;42頭、84%;43頭、86%。采用傳統(tǒng)免疫法共監(jiān)測10頭，免疫合格數(shù)和群體免疫合格率為0頭、0;8頭、80%;8頭、80%。

(1)對景洪市、勐?？h共12戶農(nóng)戶飼養(yǎng)的40頭豬，采取先由基層獸醫(yī)站人員按照“321”免疫新技術(shù)規(guī)范進(jìn)行免疫，項(xiàng)目人員到達(dá)現(xiàn)場后，根據(jù)豬的大小隨機(jī)選擇監(jiān)測對象，使得實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)更加真實(shí)、客觀。在州種豬場對在同等飼養(yǎng)條件下20頭仔豬進(jìn)行分組，“321”免疫新技術(shù)進(jìn)行免疫和傳統(tǒng)免疫方法各10頭。實(shí)驗(yàn)豬群在免疫后20d、40d、60d進(jìn)行連續(xù)3次的免疫抗體水平監(jiān)測。結(jié)果表明:采用“321”免疫新技術(shù)豬口蹄疫、豬瘟、高致病性豬藍(lán)耳病的免疫抗體水平，在免疫后20～60d內(nèi)達(dá)到國家規(guī)定的群體免疫合格標(biāo)準(zhǔn)，說明方法是可行的。

(2)進(jìn)行“321”免疫新技術(shù)與傳統(tǒng)免疫方法的比較，在同等條件下兩種方法無明顯的差異，但傳統(tǒng)免疫法有1個(gè)月左右的高致病性豬藍(lán)耳病免疫空白，有較大的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)。

(3)本次實(shí)驗(yàn)主要考慮“321”免疫新技術(shù)與傳統(tǒng)免疫技術(shù)在群體免疫保護(hù)率與免疫保護(hù)力持續(xù)時(shí)間上，采取對同一群體的豬群進(jìn)行連續(xù)3次的免疫抗體監(jiān)測方法，勞動(dòng)強(qiáng)度大，資金投入多，因單位財(cái)力有限，監(jiān)測的群體數(shù)量可能不夠。為此，引入開展實(shí)施“321”免疫前2011年，與開展“321”免疫新技術(shù)后的2012年、2013年數(shù)據(jù)進(jìn)行比較分析，結(jié)果為2011年豬口蹄疫免疫抗體監(jiān)測 1426頭，合格 848頭，合格率59.5%;豬瘟免疫抗體監(jiān)測1426頭，合格1030頭，合格率72.2%;高致病性豬藍(lán)耳病免疫抗體監(jiān)測184頭，合格105頭，合格率57.1%。2012年口蹄疫免疫抗體監(jiān)測1614頭，合格1177頭，合格率72.9%;豬瘟免疫抗體監(jiān)測1664頭，合格1194頭，合格率71.8%;高致病性豬藍(lán)耳病免疫抗體監(jiān)測438頭，合格351頭，合格率80.1%。2013年豬口蹄疫免疫抗體監(jiān)測2344頭，合格1828頭，合格率78%;豬瘟免疫抗體監(jiān)測2400頭，合格1776頭，合格率74%;高致病性豬藍(lán)耳病免疫抗體監(jiān)測2400頭，合格1940頭，合格率80.8%。雖然2011年用高致病性豬藍(lán)耳病滅活疫苗，無法進(jìn)行對比，但監(jiān)測數(shù)據(jù)依然表明，“321”免疫新技術(shù)是可行的。

(4)免疫次數(shù)減少，防疫工作量和勞動(dòng)強(qiáng)度降低是顯而易見的，同時(shí)向基層防疫人員和廣大養(yǎng)殖戶進(jìn)行了解，反映“321”免疫新技術(shù)是一項(xiàng)可行的免疫新技術(shù)。

3 結(jié)論與建議

(1)從免疫抗體監(jiān)測數(shù)據(jù)來看，采用“321”免疫新技術(shù)與傳統(tǒng)免疫方法，3種強(qiáng)制免疫病種的免疫抗體水平均達(dá)到國家規(guī)定的群體免疫合格標(biāo)準(zhǔn)，同時(shí)連續(xù)3次的免疫抗體監(jiān)測說明，采用“321”新技術(shù)在免疫后20～60d具有堅(jiān)強(qiáng)保護(hù)力，能保證一次免疫就可出欄。因此，“321”免疫新技術(shù)在西雙版納州高溫、高濕條件下是可行的，可大力推廣。

(2)調(diào)查了解時(shí)發(fā)現(xiàn)基層防疫人員在進(jìn)行豬瘟、高致病性豬藍(lán)耳病疫苗的等量稀釋時(shí)，會存在一定的差異，可能會對免疫效果造成一定的影響。建議高等院校、科研機(jī)構(gòu)、疫苗生產(chǎn)企業(yè)增加投入，進(jìn)行更加深入的研究，生產(chǎn)豬瘟、高致病性豬藍(lán)耳病二聯(lián)疫苗，使整個(gè)操作更加科學(xué)規(guī)范。