李 易，操 軒，胡亞琳，陳 健

(湖北省黃石市中心醫(yī)院，湖北 黃石 435000)

尿NGAL、尿L-FABP、血清胱蛋白酶抑制劑C檢測診斷早期糖尿病腎病的價值

李 易，操 軒，胡亞琳，陳 健

(湖北省黃石市中心醫(yī)院，湖北 黃石 435000)

目的探討尿NGAL、尿L-FABP、血清胱蛋白酶抑制劑C檢測診斷早期糖尿病腎病的價值。方法選取86例糖尿病患者作為研究對象，依據(jù)尿微量白蛋白/肌酐比值(UACR)將所有患者分為糖尿病對照組30例、糖尿病微量白蛋白尿組30例與糖尿病大量白蛋白尿組26例，同時選取同期健康體檢者30例作為正常對照組。收集各組患者5 mL清晨清潔中段尿，分別檢測尿液中NGAL、L-FABP、血清胱蛋白酶抑制劑C的濃度。結(jié)果尿L-FABP、血清胱蛋白酶抑制劑C在糖尿病微量白蛋白尿組與大量白蛋白尿組中的濃度水平明顯高于正常對照組，且隨著UACR的增加逐漸升高，各組間差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均<0.05)；尿NGAL在糖尿病微量白蛋白尿組與大量白蛋白尿組濃度水平明顯高于糖尿病對照組與正常對照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均<0.05)；三項(xiàng)指標(biāo)聯(lián)合檢測對糖尿病腎病的診斷靈敏度及特異度最高。結(jié)論尿NGAL、尿L-FABP、血清胱蛋白酶抑制劑C檢測對早期糖尿病腎病具有重要的預(yù)測價值，且三項(xiàng)指標(biāo)聯(lián)合檢測能夠提高對糖尿病腎病的診斷靈敏度與特異度。

尿NGAL；尿L-FABP；血清胱蛋白酶抑制劑C；糖尿病腎病

隨著目前糖尿病發(fā)病率的逐步上升，預(yù)測糖尿病患者2025年將高達(dá)3億人口[1]。糖尿病腎病是糖尿病嚴(yán)重并發(fā)癥之一，是一種臨床常見病，該疾病起病較為隱匿，是目前引發(fā)終末期腎病的主要原因。早期臨床上認(rèn)為，糖尿病腎病主要為腎小球損傷，但是隨著越來越多的深入研究，表明在早期糖尿病腎病中，腎小管損傷要早于腎小球損傷[2]。目前，對于糖尿病腎病腎功能損害的診斷，臨床上依舊主要使用檢測微量白蛋白的方法，但是該方法會受到多種因素的影響，因此，需要找尋某些敏感、特異、簡便的標(biāo)志物來診斷早期糖尿病腎病。尿中性粒細(xì)胞明膠酶相關(guān)載脂蛋白(NGAL)、尿肝

性脂肪酸結(jié)合蛋白(L-FABP)都于近端小管上皮表達(dá)，曾有研究表明，這兩種物質(zhì)在多種腎損傷中明顯升高，且與腎損傷程度呈正相關(guān)[3]。血清胱蛋白酶抑制劑C(Cys C)穩(wěn)定性較高，不受年齡、性別等因素的影響[4]，是近年來迅速發(fā)展起來的用于腎功能損害診斷的重要指標(biāo)之一[5]。本研究通過檢測尿NGAL、尿L-FABP、Cys C在糖尿病各組患者中的濃度水平，探討其在早期糖尿病腎病中的診斷價值。

1 臨床資料

1.1一般資料 選取2012年1月—2014年1月于我院就診的86例糖尿病患者作為研究對象，年齡≥40歲，且符合糖尿病診斷標(biāo)準(zhǔn)。排除不符合診斷標(biāo)準(zhǔn)者，合并嚴(yán)重心功能不全、惡性腫瘤、非各種糖尿病腎病者，近期合并感染者，妊娠及哺乳期婦女。參照2012年IDF糖尿病腎病診療指南[6]測定患者尿標(biāo)本尿微量白蛋白/肌酐比值(UACR)，根據(jù)測定結(jié)果不同將患者分為3組：UACR女性<3.5 μg/mg、男性<2.5 μg/mg為糖尿病對照組，共30例，男14例，女16例；年齡(47.1±6.7)歲。UACR男女性2.5～30 μg/mg為糖尿病微量白蛋白尿組，共30例，男13例，女17例；年齡(48.2±7.4)歲。UACR男女性均>30 μg/mg為糖尿病大量白蛋白尿組，共26例，男12例，女14例；年齡(49.4±6.9)歲。另外選取同期健康體檢者30例作為正常對照組,男11例，女19例；年齡(48.6±6.4)歲。各組患者一般資料比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均>0.05)，具有可比性。

1.2方法 收集所有受檢者清晨清潔中段尿液5 mL，經(jīng)1 500 r/min離心5 min，取上清液保存于-80 ℃冰箱中備用，待所有標(biāo)本收集完畢后進(jìn)行統(tǒng)一檢測。同時采集所有受檢者清晨空腹靜脈血3 mL，常規(guī)離心處理后分離血清，標(biāo)本用于CysC水平的檢測。采用酶聯(lián)免疫吸附法檢測尿NGAL濃度，試劑盒由武漢新啟迪生物科技有限公司提供，嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行操作檢測；尿L-FABP的濃度測定采用酶聯(lián)免疫吸附法，試劑盒由廣州固康生物科技有限公司提供，嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行操作；血清Cys C采用乳膠增強(qiáng)免疫比濁法進(jìn)行檢測，試劑盒由上海撫生實(shí)業(yè)有限公司提供。其中NGAL含量<1.5 μg/L為陰性，NGAL含量≥1.5 μg/L為陽性；L-FABP含量<1.3 μg/mL為陰性，L-FABP含量≥1.3 μg/mL為陽性；Cys C含量<1.2 mg/L為陰性，Cys C含量≥1.2 mg/L為陽性。單項(xiàng)指標(biāo)檢測結(jié)果超過參考區(qū)間上限判為陽性，多指標(biāo)聯(lián)合檢測時，任一指標(biāo)檢測結(jié)果超過參考區(qū)間上限即判為聯(lián)合檢測陽性。其中診斷靈敏度計(jì)算公式為：真陽性/(真陽性+假陰性)×100%；診斷特異度計(jì)算公式為：真陰性/(真陰性+假陽性)×100%。

2 結(jié) 果

2.1各組腎功能相關(guān)指標(biāo)比較 UACR在糖尿病各組中濃度均明顯高于正常對照組，且隨著腎損傷的嚴(yán)重程度增加而遞增，各組間差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均<0.05)；糖尿病大量白蛋白尿組血肌酐(SCr)明顯高于其他各組(P均<0.05)；糖尿病各組尿素氮(BUN)均明顯高于正常對照組(P均<0.05)；且糖尿病大量白蛋白尿組BUN水平明顯高于其他糖尿病組(P均<0.05)；與正常對照組進(jìn)行比較，eGFR水平在糖尿病對照組出現(xiàn)輕度升高，在糖尿病大量白蛋白尿組明顯降低，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均<0.05)。見表1。

2.2各組尿NGAL、尿L-FABP、血清Cys C水平比較 糖尿病微量白蛋白尿組與大量白蛋白尿組尿L-FABP、血清Cys C水平明顯高于正常對照組，且隨著UACR的增加逐漸升高，各組間差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均<0.05)；糖尿病微量白蛋白尿組與大量白蛋白尿組尿NGAL水平明顯高于糖尿病對照組與正常對照組(P均<0.05)。見表2。

表1 各組腎功能相關(guān)指標(biāo)比較

注：①與正常對照組比較，P<0.05；②與糖尿病對照組比較，P<0.05；③與糖尿病微量蛋白尿組比較，P<0.05。

表2 各組腎功能相關(guān)指標(biāo)比較

注：①與正常對照組比較，P<0.05；②與糖尿病對照組比較，P<0.05；③與糖尿病微量白蛋白尿組比較，P<0.05。

2.3單一指標(biāo)與聯(lián)合指標(biāo)檢測診斷糖尿病白蛋白尿靈敏度及特異度的比較 尿NGAL、尿L-FABP、Cys C聯(lián)合檢測對糖尿病腎病的診斷靈敏度與特異度最高，其次是任意兩項(xiàng)指標(biāo)的聯(lián)合檢測，單一指標(biāo)檢測診斷靈敏度及特異度最低。見表3。

3 討 論

糖尿病腎病是糖尿病患者較為常見的慢性并發(fā)癥，其發(fā)病率較高，并且是引發(fā)糖尿病患者病死的重要原因之一。在臨床上，持續(xù)微量白蛋白尿作為腎小球損害的標(biāo)志，是目前用于早期診斷糖尿病腎病的常用方法[7]。糖尿病一旦在臨床上發(fā)展為糖尿病腎病，腎臟損害將不可逆轉(zhuǎn)，絕大多數(shù)患者會在較短的時間內(nèi)進(jìn)入終末期腎病。由于尿微量白蛋白尿在早期糖尿病腎病診斷方面具有一定的局限性，因此，臨床上需要找尋靈敏度高且簡單無創(chuàng)的生物標(biāo)志物來對早期腎損傷進(jìn)行反映。近年來，尿NGAL、尿L-FABP、Cys C等腎小管損傷標(biāo)志物對早期糖尿病腎病的診斷價值引起了較大的關(guān)注。

NGAL是一種分泌性糖蛋白，由一條多肽鏈構(gòu)成，含有178個氨基酸殘基，主要于近端小管表達(dá)，當(dāng)腎小管上皮細(xì)胞受到損傷刺激時大量分泌[8]，其參與炎癥反應(yīng)的清除，同時能夠調(diào)節(jié)免疫應(yīng)答。在糖尿病腎病早期，NGAL通過誘導(dǎo)腎小管中性粒細(xì)胞的凋亡抑制炎癥反應(yīng)，進(jìn)而降低炎癥對腎臟的損害[9]。但是，長期大量的蛋白尿能夠造成重吸收，引發(fā)腎小管損傷加重，進(jìn)而使尿NGAL的表達(dá)得到促進(jìn)。本研究結(jié)果顯示，糖尿病微量白蛋白尿組與大量白蛋白尿組尿NGAL水平明顯高于糖尿病正常組與正常對照組，表明NGAL水平在病理性白蛋白尿出現(xiàn)前就已經(jīng)升高，并未隨腎損傷加重而升高，該物質(zhì)是于糖尿病腎病早期出現(xiàn)的標(biāo)志物。該研究結(jié)果與文獻(xiàn)[10]結(jié)果相一致。

表3 單一指標(biāo)與聯(lián)合指標(biāo)檢測診斷糖尿病白蛋白尿靈敏度及特異度的比較

L-FABP是一類胞內(nèi)分子蛋白，其基因結(jié)構(gòu)高度保守，由10個反向平行的β鏈與2個短的α螺旋組成，有兩個脂肪酸結(jié)合位點(diǎn)，因此，游離脂肪酸的親和力要高于其他類型的FABP。L-FABP主要于肝、腎、小腸等組織細(xì)胞中表達(dá)，在腎臟中主要于近端腎小管細(xì)胞內(nèi)表達(dá)[11]。在肝臟疾病中，血清L-FABP通過腎小球?yàn)V過可能會對尿L-FABP含量產(chǎn)生影響，但尿L-FABP水平不受血L-FABP的影響[12]。本研究結(jié)果顯示，糖尿病各組尿L-FABP水平明顯高于正常對照組，并且L-FABP水平隨著UACR的增加而逐漸增高，表明尿L-FABP水平對早期糖尿病腎病診斷以及其嚴(yán)重程度具有非常重要的價值，與相關(guān)研究結(jié)果一致[13]。

血清Cys C是一種內(nèi)源性非糖基蛋白，屬于胱蛋白抑制劑家族成員之一。由于該分子量較小，帶正電荷，因此能夠自由通過腎小球基底膜，在近曲小管重吸收，并且被完全代謝，外加腎小管不分泌該物質(zhì)，腎臟是其唯一的排泄途徑。本研究結(jié)果顯示，Cys C在糖尿病各組患者中的水平明顯高于正常對照組，并且隨著UACR的增加而逐漸增高，在糖尿病大量白蛋白尿組的水平最高，表明血清Cys C是診斷早期腎損傷的敏感標(biāo)志物，對糖尿病腎病的早期診斷具有一定的價值[14]。

在疾病早期診斷方面，實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)的診斷靈敏度及特異性受到極高的重視。本研究對單一指標(biāo)檢測與多指標(biāo)聯(lián)合檢測的診斷價值進(jìn)行了比較，結(jié)果提示單一指標(biāo)檢測的診斷靈敏度及特異度較2項(xiàng)或3項(xiàng)指標(biāo)聯(lián)合檢測低，且3項(xiàng)指標(biāo)聯(lián)合檢測的診斷靈敏度最高。

綜上所述，尿NGAL、尿L-FABP、血清Cys C對早期糖尿病腎病的診斷都具有重要的價值，且三項(xiàng)指標(biāo)聯(lián)合檢測能夠明顯提高對糖尿病腎病的診斷靈敏度及特異度。

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操軒，E-mail：cxhyl4678@163.com

10.3969/j.issn.1008-8849.2015.32.026

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2014-12-04