劉 鵬，周 軍

(1.商洛職業(yè)技術(shù)學(xué)院，陜西 商洛 726000；2.陜西中醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院，陜西 咸陽(yáng) 712000)

蒲黃壓瘡散對(duì)大鼠壓瘡模型創(chuàng)面血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子的影響

劉 鵬1，周 軍2

(1.商洛職業(yè)技術(shù)學(xué)院，陜西 商洛 726000；2.陜西中醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院，陜西 咸陽(yáng) 712000)

目的 研究蒲黃壓瘡散對(duì)大鼠壓瘡模型創(chuàng)面血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)的影響。方法 將40只SD大鼠隨機(jī)分成假手術(shù)(A組)、壓瘡模型組(B組)、蒲黃壓瘡散治療組(C組)及云南白藥治療組(D組)。采用磁力壓迫持續(xù)缺血損傷方法構(gòu)建壓瘡動(dòng)物模型，造模成功后，均常規(guī)換創(chuàng)面藥，C組及D組創(chuàng)面分別敷蒲黃壓瘡散及云南白藥。5 d后分別于創(chuàng)面邊緣取材,組織常規(guī)固定、包埋、連續(xù)切片、HE染色,VEGF免疫組織化學(xué)染色標(biāo)記，光鏡下觀察并攝片。結(jié)果 C組、D組大鼠創(chuàng)面VEGF標(biāo)記毛細(xì)血管數(shù)量、毛細(xì)血管面積均高于B組(P均<0.01)，C組高于D組(P均<0.05)。結(jié)論 蒲黃壓瘡散可以有效改善壓瘡創(chuàng)面局部的血液循環(huán)，促進(jìn)血管及纖維組織的增生,進(jìn)而促進(jìn)創(chuàng)面的修復(fù)。

蒲黃壓瘡散；壓瘡；血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子

壓瘡又稱為壓力性潰瘍,舊稱褥瘡，是由于肢體突出部位組織長(zhǎng)期局部受壓導(dǎo)致組織長(zhǎng)期持續(xù)缺血、缺氧及營(yíng)養(yǎng)障礙而引起的局部組織血流障礙,致使組織發(fā)生潰爛壞死[1]。壓瘡是長(zhǎng)期臥床患者常見的并發(fā)癥，尤以老年人多見。而我國(guó)目前人口老齡化問題日趨嚴(yán)重，故壓瘡的患病人群也必將逐年增多。壓瘡常由于病程遷延難愈，給臨床治療和護(hù)理帶來(lái)極大困難[2]。同時(shí)由于壓瘡的發(fā)生，導(dǎo)致患者經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)加重，生活質(zhì)量嚴(yán)重下降。故尋求快速有效治愈壓瘡的方法，是臨床醫(yī)生和護(hù)理人員亟待研究的一項(xiàng)重要課題。目前,臨床上對(duì)于壓瘡的治療較多局限于西醫(yī)的局部換藥治療，往往效果較差[3]。筆者認(rèn)為,單純的局部換藥處理對(duì)于壓瘡創(chuàng)面的愈合是不夠的，特別是嚴(yán)重壓瘡患者,促進(jìn)局部創(chuàng)面組織的血液循環(huán)，增強(qiáng)局部組織的抗感染能力，增強(qiáng)組織的愈合能力才是快速治愈壓瘡的根本。本研究觀察了蒲黃壓瘡散對(duì)大鼠壓瘡模型創(chuàng)面血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)的影響，旨在為其臨床上治療壓瘡提供實(shí)踐依據(jù)。

1 實(shí)驗(yàn)資料

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及分組 自西安交通大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心購(gòu)成年健康SD大鼠40只，雌雄各半，體質(zhì)量(200±20)g,動(dòng)物合格證編號(hào)：SCXK(陜)2014-008。將大鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)(飼養(yǎng)溫度控制在20～25 ℃，濕度控制在40%～70%，采用標(biāo)準(zhǔn)飼料進(jìn)行喂養(yǎng)，標(biāo)準(zhǔn)飼料購(gòu)于西安交通大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心)1周后，根據(jù)隨機(jī)數(shù)字表將大鼠隨機(jī)分為假手術(shù)組(A組)、壓瘡模型組(B組)、蒲黃壓瘡散治療組(C組)及云南白藥治療組(D組)，每組10只。

1.2 試劑及藥物 蘇木素伊紅(HE)染色試劑盒(上海滬峰生物科技有限公司生產(chǎn)) 、鼠抗人VEGF免疫組化試劑(北京博奧森生物技術(shù)有限公司)、蒲黃壓瘡散(組方：蒲黃粉100 g、黃連10 g、大黃10 g、白芨10 g,將其研成極細(xì)末，高壓滅菌備用)、云南白藥、圓片形磁鐵(直徑25 mm，厚3 mm，高壓滅菌備用)和圓環(huán)形鐵片(外徑25 mm，內(nèi)徑8 mm，厚1 mm，高壓滅菌備用)。

1.3 動(dòng)物模型制備 健康SD大鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后，B、C、D組實(shí)驗(yàn)前8 h禁食、禁飲。大鼠經(jīng)10%水合氯醛(0.3 mL/100 g體質(zhì)量)腹腔注射麻醉后，在其背部正中線備皮后，做一深至筋膜的切口，鈍性分離，將圓環(huán)形鐵片植入背部皮下，體外采用圓片形磁鐵間歇性施加壓力。外源磁片與體內(nèi)移植磁片相互產(chǎn)生吸引，從而對(duì)皮膚產(chǎn)生壓力，造成局部皮膚缺血，每次缺血2 h后，再將外源磁片拿下，讓局部血流恢復(fù)30 min，如此進(jìn)行1個(gè)循環(huán)[4]。每只大鼠每天進(jìn)行5個(gè)連續(xù)的循環(huán)，連續(xù)進(jìn)行3 d，30只大鼠均形成壓瘡，壓瘡分度在Ⅱ～Ⅲ期提示造模成功[5]，取出圓環(huán)形鐵片。A組大鼠僅做背部正中線深及深筋膜切口即可。造模期間分籠飼養(yǎng)，每天創(chuàng)面噴灑硫酸慶大霉素注射液預(yù)防感染。

1.4 治療方法 C組、D組均采用2%碘酒及75%乙醇消毒壓瘡創(chuàng)面周圍皮膚，3%雙氧水棉球消毒壓瘡創(chuàng)面，生理鹽水沖洗創(chuàng)面，干紗布?jí)K擦干創(chuàng)面后，C組創(chuàng)面上撒滅菌的蒲黃壓瘡散，D組創(chuàng)面上撒云南白藥，然后均以凡士林紗條覆蓋，無(wú)菌紗布覆蓋，繃帶固定包扎。A組、B組創(chuàng)面除不撒藥物外，其余處理同C組、D組，均每天換藥1次，仔細(xì)觀察壓瘡創(chuàng)面肉芽組織生長(zhǎng)及愈合情況。

1.5 檢測(cè)指標(biāo)和方法 4組均于治療5 d時(shí)分別于創(chuàng)面邊緣取材,組織常規(guī)固定、包埋、連續(xù)切片、HE染色,VEGF免疫組織化學(xué)染色標(biāo)記，光鏡下觀察并攝片。免疫組化標(biāo)記以棕黃色顆粒狀沉積為陽(yáng)性，明確陽(yáng)性血管內(nèi)皮細(xì)胞和毛細(xì)血管后，由顯微圖像分析系統(tǒng)進(jìn)行低倍鏡下(×10)觀看，隨機(jī)選取2個(gè)視野,計(jì)算陽(yáng)性毛細(xì)血管數(shù)及陽(yáng)性毛細(xì)血管面積[6]。

2 結(jié) 果

2.1 大鼠VEGF免疫組化標(biāo)記鏡下表現(xiàn) C組及D組大鼠壓瘡創(chuàng)面VEGF標(biāo)記毛細(xì)血管數(shù)量及增生的血管內(nèi)皮細(xì)胞明顯較多，見圖1和圖2。而B組 大鼠壓瘡創(chuàng)面VEGF標(biāo)記毛細(xì)血管數(shù)量及增生的血管內(nèi)皮細(xì)胞明顯較少，見圖3。

2.2 大鼠壓瘡創(chuàng)面VEGF標(biāo)記毛細(xì)血管情況比較 C組、D組大鼠創(chuàng)面VEGF標(biāo)記毛細(xì)血管數(shù)量和毛細(xì)血管面積均明顯高于B組(P均<0.01)，且C組明顯高于D組(P<0.05)。見表1。

3 討 論

圖1 A組VEGF免疫組化標(biāo)記鏡下表現(xiàn)(×10)

圖2 D組VEGF免疫組化標(biāo)記鏡下表現(xiàn)(×10)

圖3 B組VEGF免疫組化標(biāo)記鏡下表現(xiàn)(×10)

表1 各組大鼠壓瘡創(chuàng)面VEGF標(biāo)記毛細(xì)血管情況比較

注：①與B組比較，P<0.01;②與D組比較，P<0.05。

目前由于壓瘡是生理學(xué)、病理學(xué)、組織學(xué)等學(xué)科共同研究的焦點(diǎn)問題，因不同研究存在側(cè)重點(diǎn)不同和研究方向差異，使壓瘡的形成機(jī)制呈現(xiàn)多學(xué)派爭(zhēng)鳴的局面。壓瘡形成機(jī)制有缺血性損傷學(xué)說、再灌注傷學(xué)說、細(xì)胞變形學(xué)說等，但理論界普遍支持缺血性損傷學(xué)說。該學(xué)說認(rèn)為壓瘡的實(shí)質(zhì)是組織受壓變形后毛細(xì)血管被阻斷導(dǎo)致局部缺血，各層組織同時(shí)發(fā)生相應(yīng)的病理改變,包括水腫、吞噬細(xì)胞浸潤(rùn)、橫紋肌溶解消失、膠原纖維透明性變等[7]。結(jié)合壓瘡致病機(jī)制，西醫(yī)認(rèn)為壓瘡的治療主要是解除壓力壓迫，積極局部換藥，預(yù)防創(chuàng)面感染，加強(qiáng)全身營(yíng)養(yǎng)以及必要時(shí)手術(shù)治療等。但臨床往往治療效果差，創(chuàng)面遷延不愈。壓瘡的難以愈合不僅降低了患者的生活質(zhì)量，而且極大地消耗了醫(yī)藥及護(hù)理費(fèi)用。

中醫(yī)認(rèn)為,壓瘡的成因?yàn)榫植棵}絡(luò)瘀阻或復(fù)感邪毒,瘀毒互結(jié)而致局部紅腫潰破成腐成膿,加之患者多為氣血虛衰, 瘡口不能自愈。針對(duì)壓瘡病因宜選用解毒疏散、活血化瘀、收斂生肌之中藥,效果頗佳[8]。蒲黃壓瘡散由蒲黃粉、大黃、黃連、白芨中藥組成，其中蒲黃粉為香蒲科植物水燭香蒲( 狹葉香蒲)、東方香蒲或同屬植物的干燥花粉，蒲黃粉含有黃酮類組分，而黃酮類組分中的苷類具有顯著活血化瘀作用，故蒲黃粉為重要的傳統(tǒng)化瘀藥物，具有行血和破血的功效[9]。另外研究表明, 蒲黃水溶液體外對(duì)金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、大腸埃希菌、傷寒桿菌、痢疾桿菌及Ⅱ型副傷寒桿菌均有較強(qiáng)抑制作用和抗炎作用[10]。故組方中的蒲黃對(duì)壓瘡創(chuàng)面的感染預(yù)防和治療有極其重要的作用。大黃中的主要成分為蒽醌衍生物、大黃酸、大黃素和蘆薈大黃素等， 具有清熱解毒、活血化瘀、解痙功能,并具有較強(qiáng)的抗菌作用[11]；大黃粉外敷具有活血祛瘀、抑菌消炎、收斂和消除局部性炎水腫的作用[12]。黃連為毛茛科植物，具有清熱燥濕、瀉火解毒之功效。白芨性微寒,味苦、甘、澀，具有收斂止血、清熱利濕、消腫止痛之功效，臨床上廣泛用于治療咯血、吐血、外傷出血、瘡瘍腫毒、皮膚鄆裂、肺結(jié)核吐血、潰瘍病出血等病癥[13]。四味中藥合用，覆蓋于壓瘡創(chuàng)面，具有的清熱解毒、活血化瘀、抗炎、消腫止痛、收濕斂瘡之功效。

VEGF是一種特異地作用于血管內(nèi)皮細(xì)胞的多功能細(xì)胞因子, 既能使血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖、遷移，又能增加血管的通透性，使血管中的大分子物質(zhì)進(jìn)入細(xì)胞外基質(zhì)中,有利于新生血管和基質(zhì)的細(xì)胞生長(zhǎng)[14]。VEGF在壓瘡愈合過程中表達(dá)比較豐富，其在壓瘡愈合過程中起決定性作用。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果也顯示蒲黃壓瘡散及云南白藥均可增加大鼠創(chuàng)面VEGF的表達(dá)，能有效改善壓瘡創(chuàng)面局部的血液循環(huán)，促進(jìn)血管及纖維組織的增生,進(jìn)而促進(jìn)創(chuàng)面的修復(fù)。但蒲黃壓散效果更好。

綜上所述, 蒲黃壓瘡散可以有效改善壓瘡創(chuàng)面局部的血液循環(huán)，促進(jìn)血管及纖維組織的增生,與該方具有的清熱解毒、活血化瘀、抗炎、消腫止痛、收濕斂瘡之功效相一致，為臨床應(yīng)用蒲黃壓瘡散治療壓瘡提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

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Influence of Pollen Typhae Bedsore Powder on VEGF in rat model of pressure ulcer wound

LIU Peng1, ZHOU Jun2

(1.Shangluo Vocational and Technical College, Shangluo 726000, Shannxi, China; 2.The Affiliated Hospital of Shaanxi University of Chinese Medicine, Xianyang 712000, Shaanxi, China)

Objective It is to observe the influence of Pollen Typhae Bedsore Powder (PTBP) on vascular endothelial growth factor (VEGF) in rat model of pressure ulcer wound.Methods 40 rats were randomly divided into sham operation control group (group A), model group (group B), PTBP group (group C) and Yunnan Baiyao group (group D).The animal model of pressure sore was constructed by magnetic compression sustained ischemic damage.After the success of modeling, the animals were given routine dressing PTBP in group C and with Yunnan Baiyao in group D.5 days respectively to the wound edge tissue based, conventional fixed, embedded, serial section, HE staining, the expression of VEGF were observed under light microscope and photographed by immunohistochemical staining.Results The number of capillaries marked by VEGF and the number of capillary capillary area in rats of group C and D wound were higher than those of group B (allP<0.01), and those of group C were higher than group D (P<0.05).Conclusion PTBP can effectively improve the local blood circulation of decubitus ulcer, promote blood vessels and fibrous tissue hyperplasia, thereby promoting wound repair.

Pollen Typhae Bedsore Powder; pressure sore; vascular endothelial growth factor

劉鵬，男，講師,碩士,從事免疫學(xué)教學(xué)與科研、病原微生物與臨床疾病關(guān)系研究。

陜西省教育科學(xué)“十二五”規(guī)劃課題(SGH140934)

10.3969/j.issn.1008-8849.2015.15.004

R-332

A

1008-8849(2015)15-1606-03

2015-01-25