杜建紅寇新民郄革紅張國(guó)慶

（1成都軍區(qū)聯(lián)勤部藥品儀器檢驗(yàn)所，四川 成都610017；2成都軍區(qū)八一骨科醫(yī)院，610015）

HPLC測(cè)定杜五液中芍藥苷的含量

杜建紅1寇新民2郄革紅1張國(guó)慶1

（1成都軍區(qū)聯(lián)勤部藥品儀器檢驗(yàn)所，四川 成都610017；2成都軍區(qū)八一骨科醫(yī)院，610015）

目的：建立高效液相色譜法（HPLC）測(cè)定杜五液中芍藥苷含量的方法。方法：采用HPLC測(cè)定制劑中赤芍的主要成分芍藥苷的含量；色譜柱為C18柱（250 mm×4.6 mm，5μm）；流動(dòng)相為：乙腈-0.1%磷酸水溶液（18∶82）；檢測(cè)波長(zhǎng)：230 nm；柱溫：30℃；流速：1.0 m L/min。結(jié)果：芍藥苷在5.89～ 58.88μg/m L范圍內(nèi)線性關(guān)系良好（r＝0.999 9），平均回收率97.07%～ 103.09%，試驗(yàn)結(jié)果RSD為2.20%（n=9）。結(jié)論：本法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確性好，可用于杜五液的質(zhì)量控制。

杜五液；高效液相色譜法；芍藥苷；含量；測(cè)定

杜五液是由羌活、川芎、赤芍等9味中藥組成的特色醫(yī)院制劑，具有袪風(fēng)散寒、活血通絡(luò)的作用。臨床用于各類陳舊傷，風(fēng)濕麻木，腰酸腿痛。本文依據(jù)《中國(guó)藥典》2010年版一部附錄“中藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)分析方法驗(yàn)證指導(dǎo)原則”[1]，采用高效液相色譜法（HPLC）測(cè)定制劑中赤芍的主要成分芍藥苷的含量[2]，從而建立控制杜五液制劑質(zhì)量的含量測(cè)定方法。

1 儀器與試藥

島津LC-20AD型液相色譜儀；電子分析天平（TB-215D,丹佛儀器北京有限公司）；芍藥苷對(duì)照品（來(lái)源于中國(guó)食品藥品檢定研究院）；杜五液（成都軍區(qū)八一骨科醫(yī)院,100 m L/瓶，批號(hào)：20130729，20131104，20131203），乙腈為色譜純，水為重蒸水，其余試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 含量測(cè)定

2.1.1 色譜條件色譜柱：C18柱（250mm×4.6mm，5μm）；流動(dòng)相為：乙腈-0.1%磷酸水溶液（18∶82）；檢測(cè)波長(zhǎng)：230 nm；柱溫：30℃；流速：1.0 m L/m in；進(jìn)樣量：10μL。

2.1.2 溶液的制備①供試品溶液的制備：精密量取本品5 m L，置10 m L量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得。②對(duì)照品溶液的制備：取芍藥苷對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇溶液稀釋制成每1 m L含0.03 mg的溶液，即得。③陰性對(duì)照溶液劑量：按處方比例及工藝制備缺赤芍的陰性對(duì)照樣品，按供試品溶液項(xiàng)下方法制成陰性對(duì)照溶液。

2.1.3 專屬性考察分別吸取供試品、對(duì)照品、陰性對(duì)照溶液各 10μL，注入液相色譜儀，按2.1.1項(xiàng)下的色譜條件，進(jìn)樣測(cè)定，記錄色譜圖，見(jiàn)圖1。樣品中芍藥苷峰與其他組分色譜峰能達(dá)到基線分離，陰性對(duì)照溶液色譜峰對(duì)測(cè)定無(wú)干擾。采用擬定的方法對(duì)本品進(jìn)行含量測(cè)定，專屬性良好。

圖1 杜五液的HPLC圖

2.1.4 線性關(guān)系考察取芍藥苷對(duì)照品適量，精密稱定，制備對(duì)照品儲(chǔ)備液，再用甲醇稀釋成一系列的線性對(duì)照品溶液。按照擬定的測(cè)定條件進(jìn)行測(cè)定，記錄峰面積。以芍藥苷濃度X（μg/m L）為橫坐標(biāo)，芍藥苷峰面積Y為縱坐標(biāo)，進(jìn)行回歸，得回歸方程：

Y=14 181X＋ 583.49。

試驗(yàn)結(jié)果顯示，芍藥苷濃度在5.89～58.88μg/m L范圍內(nèi)線性關(guān)系良好（r=0.999 9）。

2.1.5 溶液穩(wěn)定性試驗(yàn)取新配制的芍藥苷對(duì)照品溶液及供試品溶液，分別在 0，1，2，4，8，12小時(shí)進(jìn)樣，每次進(jìn)樣10μL，記錄芍藥苷峰面積，試驗(yàn)結(jié)果顯示，對(duì)照品溶液及供試品溶液均在12小時(shí)內(nèi)穩(wěn)定性良好（RSD小于2%）。

2.1.6 進(jìn)樣精密度試驗(yàn)取同一對(duì)照品溶液，按照擬定的測(cè)定條件重復(fù)測(cè)定6次，記錄芍藥苷峰面積，考察進(jìn)樣精密度。試驗(yàn)結(jié)果RSD為0.45%，表明進(jìn)樣精密度良好。

2.1.7 重復(fù)性試驗(yàn)取供試品（批號(hào)：20131104），按擬定方法制備供試品溶液，平行制備6份，測(cè)定芍藥苷含量。試驗(yàn)結(jié)果RSD為0.84%，表明該方法重現(xiàn)性較好。

2.1.8 回收率試驗(yàn)采用加樣回收法，精密量取已知含量的供試品（批號(hào)：20131104，含量：0.056mg/m L）9份，每份2.5 m L，置10 m L量瓶中，分別加入芍藥苷對(duì)照品3，5，9 mg（每個(gè)水平3份），照擬定的方法制備供試品溶液并測(cè)定芍藥苷含量，計(jì)算芍藥苷的回收率，結(jié)果見(jiàn)表1。RSD為2.20%，回收率為97.07% ～ 103.09%，表明擬定的含量測(cè)定方法回收率良好。

表1 芍藥苷回收率試驗(yàn)結(jié)果

2.1.9 樣品測(cè)定采用經(jīng)過(guò)驗(yàn)證，專屬性、重復(fù)性良好，準(zhǔn)確度良好的含量測(cè)定方法，對(duì)多批樣品中的芍藥苷含量進(jìn)行測(cè)定，試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表2。

3 討論

3.1取芍藥苷對(duì)照品溶液，經(jīng) UV光譜掃描，在230 nm處有最大吸收，同時(shí)參照《中國(guó)藥典》2010版一部赤芍含量測(cè)定波長(zhǎng)，故確定測(cè)定波長(zhǎng)為230 nm。

Determ ination of Paeoniflorin in Duwu Ye by HPLC

Du Jianhong1，Kou Xinmin2，Qie Gehong1，Zhang Guoqing1（1 Institute for Drug and Instrument Control of Chengdu M ilitary Region，Sichuan Chengdu 610017，China；2 Bayi Orthopedics Hospital of Chengdu M ilitary Region，610015）

Objective:To establish a HPLC method for the content determination of paeoniflorin in Duwu Ye.M ethods:HPLC was employed to determ ine the content of paeoniflorin in the preparation.The chromatographic column C18（250 mm×4.6 mm，5μm）was adopted w ith acetonitrile-0.1%phosphoric acid solution（18∶82）as the mobile phase at a flow rate of 1.0 m L/m in.The detection wavelength was set at 230 nm and the column temperature at 30℃.Results:A good linear relationship of paeoniflorin was obtained w ithin the range of 5.89～58.88μg/m L（r＝0.999 9）.The average recovery was 97.07%～103.09%，RSD=2.20% （n=9）.Conclusion:The method is simple and convenient w ith a good accuracy.It can be used for the quality control of Duwu Ye.

Duwu Ye；HPLC；Paeoniflorin；Content；Determine

10.3969/j.issn.1672-5433.2015.06.007

成都軍區(qū)醫(yī)學(xué)科學(xué)技術(shù)研究“十二五”面上項(xiàng)目（C12072）

杜建紅，男，副主任藥師。研究方向：藥物分析。通訊作者E-mail：yjsdjh@163.com