【摘要】 目的 統(tǒng)計結(jié)直腸癌中CCNB2的表達情況，分析結(jié)直腸癌中CCNB2陽性表達的臨床意義。方法 隨機選取2010年6月～2013年11月份我院在手術(shù)治療中留取的結(jié)直腸癌病標本57例和癌旁正常組織標本49例，用免疫組化法檢測CCNB2蛋白表達，用實時定量PCR法檢測CCNB2 mRNA表達。結(jié)果 CCNB2蛋白陽性表達主要在細胞質(zhì)，偶見于細胞核。結(jié)直腸癌組織中CCNB2 mRNA相對表達量（36.52±8.82）和CCNB2蛋白陽性表達率（86.21％）均顯著高于癌旁正常組織，P<0.05，差異具有顯著性。結(jié)論 CCNB2在結(jié)直腸癌組織呈高表達，有望作為診斷和預后的參考指標。

doi:10.3969/j.issn.1674-9316.2015.04.005

工作單位：014000包頭醫(yī)學院第一附屬醫(yī)院普外二科

The Expressions of CCNB2 in Colorectal Cancer Tissue and Its Clinical Significance

WANG Xinghong General Surgery Department Ⅱ，The First Affiliated Hospital of Baotou Medical College in Inner Mongolia，Baotou 014000，China

【Abstract】

Objective To sum up the expressions of CCNB2 in colorectal cancer and to analyze its clinical significance of positive expression. Methods From June 2010 to November 2013，57 specimens of colorectal cancer were taken during the surgery and 49 specimens of adjacent normal tissue were taken. They were randomly selected as the objects in our hospital. CCNB2 protein expression was detected by immunohistochemical method CCNB2mRNA expression was detected by real-time quantitative PCR method. Results The positive expression of CCNB2 protein was mainly in the cytoplasm and occasionally in the nucleus. The relative expression value of CCNB2mRNA in colorectal cancer tissues was （36.52±8.82） and CCNB2 protein positive expression rate was （86.21％）. They were both significantly higher than that of adjacent normal tissues，P<0.05，the difference was significant. Conclusion In colorectal cancer tissues，CCNB2 showed high expressions，it is expected to become the early evaluation index of prognosis.

【Key words】Colorectal cancer，CCNB2，Immunohistochemistry

CCNB2 （Cyclin B2，細胞周期蛋白B2）作為細胞周期蛋白家族之一，不僅在惡性腫瘤組織中呈高水平陽性表達，并且與患者的病理特征、預后具有顯著相關(guān)性 ［1］。為了給結(jié)直腸癌的診斷和預后評估提供借鑒，筆者對檢測并分析了結(jié)直腸癌組織中CCNB2的陽性表達情況，現(xiàn)將結(jié)果報道如下：

1 資料與方法

1.1 組織來源

隨機選擇2010年6月～2013年11月份期間我院經(jīng)手術(shù)切除治療的57例結(jié)直腸癌患者共為研究對象，其中男性32例，女性25例，年齡27～70歲，平均年齡（57.59±6.41）歲，22例為結(jié)腸癌，35例為直腸癌，組織學分級結(jié)果為40例Ⅰ～Ⅱ級，17例Ⅲ級。在手術(shù)中共切取57例結(jié)直腸癌組織標本以及49例癌旁正常組織標本。病例入選標準：（1）臨床相關(guān)資料完整，無缺漏；（2）患者知情同意；（3）術(shù)前均未采取放療、化療等其他干預措施。

1.2 研究方法

1.2.1 CCNB2 mRNA檢測 組織置于研磨缽中馬上加入液氮，迅速研成粉末狀，應用TRIZOL依據(jù)說明書提取組織總RNA，利用酶標儀檢測濃度和OD 值，再按將RNA 進行逆轉(zhuǎn)錄獲得cDNA，行PCR反應。內(nèi)參為GAPDH 和CCNB2引物。反應體系為10 μl，反應條件參數(shù)：95℃預變性30 s后，再95 ℃ 作用5 s，60℃作用30 s，共40個循環(huán)。檢測CT 值并行2- ΔΔCT 法計算。

1.2.2 CCNB2蛋白免檢測 標本在經(jīng)過固定（中性甲醛溶液）、包埋（石蠟）處理后行常規(guī)切片，室溫下添加3％ H2O2孵育20 min，封閉SOD，微波修復抗原，添加山羊血清和抗CCNB2抗體，放置在4℃中孵育24 h，滴加生物素標記羊抗鼠二抗，37℃下孵育60 min，辣根酶標記后37℃下再孵育30 min后進行DAB顯色反應，再經(jīng)蘇木精復染、脫水以及透明處理后，用中性樹膠進行封片，用顯微鏡進行觀察和拍照。

1.3 結(jié)果判定

參照文獻報道進行陽性結(jié)果評價 ［2］。細胞內(nèi)見棕黃色顆粒為CCNB2陽性表達，無陽性顆粒表達為陰性。

1.4 統(tǒng)計學處理

實驗數(shù)據(jù)統(tǒng)計學分析采用SPSS.14.0，計量資料用t檢驗分析，計數(shù)資料用χ 2檢驗分析，P<0.05，差異具有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

結(jié)直腸癌組織中CCNB2蛋白陽性表達共50例，陽性表達率為86.21％，CCNB2 mRNA相對表達量為36.52±8.82，癌旁正常組織中未見CCNB2蛋白陽性表達，CCNB2 mRNA相對表達量為11.42±3.21，兩種檢測結(jié)果比較，P<0.05，差異具有統(tǒng)計學意義。

3 討論

CCNB2是B型細胞周期蛋白之一，在結(jié)直腸癌中，可與位于CNNB2啟動子的DNA片斷能夠與NF-Y 亞基結(jié)合，調(diào)控激活CCNB2啟動子活性。CCNB2表達水平上調(diào)能夠加快細胞周期進程，從而促進腫瘤細胞異常增殖。相關(guān)研究證實 ［2］也CCNB2能夠結(jié)合CDC2激酶，降低CCNB2表達能夠促使細胞周期停滯，進而抑制腫瘤進展。本實驗中，結(jié)直腸組織中可見CCNB2異常高表達，其CCNB2蛋白陽性表達率以及mRNA相對表達量均顯著高于正常組織。綜上所述，結(jié)直腸癌中CCNB2呈高表達，其對診斷和判斷預后具有重要作用。