王　玥，郭　花，張　平，劉蓮勤，劉亞男，王　波，李　揚(吉林大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院病理生理學(xué)系，吉林長春130021)

長期低劑量鎘致正常肝臟細胞異常增殖及其與caspase-8甲基化的關(guān)系

王玥，郭花，張平，劉蓮勤，劉亞男，王波△，李揚△
(吉林大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院病理生理學(xué)系，吉林長春130021)

目的:應(yīng)用L-02細胞建立長期低劑量鎘轉(zhuǎn)化細胞模型。觀察轉(zhuǎn)化細胞形態(tài)學(xué)變化，檢測轉(zhuǎn)化細胞增殖、凋亡和甲基化的改變，探討長期低劑量鎘導(dǎo)致細胞轉(zhuǎn)化的機制。方法:采用MTT法、形態(tài)學(xué)分析、Western blot、細胞克隆形成、流式細胞術(shù)、限制性內(nèi)切酶酶切電泳和MSP。分組:對照組、CDT-L-02組、5-aza組和CDT-L-02 +5-Aza組。結(jié)果: (1) 1 μmol/L氯化鎘培養(yǎng)L-02細胞第2周時，細胞長軸逐漸變長; 10周時，細胞從方形變成長梭形;與對照組相比，轉(zhuǎn)化細胞DNMT1表達穩(wěn)定升高，caspase-8表達穩(wěn)定下降。與對照組L-02細胞相比，轉(zhuǎn)化細胞的增殖率，克隆形成率明顯升高。(2)轉(zhuǎn)化細胞在甲基化抑制劑5-Aza的作用下，與對照組相比，增殖率明顯下降，凋亡率明顯增加; DNMTs、caspase-8與凋亡和周期相關(guān)蛋白的表達在5-Aza的作用下恢復(fù)到對照組的水平;基因組和caspase-8基因啟動子甲基化的水平也有所恢復(fù)。結(jié)論:長期低劑量鎘能促進正常肝細胞L-02增殖增加，凋亡減少，導(dǎo)致正常細胞發(fā)生轉(zhuǎn)化，其機制是提高了基因組DNA和caspase-8基因啟動子甲基化的水平。

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