杜少甫

（河南省新鄉(xiāng)市動物衛(wèi)生監(jiān)督所,河南新鄉(xiāng) 453003）

銀納米材料抗豬傳染性胃腸炎病毒作用的研究

杜少甫

（河南省新鄉(xiāng)市動物衛(wèi)生監(jiān)督所,河南新鄉(xiāng) 453003）

豬傳染性胃腸炎（TGE）是由豬傳染性胃腸炎病毒（TGEV）所引起，該病傳染性很強(qiáng)。本研究分別使用兩種銀納米材料（銀納米顆粒和銀納米線）作用于冠狀病毒模型的豬傳染性胃腸炎病毒，詳細(xì)記錄觀察銀納米材料對于豬傳染性胃腸炎病毒的抑制作用。結(jié)果表明，銀納米材料能有效地抑制豬傳染性胃腸炎病毒。

豬傳染性胃腸炎 銀納米材料 抑制

豬傳染性胃腸炎傳染快，發(fā)病急。臨床以嘔吐、脫水、腹瀉，嚴(yán)重時可危及豬只生命。因病原體是豬傳染性胃腸炎病毒，屬于冠狀病毒，人畜共患。目前，對于本病尚未有確切的治療途徑，注射疫苗在一定程度上可以緩解這種疾病帶來的危害，但無法徹底控制病毒的產(chǎn)生，已被我國列入3類傳染病，需重點(diǎn)防護(hù)。

1 材料與方法

1.1 銀納米材料

現(xiàn)代科技的發(fā)展使得納米材料迅速走進(jìn)養(yǎng)殖業(yè)，這是一種通過化學(xué)與物理學(xué)相結(jié)合方法研究開發(fā)出來的新型材料[1]。本次實(shí)驗(yàn)中所選取的銀納米顆粒（Ag NPs）與銀納米線（Ag NWs）尺寸大小均為20 nm，質(zhì)量相同且沒有受到污染，具有科學(xué)實(shí)驗(yàn)價值，銀納米材料由實(shí)驗(yàn)室提供。將其妥善包裝放置常溫下保存。

1.2 冠狀病毒模型

將實(shí)驗(yàn)室內(nèi)保存下來的豬傳染性胃腸炎病毒進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)，并且接種同類型病毒細(xì)胞，在顯微鏡下觀察其病變[2]。將獲得的豬傳染性胃腸炎病毒細(xì)胞反復(fù)進(jìn)行凍融，大約3次之后，取出破損細(xì)胞。將制作出的病毒模型放置20℃下保存[3]。

1.3 其他材料及操作器材

本次實(shí)驗(yàn)所需要的用具為：CO2培養(yǎng)箱、離心機(jī)、Hitachi H-300、透射電鏡、超凈工作臺、水平搖床等等。所需實(shí)驗(yàn)參照模 型為豬睪丸的常規(guī)體細(xì)胞（ST），保留其細(xì)胞完整形態(tài)，將其放置培養(yǎng)液（DMEM）中保存[4]。

2 實(shí)驗(yàn)過程及結(jié)果分析

本次實(shí)驗(yàn)需要探究在銀納米材料影響下正常細(xì)胞模型（ST）受豬傳染性胃腸炎病毒（TGEV）的感染程度，以豬傳染性胃腸炎作為冠狀病毒模型，首次在體外評價了兩種不同的銀納米材料對豬傳染性胃腸炎病毒感染的宿主細(xì)胞及導(dǎo)向的細(xì)胞凋亡的抑制效果。

2.1 病毒對常規(guī)細(xì)胞（ST）活性的影響

將銀納米材料放進(jìn)細(xì)胞培養(yǎng)板分別與等量培養(yǎng)液（DMEM）混合作用1.5 h，檢測其納米銀細(xì)胞濃度為85%。將DMEM中生長成熟的ST細(xì)胞取出并檢測其豬睪丸體細(xì)胞濃度為86.5%。再將其與細(xì)胞培養(yǎng)板中生長約90%濃度的TGEV病毒細(xì)胞進(jìn)行接種，感染24 h后收集ST細(xì)胞。將這些ST細(xì)胞在避光室溫反應(yīng)30min，再上機(jī)檢測ST細(xì)胞活性情況。將與豬傳染性胃腸炎病毒（TGEV）所制作的冠狀病毒模型溶液接種的ST細(xì)胞溶液培養(yǎng)72 h以后，可以明顯觀察到這些細(xì)胞已經(jīng)發(fā)生嚴(yán)重的病變，已經(jīng)失去了正常的形態(tài)，細(xì)胞核極少貼壁，所有的細(xì)胞基本上都已經(jīng)全部脫離單層。得出檢測結(jié)論為，接種豬傳染性胃腸炎病毒的ST細(xì)胞，其細(xì)胞活性大大降低，基本都已失活[5]。

2.2 銀納米材料對病毒的抑制能力檢測

將已經(jīng)培養(yǎng)好的銀納米材料取出分為，20 nm的銀納米顆粒為A組，其細(xì)胞濃度為飽和的95.7%。20 nm的銀納米線為B組，其細(xì)胞濃度同樣為飽和狀態(tài)的94.8%。在A組溶液中加入5 mg接近失活的ST細(xì)胞溶液，在B組溶液中加入5mg未收到感染的ST細(xì)胞溶液，經(jīng)過離心機(jī)使溶液快速混合震蕩，再將B組溶液接種TGEV病毒細(xì)胞溶液。AB兩組溶液均放置在40℃培養(yǎng)箱中。30 min后分別提取出AB兩組溶液中少量的細(xì)胞通過顯微鏡觀察情況。

30 min后取出AB兩組溶液放置顯微鏡下觀察，A組溶液感染后通過銀納米粉末融合培養(yǎng)，在顯微鏡下之前呈現(xiàn)接近失活的細(xì)胞，形態(tài)都已經(jīng)變得完整，發(fā)生病變而死亡的細(xì)胞在溶液中只剩極少的部分，可以觀測到細(xì)胞活性正在恢復(fù)。B組溶液未受病毒感染并且加入銀納米線進(jìn)行培養(yǎng)，之后與病毒溶液發(fā)生接種并且經(jīng)過30 min感染時間。其在顯微鏡下的觀察情況為，細(xì)胞呈鋪路石狀，大小均勻，且細(xì)胞結(jié)構(gòu)完整、細(xì)胞折光性良好，發(fā)現(xiàn)個別受到感染的情況，但其細(xì)胞結(jié)構(gòu)依然完整。A組中的ST細(xì)胞濃度從受到感染之后的37%恢復(fù)到了52.2%，B組溶液的ST細(xì)胞濃度感染之前為86.5%，感染后為78.5%基本上沒有變化。這些數(shù)據(jù)切實(shí)有效的說明了銀納米材料對于豬傳染性胃腸炎病毒有極強(qiáng)的抑制作用。

3 結(jié)語

綜上所述，病毒與細(xì)菌在經(jīng)過長時間的繁殖與進(jìn)化之后，其適應(yīng)力與耐受程度都會獲得提升，這在一定程度上提醒著人們需要進(jìn)行更多抗病毒的研究，對更多的抗病毒材料進(jìn)行研究與分析。在本次的實(shí)驗(yàn)中可以發(fā)現(xiàn)銀納米材料作為一種治療疾病的新材料，在抑制豬傳染性胃腸炎病毒上有著顯著的效果，值得廣泛的使用與推廣。

[1] 楊巍，李廣興，孟凡丹，等.流行性病毒[J].東北農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報，2013，22（41）：52-53.

[2] 肖文.豬傳染性胃腸炎病毒[J].中國農(nóng)業(yè)大學(xué)，2011，70（12）：271-272.

[3] 王樹成.豬傳染性胃腸炎病毒在細(xì)胞上增殖的研究[J].中國畜禽傳染病，2012，13（22）：56-57.

[4] 智光，王玉.豬傳染性胃腸炎病毒分子生物學(xué)研究新進(jìn)展[J].北京畜牧獸醫(yī)，2014，52（32）：58-59.

[5] 尕藏吉.豬傳染性胃腸炎的診斷及防治[J].湖北畜牧獸醫(yī)，2013，34（52）：30-32.