陳良鳳，張 穎，王仲奇，邸 曼，鄭福利，王 建

(1.第四軍醫(yī)大學(xué)西京醫(yī)院婦產(chǎn)科，陜西 西安 710032；2.安康市中心醫(yī)院婦產(chǎn)科，陜西 安康 725000；3.解放軍第三二三醫(yī)院婦產(chǎn)科，陜西 西安 710054；4.陜西中醫(yī)學(xué)院第二附屬醫(yī)院婦產(chǎn)科，陜西 咸陽(yáng) 712000)

GSK3β、p-GSK3βser9、p-GSK3βTyr216在宮頸癌組織中的表達(dá)及臨床意義

陳良鳳1，2，張 穎1，3，王仲奇2，邸 曼1，鄭福利4，王 建1

(1.第四軍醫(yī)大學(xué)西京醫(yī)院婦產(chǎn)科，陜西 西安 710032；2.安康市中心醫(yī)院婦產(chǎn)科，陜西 安康 725000；3.解放軍第三二三醫(yī)院婦產(chǎn)科，陜西 西安 710054；4.陜西中醫(yī)學(xué)院第二附屬醫(yī)院婦產(chǎn)科，陜西 咸陽(yáng) 712000)

目的 檢測(cè)糖原合成酶激酶3β(GSK3β)、p-GSK3βser9和p-GSK3βTyr216表達(dá)水平在宮頸癌組織中的表達(dá)情況及其與臨床病理因素的相關(guān)性。方法 收集2012年1月至2014年12月間第四軍醫(yī)大學(xué)西京醫(yī)院婦產(chǎn)科收治的宮頸鱗癌病理標(biāo)本80例，采用免疫組化SP法對(duì)宮頸癌組織中GSK3β、p-GSK3βser9和p-GSK3βTyr216表達(dá)水平進(jìn)行檢測(cè)，并分析GSK3β、p-GSK3βser9和p-GSK3βTyr216表達(dá)與臨床病理因素之間關(guān)系。結(jié)果 宮頸癌組織中GSK3β、p-GSK3βser9和p-GSK3βTyr216表達(dá)陽(yáng)性率分別為18.8%、68.8%和12.5%。早期宮頸癌患者中GSK3β和p-GSK3βTyr216表達(dá)顯著高于中晚期宮頸癌患者(25.5% vs. 4.0%，χ2=5.193，P=0.029；76.4% vs 52.0%，χ2=4.749，P=0.039)，早期宮頸癌患者中p-GSK3βser9表達(dá)顯著低于中晚期宮頸癌患者(5.5% vs. 28.0%，χ2=7.988，P=0.009)。在宮頸癌組織中隨著細(xì)胞學(xué)分級(jí)的降低，p-GSK3βser9陽(yáng)性率也隨之升高(7.4%、7.9%和33.3%，χ2=7.329，P=0.031)。淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陽(yáng)性的宮頸癌患者中GSK3β和p-GSK3βTyr216表達(dá)均顯著低于淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陰性的宮頸癌患者(5.9% vs. 28.3%，χ2=6.427，P=0.018；52.9% vs. 80.4%，χ2=6.878，P=0.014)，p-GSK3βser9在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陽(yáng)性的宮頸癌患者中表達(dá)顯著高于淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陰性的宮頸癌患者(23.5% vs. 4.3%，χ2=6.577，P=0.015)。結(jié)論 宮頸癌組織中GSK3β、p-GSK3βser9和p-GSK3βTyr216表達(dá)與宮頸癌臨床分期、細(xì)胞學(xué)分級(jí)和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)，提示GSK3β基因可能在宮頸癌組織發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮重要作用。

宮頸；腫瘤；糖原合成酶激酶3β；免疫組織化學(xué)

宮頸癌是常見的婦科惡性腫瘤，我國(guó)作為發(fā)展中國(guó)家，宮頸癌發(fā)病率高居世界第2位，近年來(lái)宮頸癌粗發(fā)病率以平均每年8.7%的速度呈逐年上升趨勢(shì)，發(fā)病年輕化趨勢(shì)明顯[1-2]。由此可見，我國(guó)宮頸癌造成的疾病負(fù)擔(dān)和經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)日益嚴(yán)重，防治形勢(shì)十分嚴(yán)峻。目前宮頸癌的具體發(fā)病機(jī)制仍不清楚，尋找宮頸癌發(fā)生發(fā)展中的關(guān)鍵基因一直以來(lái)都是研究熱點(diǎn)。糖原合成酶激酶3β(glycogen synthase kinase 3β，GSK3β)是絲氨酸/蘇氨酸家族激酶GSK3的兩個(gè)亞型之一，編碼433個(gè)氨基酸，包括3個(gè)結(jié)構(gòu)域，可通過(guò)參與Wnt、Akt、Hedgehoog等多種信號(hào)通路，對(duì)細(xì)胞周期、細(xì)胞凋亡、細(xì)胞侵襲/轉(zhuǎn)移、糖代謝、血管生成等多個(gè)重要生物學(xué)活動(dòng)進(jìn)行調(diào)控[3-4]。GSK3β生物學(xué)功能強(qiáng)大，被公認(rèn)是信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路中決定細(xì)胞命運(yùn)的關(guān)鍵激酶，一直以來(lái)都是腫瘤領(lǐng)域的研究熱點(diǎn)。磷酸化位點(diǎn)活化是GSK3β活性調(diào)控的主要方式之一。GSK3β基因的ser9位點(diǎn)磷酸化可使GSK3β功能失活，Tyr216位點(diǎn)磷酸化則可激活GSK3β的功能。本研究中利用免疫組化探討宮頸病變及宮頸癌組織中的GSK3β表達(dá)情況及其磷酸化水平，對(duì)于深入理解GSK3β在宮頸癌的發(fā)生發(fā)展中所扮演角色具有重要意義。

1 材料與方法

1.1 材料

收集2012年1月至2014年12月間第四軍醫(yī)大學(xué)西京醫(yī)院婦產(chǎn)科收治的宮頸鱗癌病理標(biāo)本80例。病例納入標(biāo)準(zhǔn)為：①初次診治宮頸鱗癌患者，術(shù)前未經(jīng)任何治療；②經(jīng)組織病理學(xué)明確診斷為宮頸鱗癌；③臨床資料完整。所有病例病理切片均經(jīng)過(guò)常規(guī)光鏡觀察，重新復(fù)核診斷。詳細(xì)記錄宮頸癌患者的癥狀體征、病理類型、細(xì)胞學(xué)分級(jí)、臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及宮旁浸潤(rùn)情況、術(shù)后治療及隨訪等臨床資料并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。

1.2 免疫組化方法

采用鏈霉素抗生物素蛋白-過(guò)氧化酶免疫組化法(Streptavdin-Peroxidase，SP)對(duì)宮頸癌組織中GSK3β、p-GSK3βser9和p-GSK3βTyr216進(jìn)行檢測(cè)。小鼠抗人GSK3β、p-GSK3βser9、p-GSK3βTyr216單克隆抗體購(gòu)自美國(guó)CST公司，SP免疫組化試劑盒、DAB顯色劑購(gòu)自北京中杉金橋公司。將組織蠟塊連續(xù)切片為4μm，60℃烤箱加熱烤片，常規(guī)二甲苯脫蠟，梯度酒精至水化，按照說(shuō)明書常規(guī)進(jìn)行SP法免疫組化，GSK3β、GSK3βser9、GSK3βTyr216單克隆抗體使用濃度均為1:1 000，抗小鼠二抗使用濃度為1:200。采用PBS代替一抗作為陰性對(duì)照。

1.3 免疫組化結(jié)果判讀

免疫組化結(jié)果由兩位經(jīng)驗(yàn)豐富的病理科醫(yī)生在不清楚患者臨床資料的情況下分別獨(dú)立完成判讀。隨機(jī)選擇5個(gè)視野，顯微鏡下細(xì)胞中出現(xiàn)棕黃色或棕褐色顆粒為表達(dá)陽(yáng)性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

依據(jù)患者臨床病理因素對(duì)照GSK3β、p-GSK3βser9和p-GSK3βTyr216染色結(jié)果，采用SPSS 17.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，分組資料之間比較采用χ2檢驗(yàn)，P<0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 宮頸癌患者一般臨床情況

收集第四軍醫(yī)大學(xué)西京醫(yī)院婦產(chǎn)科收治術(shù)前未接受任何治療的宮頸鱗癌初治患者80例，患者年齡33～56歲，平均46.28±9.51歲。臨床分期：早期55例，晚期25例；按細(xì)胞學(xué)分級(jí)分為：高分化27例，中分化38例，低分化15例。在80例宮頸癌患者中，發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移34例，宮旁浸潤(rùn)5例。

2.2 糖原合成酶激酶3β及其磷酸化蛋白在宮頸癌組織中的表達(dá)情況

宮頸癌組織中GSK3β為胞漿表達(dá)，陽(yáng)性率為18.8%(15/80)，p-GSK3βser9主要為胞漿和胞核共表達(dá)，陽(yáng)性率為12.5%(10/80)，p-GSK3βTyr216主要為胞漿表達(dá)，也可見胞漿胞核共表達(dá)，陽(yáng)性率為68.8%(55/80)，見圖1。

注：A為宮頸癌組織中GSK3β呈胞漿表達(dá)；B為宮頸癌組織中p-GSK3βser9呈核漿共表達(dá)；C為宮頸癌組織中p-GSK3βTyr216呈核漿共表達(dá)。

圖1 宮頸癌組織中GSK3β、p-GSK3βser9和p-GSK3βTyr216的表達(dá)(SP×100)

Fig.1 Expressions of GSK3β, p-GSK3βser9and p-GSK3βTyr216in cervical carcinoma tissues (SP×100)

2.3 糖原合成酶激酶3β及其磷酸化蛋白表達(dá)與宮頸癌臨床病理因素的關(guān)系

對(duì)宮頸癌中GSK3β、p-GSK3βser9和p-GSK3βTyr216表達(dá)情況與宮頸癌臨床病理因素的相關(guān)性進(jìn)行分析，結(jié)果表明GSK3β和p-GSK3βTyr216在早期(Ⅰ+Ⅱ)宮頸癌患者中表達(dá)均顯著高于中晚期(Ⅲ+Ⅳ)宮頸癌患者(25.5% vs. 4.0%，χ2=5.193，P=0.029；76.4% vs. 52.0%，χ2=4.749，P=0.039)，p-GSK3βser9在早期(Ⅰ+Ⅱ)宮頸癌患者中表達(dá)顯著低于中晚期(Ⅲ+Ⅳ)宮頸癌患者(5.5% vs. 28.0%，χ2=7.988，P=0.009)。p-GSK3βser9在高分化、中分化、低分化宮頸癌組織中表達(dá)陽(yáng)性率分別為7.4%，7.9%和33.3%，隨著細(xì)胞學(xué)分級(jí)降低，p-GSK3βser9陽(yáng)性率也隨之升高(χ2=7.329，P=0.031)，而GSK3β和p-GSK3βTyr216陽(yáng)性率在不同細(xì)胞學(xué)分級(jí)宮頸癌患者中差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P>0.05)。GSK3β和p-GSK3βTyr216在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陽(yáng)性的宮頸癌患者中表達(dá)均顯著低于淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陰性的宮頸癌患者5.9% vs. 28.3%，χ2=6.427，P=0.018；52.9% vs. 80.4%，χ2=6.878，P=0.014)，p-GSK3βser9在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陽(yáng)性的宮頸癌患者中表達(dá)顯著高于淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陰性的宮頸癌患者(23.5% vs. 4.3%，χ2=6.577，P=0.015)。此外GSK3β、p-GSK3βser9和p-GSK3βTyr216表達(dá)在發(fā)生宮旁浸潤(rùn)的宮頸癌患者和未發(fā)生宮旁浸潤(rùn)的宮頸癌患者之間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P>0.05)。

3 討論

宮頸癌是嚴(yán)重威脅女性健康的惡性腫瘤之一，我國(guó)是宮頸癌高發(fā)地區(qū)，據(jù)報(bào)道，目前我國(guó)宮頸癌發(fā)病率以平均每年14.4%～22.5%的速度遞增，宮頸癌的防治形勢(shì)日益嚴(yán)峻[1]。通過(guò)對(duì)宮頸癌發(fā)生發(fā)展中的關(guān)鍵基因及信號(hào)通路的探索研究將有助于宮頸癌癌前病變的早期發(fā)現(xiàn)和治療，具有重要的臨床意義。

3.1 糖原合成酶激酶3β在腫瘤組織中作用具有組織特異性

GSK3β屬于絲氨酸/蘇氨酸類激酶，生物學(xué)功能復(fù)雜，在腫瘤細(xì)胞的細(xì)胞分化、細(xì)胞周期、細(xì)胞凋亡、侵襲/轉(zhuǎn)移、轉(zhuǎn)錄因子調(diào)控等方面發(fā)揮重要作用[3-5]。GSK3β在腫瘤發(fā)生發(fā)展中的作用具有較大爭(zhēng)議，主要原因?yàn)镚SK3β具有組織特異性?，F(xiàn)已證實(shí)前列腺癌、膀胱癌、胰腺癌、卵巢癌等多種腫瘤組織中GSK3β表達(dá)增高[6-7]，過(guò)表達(dá)激活型GSK3β可促進(jìn)cyclinD1等細(xì)胞周期相關(guān)基因表達(dá)增加，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞增殖和存活；而抑制GSK3β活性可顯著抑制腫瘤細(xì)胞增殖，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞死亡[8-9]。但是也有一些研究表明，在口腔癌、食管癌、鼻咽癌等腫瘤組織中出現(xiàn)GSK3β失活即p-GSK3βser9表達(dá)增加，提示GSK3β對(duì)于某些腫瘤具有抑癌作用[10-11]。由于GSK3β對(duì)于不同的腫瘤具有組織特異性，因此探索不同類型腫瘤組織中GSK3β及其磷酸化水平對(duì)于深入理解GSK3β在腫瘤發(fā)生發(fā)展中的作用機(jī)制具有重大意義。目前宮頸癌組織中GSK3β及其磷酸化水平的研究尚未見報(bào)道。

3.2 宮頸癌組織中糖原合成酶激酶3β及其磷酸化蛋白表達(dá)與臨床分期、細(xì)胞學(xué)分級(jí)和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)

本研究用免疫組化對(duì)80例宮頸癌組織中GSK3β、p-GSK3βser9和p-GSK3βTyr216表達(dá)進(jìn)行了檢測(cè)，結(jié)果顯示宮頸癌組織中GSK3β陽(yáng)性率僅為18.8%。對(duì)GSK3β、p-GSK3βser9(GSK3β失活)和p-GSK3βTyr216(GSK3β激活)表達(dá)與宮頸癌臨床病理因素的關(guān)系進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，結(jié)果表明GSK3β和p-GSK3βTyr216陽(yáng)性率在早期宮頸癌組織中顯著高于晚期宮頸癌組織，而p-GSK3βser9陽(yáng)性率在早期宮頸癌組織中顯著低于晚期宮頸癌組織(均P<0.05)。此外，GSK3β和p-GSK3βTyr216在宮頸癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陽(yáng)性的腫瘤組織中表達(dá)陽(yáng)性率顯著低于淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陰性的腫瘤組織，而p-GSK3βser9在宮頸癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陽(yáng)性的腫瘤組織中表達(dá)陽(yáng)性率顯著高于淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陰性的腫瘤組織(均P<0.05)。上述結(jié)果表明，在宮頸癌發(fā)展過(guò)程中GSK3β蛋白表達(dá)及活性逐漸降低，提示GSK3β可能在宮頸癌組織中為抑癌基因。值得注意的是，隨著細(xì)胞學(xué)分級(jí)降低，p-GSK3βser9陽(yáng)性率也隨之升高，而GSK3β和p-GSK3βTyr216陽(yáng)性率在不同細(xì)胞學(xué)分級(jí)宮頸癌患者中差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P>0.05)。這一結(jié)果提示GSK3β活性降低促進(jìn)了宮頸癌的惡性轉(zhuǎn)化。有研究表明，GSK3β磷酸化失活可激活Wnt信號(hào)通路，通過(guò)維持β-catenin的穩(wěn)定促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的惡性轉(zhuǎn)化[12-13]。

綜上所述，在宮頸癌發(fā)展過(guò)程中GSK3β蛋白表達(dá)及活性逐漸降低，提示GSK3β基因可能在宮頸癌組織中為抑癌基因，但GSK3β基因及其磷酸化水平在宮頸癌發(fā)生發(fā)展中的具體機(jī)制還有待進(jìn)一步深入研究探討。

[1]胡尚英,鄭榮壽,趙方輝,等.1989至2008年中國(guó)女性子宮頸癌發(fā)病和死亡趨勢(shì)分析[J].中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院學(xué)報(bào),2014,36(2):119-125.

[2]Rattanalappaiboon D, Kietpeerakool C, Kleebkaow P,etal.Factors affecting compliance in the first year of postcolposcopy surveillance among women with a high incidence of cervical cancer[J].International Journal of Gynaecology and Obstetrics:the Official Organ of the International Federation of Gynaecology and Obstetrics,2014,124(2):160-163.

[3]Luo J.Glycogen synthase kinase 3beta(GSK3beta) in tumorigenesis and cancer chemotherapy[J].Cancer Letters,2009,273(2):194-200.

[4]Shimura T.Acquired radioresistance of cancer and the AKT/GSK3beta/cyclin D1 overexpression cycle[J].Journal of Radiation Research,2011,52(5):539-544.

[5]Zeng J, LiuD, Qiu Z,etal.GSK3beta overexpression indicates poor prognosis and its inhibition reduces cell proliferation and survival of non-small cell lung cancer cells[J].PLoS One,2014,9(3):e91231.

[6]Li R, Erdamar S, Dai H,etal.Cytoplasmic accumulation of glycogen synthase kinase-3beta is associated with aggressive clinicopathological features in human prostate cancer[J].Anticancer Research,2009,29(6):2077-2081.

[7]Naito S, Bilim V, Yuuki K,etal.Glycogen synthase kinase-3beta:a prognostic marker and a potential therapeutic target in human bladder cancer[J].Clinical Cancer Research,2010,16(21):5124-5132.

[8]Schutz S V, Cronauer M V, Rinnab L.Inhibition of glycogen synthase kinase-3beta promotes nuclear export of the androgen receptor through a CRM1-dependent mechanism in prostate cancer cell lines[J].Journal of Cellular Biochemistry,2010,109(6):1192-1200.

[9]Schutz S V, Schrader A J, Zengerling F,etal.Inhibition of glycogen synthase kinase-3beta counteracts ligand-independent activity of the androgen receptor in castration resistant prostate cancer[J].PLoS One,2011,6(9):e25341.

[10]Suzuki M, Shinohara F, Endo M,etal.Zebularine suppresses the apoptotic potential of 5-fluorouracil via cAMP/PKA/CREB pathway against human oral squamous cell carcinoma cells[J].Cancer Chemotherapy and Pharmacology,2009,64(2):223-232.

[11]Paccez J D, Duncan K, Vava A,etal.Inactivation of GSK3beta and activation of NF-kappaB pathway via Axl represents an important mediator of tumorigenesis in esophageal squamous cell carcinoma[J].Molecular Biology of the Cell,2015,26(5):821-831.

[12]Rath G, Jawanjal P, Salhan S,etal.Clinical significance of inactivated glycogen synthase kinase 3β in HPV-associated cervical cancer: Relationship with Wnt/β-catenin pathway activation[J].American Journal of Reproductive Immunology,2015,73(5):460-478.

[13]Wang S, Bao Z, Liang Q M,etal. Octreotide stimulates somatostatin receptor-induced apoptosis of SW480 colon cancer cells by activation of glycogen synthase kinase-3β, A Wnt/β-catenin pathway modulator [J].Hepato-gastroenterology,2013,60(127):1639-1646.

[專業(yè)責(zé)任編輯：張忠明]

Expression and clinical significance of GSK3β, p-GSK3βser9and p-GSK3βTyr216in cervical carcinoma

CHEN Liang-feng1,2, ZHANG Ying1,3, WANG Zhong-qi2, DI Man1, ZHENG Fu-li4, WANG Jian1

(1.DepartmentofGynecologyandObstetrics,XijingHospital,FourthMilitaryMedicalUniversity,ShaanxiXi’an710032,China;2.DepartmentofGynecologyandObstetrics,AnkangCityCentralHospital,ShaanxiAnkang725000,China;3.DepartmentofGynecologyandObstetrics,PLA323Hospital,ShaanxiXi’an710054,China;4.DepartmentofGynecologyandObstetrics,SecondAffiliatedHospital,ShaanxiCollegeofTraditionalChineseMedicine,ShaanxiXianyang712000,China)

Objective To investigate the expressions of glycogen synthase kinase 3β (GSK3β), p-GSK3βser9and p-GSK3βTyr216in cervical carcinoma and their correlation with clinical pathological factors. Methods By using immunohistochemistry, GSK3β, p-GSK3βser9and p-GSK3βTyr216protein expressions were detected in 80 cases of cervical carcinoma admitted in Xijing Hospital of Fourth Military Medical University during January 2012 to December 2014. The correlations between expressions of GSK3β, p-GSK3βser9and p-GSK3βTyr216and clinicopathological factors were analyzed. Results The positive expression rates of GSK3β, p-GSK3βser9and p-GSK3βTyr216in cervical carcinoma were 18.8%, 68.8% and 12.5%, respectively. The expressions of GSK3β and p-GSK3βTyr216in early stage group were significantly higher than those in advanced stage group (25.5% vs 4.0%,χ2=5.193,P=0.029; 76.4% vs 52.0%,χ2=4.749,P=0.039), but the expression rate of p-GSK3βser9was obviously lower (5.5% vs 28.0%,χ2=7.988,P=0.009). The positive expression rates of p-GSK3βser9in well and moderately differentiated tumors were lower than those in poorly differentiated tumors (7.4%, 7.9% and 33.3%,χ2=7.329,P=0.031). The expressions of GSK3β and p-GSK3βTyr216were significantly lower in patients with positive lymph node metastasis than in those with negative lymph node status (5.9% vs 28.3%,χ2=6.427,P=0.018; 52.9% vs 80.4%,χ2=6.878,P=0.014), but the expression of p-GSK3βser9was higher in patients with lymph node metastases (23.5% vs 4.3%,χ2=6.577,P=0.015). Conclusion The expressions of GSK3β, p-GSK3βser9and p-GSK3βTyr216in cervical carcinoma are correlated with clinical TNM staging, histological grades and lymph node metastases, which suggests that GSK3β may play a potential role in cervical tumor genesis.

cervix; carcinoma; glycogen synthase kinase 3β(GSK3β); immunohistochemistry

2015-06-17

國(guó)家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(編號(hào)：81172458)；國(guó)家自然科學(xué)基金青年基金資助項(xiàng)目(編號(hào)：81302243)

陳良鳳(1981-)，女，陜西省安康市中心醫(yī)院婦產(chǎn)科主治醫(yī)生，現(xiàn)為第四軍醫(yī)大學(xué)西京醫(yī)院婦產(chǎn)科在讀研究生，主要從事婦科腫瘤的研究。

王 建，教授，第四軍醫(yī)大學(xué)西京醫(yī)院婦產(chǎn)科主任醫(yī)師。

10.3969/j.issn.1673-5293.2015.05.009

R737.33

A

1673-5293(2015)05-0934-04