帕提古麗·托乎提

（新疆巴州動(dòng)物疾病控制與診斷中心，新疆庫(kù)爾勒 841000）

新疆巴州地區(qū)生鮮牛乳中β﹣內(nèi)酰胺酶殘留狀況調(diào)查

帕提古麗·托乎提

（新疆巴州動(dòng)物疾病控制與診斷中心，新疆庫(kù)爾勒 841000）

為了解巴州地區(qū)的生鮮牛乳中β-內(nèi)酰胺酶（解抗劑）殘留狀況，保證生鮮牛奶衛(wèi)生質(zhì)量安全，2014年4月至10月，在巴州轄區(qū)內(nèi)16個(gè)生鮮乳收購(gòu)站、5個(gè)規(guī)?；膛ｐB(yǎng)殖小區(qū)、8個(gè)機(jī)械化擠奶廳、12個(gè)生鮮乳運(yùn)輸車(chē)輛和庫(kù)爾勒市城郊周邊的29個(gè)散生鮮乳銷(xiāo)售點(diǎn)的范圍內(nèi)抽取了54份生鮮乳混合樣品，采用SNAP快速檢測(cè)試劑盒進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果檢測(cè)出β-內(nèi)酰胺酶陽(yáng)性的樣品2份，樣品陽(yáng)性率為3.7%。這說(shuō)明仍需要加強(qiáng)對(duì)奶牛飼料和投入品的監(jiān)督管理。此外，經(jīng)實(shí)際測(cè)試，SNAP檢測(cè)試劑盒具有攜帶方便、檢測(cè)快速的特點(diǎn)，適用于奶站、乳制品企業(yè)、畜產(chǎn)品安檢等部門(mén)對(duì)大批量奶樣的檢測(cè)。

生鮮牛乳；β-內(nèi)酰胺酶；解抗劑；SNAP檢測(cè)試劑盒

1 牛乳中的β﹣內(nèi)酰胺酶（解抗劑）的來(lái)源

β-內(nèi)酰胺酶是一種抗生素分解劑，可水解β-內(nèi)酰胺類(lèi)抗生素。目前，在奶牛養(yǎng)殖業(yè)中，抗生素常被用來(lái)治療奶牛各種感染性疾病，有時(shí)養(yǎng)殖戶(hù)對(duì)患乳房炎的牛用抗生素直接注射乳房部位進(jìn)行治療，或在飼料中添加大劑量抗生素。青霉素作為β- 內(nèi)酰胺類(lèi)藥物，是治療牛乳腺炎的首選藥物，是牛奶中最常見(jiàn)的殘留抗生素。

由于國(guó)內(nèi)多數(shù)乳品企業(yè)對(duì)抗生素殘留超標(biāo)的牛乳采取降價(jià)收購(gòu)的原則，出于經(jīng)濟(jì)利益的驅(qū)動(dòng)，一些不法奶站使用β-內(nèi)酰胺酶來(lái)降解牛乳中殘留的抗生素，生產(chǎn)人造“無(wú)抗奶”，致使抗生素酶解后的殘留物進(jìn)入乳制品，對(duì)人體健康造成傷害，同時(shí)也可能造成病菌的耐藥。

2009年2月，衛(wèi)生部等九部門(mén)組成的全國(guó)打擊違法添加非食用物質(zhì)和濫用食品添加劑專(zhuān)項(xiàng)整治領(lǐng)導(dǎo)小組在公布的《食品中可能違法添加的非食用物質(zhì)名單（第二批）》中，將β-內(nèi)酰胺酶列入乳與乳制品掩蔽抗生素的違法添加的非食用物質(zhì)，規(guī)定嚴(yán)厲禁止添加于食品中，并要求各相關(guān)部門(mén)嚴(yán)格檢測(cè)。

2 檢測(cè)原理

在奶樣中添加一定量的β-內(nèi)酰胺抗生素，采用免疫層析技術(shù)，在一定溫度下，經(jīng)一定時(shí)間的反應(yīng)。如果樣品中含有β-內(nèi)酰胺酶，那么奶樣中的抗生素會(huì)被β-內(nèi)酰胺酶催化分解，造成抗生素消失或濃度降低。再采用SNAP抗生素快速檢測(cè)試紙盒配備專(zhuān)用β-內(nèi)酰胺酶西林瓶試劑快速檢測(cè)奶樣，如未檢出抗生素，則奶樣中含有β-內(nèi)酰胺酶；如檢出抗生素，則奶樣中不含β-內(nèi)酰胺酶（基于本法檢出限）。利用β-內(nèi)酰胺酶可分解奶及奶制品中的β-內(nèi)酰胺類(lèi)抗生素的原理，通過(guò)測(cè)定β-內(nèi)酰胺酶降解后的β-內(nèi)酰胺類(lèi)抗生素的殘留量，定性判定奶及奶制品中有無(wú)β-內(nèi)酰胺酶。

3 材料

3.1 儀器和試劑

美國(guó)安普生化科技有限公司生產(chǎn)的（45±5）℃專(zhuān)用SNAP配套加熱器、SNAP讀數(shù)儀、SNAP抗生素快速檢測(cè)試劑盒、SNAP試劑盒專(zhuān)用β-內(nèi)酰胺酶西林瓶、1mL移液器。

3.2 檢測(cè)基質(zhì)

新鮮混合牛奶樣品。

3.3 樣品的采集

2014年4月至10月，在巴州轄區(qū)內(nèi)16個(gè)生鮮乳收購(gòu)站、5個(gè)規(guī)?；膛ｐB(yǎng)殖小區(qū)、8個(gè)機(jī)械化擠奶廳、12個(gè)生鮮乳運(yùn)輸車(chē)輛和庫(kù)爾勒市城郊周邊的29個(gè)散生鮮乳銷(xiāo)售點(diǎn)范圍內(nèi)共抽54份生鮮乳混合樣品，按規(guī)定進(jìn)行冷藏保存運(yùn)輸，送巴州動(dòng)物疾病控制與診斷中心畜產(chǎn)品實(shí)驗(yàn)室，當(dāng)天采用SNAP快速檢測(cè)試劑盒進(jìn)行β-內(nèi)酰胺酶殘留檢測(cè)。

4 檢測(cè)方法

4.1 取出適量SNAP抗生素快速檢測(cè)試紙盒鋁箔袋和裝有β-內(nèi)酰胺酶試劑的西林瓶，待其恢復(fù)至室溫（25±2）℃。打開(kāi)SNAP快速檢測(cè)溫育器，設(shè)置溫度為（45±5）℃，溫度穩(wěn)定后待用；待西林瓶溫度恢復(fù)到正常室溫后，打開(kāi)西林瓶，將牛奶樣品搖勻后慢慢吸取3mL加入到裝有β-內(nèi)酰胺酶試劑西林瓶中，搖晃西林瓶使試劑溶解。將含有試劑和奶樣的西林瓶放置到預(yù)熱的SNAP加熱器的加熱板上，確保溫度在（45±5）℃，保持30 min；孵育完成后，將西林瓶放入0～8℃的冰箱中冷藏至少6 min；打開(kāi)SNAP抗生素快速檢測(cè)試劑盒鋁箔袋，從鋁箔袋中取出試劑盒，置于桌面上。從冰箱中取出奶樣，用移液器吸?。?50±50）μL加入到內(nèi)含藍(lán)色顆粒的樣品管中，充分振蕩；將樣品管中的樣品倒入SNAP抗生素快速檢測(cè)試劑盒的樣品孔，樣品流過(guò)結(jié)果顯示窗并流向藍(lán)色激活環(huán)。

4.2 當(dāng)樣品流動(dòng)到試劑盒上的藍(lán)色激活環(huán)，但藍(lán)色激活環(huán)尚未完全消失時(shí)，立即將試劑盒上的按鍵按至底部，直至激活鍵與SNAP試劑盒保持齊平。

4.3 激活6分鐘后，用專(zhuān)門(mén)SNAP試劑盒快速讀數(shù)儀讀取結(jié)果，在1分鐘內(nèi)判定結(jié)果。

4.4 結(jié)果判讀。SNAP讀數(shù)儀判定：讀數(shù)儀讀數(shù)＞1.05為陰性；讀數(shù)儀讀數(shù)≤1.05為陽(yáng)性；

讀數(shù)儀陰性，判定β-內(nèi)酰胺酶陽(yáng)性；讀數(shù)儀陽(yáng)性，判定β-內(nèi)酰胺酶陰性。

4.5 目測(cè)判定。樣品點(diǎn)比對(duì)照點(diǎn)的顏色淺：β-內(nèi)酰胺酶陰性；樣品點(diǎn)比對(duì)照點(diǎn)的顏色深或相同：β-內(nèi)酰胺酶陽(yáng)性；如果對(duì)照點(diǎn)未顯色，重新檢測(cè)樣品。

5 檢測(cè)結(jié)果

在54份混合生鮮乳樣品中檢測(cè)出β-內(nèi)酰胺酶陰性樣品52份，陽(yáng)性樣品2份，生鮮乳樣品的β-內(nèi)酰胺酶陽(yáng)性率為3.7%。

6 結(jié)論

6.1 從2014年抽的54份生鮮乳混合樣品中檢測(cè)出2份β-內(nèi)酰胺酶陽(yáng)性樣品，說(shuō)明必須加強(qiáng)對(duì)巴州轄區(qū)內(nèi)的奶站、養(yǎng)殖小區(qū)、機(jī)械化擠奶廳、生鮮乳運(yùn)輸車(chē)輛和牛奶散售點(diǎn)的生鮮乳檢測(cè)力度，以及奶牛養(yǎng)殖業(yè)中奶牛飼料和投入品的監(jiān)督管理，杜絕在這些環(huán)節(jié)的生鮮牛乳中違法添加違規(guī)藥品和違禁物品。

6.2 SNAP檢測(cè)試劑盒便于攜帶且裝置完備，對(duì)奶站、奶牛養(yǎng)殖小區(qū)、奶糟、奶缸、運(yùn)輸車(chē)輛、零售點(diǎn)的生鮮牛奶，均可立即檢測(cè)。SNAP檢測(cè)試劑盒能夠在10分鐘內(nèi)提供結(jié)果，無(wú)需測(cè)量試劑，是大批量檢測(cè)的理想選擇。SNAP檢測(cè)試劑盒可適用于奶站、乳制品企業(yè)、畜產(chǎn)品安檢部門(mén)。

Investigation of β-Lactamase Residue in Fresh Milk in Bazhou，Xinjiang

Patiguli·Tuohuti
（Bazhou Animal Disease Control and Diagnostic Center，Kurle，Xinjiang 841000）

In order to understand the β-lactamase（solution antagonist）residuein fresh milk in Bazhou，Xinjiang，and to ensure the fresh milk safety，54 milk composite samples were collected from the 16 fresh milk collecting stations、5 scale dairy farming districts，8 mechanized milking halls，12 fresh milk transportation vehicles and 29 bulk milk sales points around Korla suburbs from April to October 2014 for detection of β-lactamase residue with rapid SNAP detection kit.The results showed that 2 samples were β-lactamase positive in 54 samples with a positive rate of 3.7%，suggesting that the supervision and management of dairy cattle feed and inputs need to be strengthened.

fresh milk；β-lactamase；solution antagonist；SNAP detection kit

S851.2

B

1005-944X（2015）10-0019-02

[1]高延玲，劉宏偉，班付國(guó)，等. 生鮮奶中β-內(nèi)酰胺酶殘留情況調(diào)查及來(lái)源分析[J]. 上海畜牧獸醫(yī)，2010，（6）：20-21.

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朱迪國(guó)）