張麗麗李大偉*

（1 吉林省吉林市船營區(qū)青島街道社區(qū)衛(wèi)生服務(wù)中心，吉林 吉林 132011；2 吉林省北華大學(xué)附屬醫(yī)院，吉林 吉林 132001）

磷酸肌酸鈉對阿霉素所致大鼠心肌損傷的保護(hù)作用

張麗麗1李大偉2*

（1 吉林省吉林市船營區(qū)青島街道社區(qū)衛(wèi)生服務(wù)中心，吉林 吉林 132011；2 吉林省北華大學(xué)附屬醫(yī)院，吉林 吉林 132001）

磷酸肌酸鈉；阿霉素；心肌損傷；保護(hù)

阿霉素（adriamycin，ADR）是目前廣泛應(yīng)用于臨床抗腫瘤治療中，屬于廣譜高效蒽環(huán)類抗腫瘤藥物，對多種常見腫瘤均有確切的治療作用，對各種生長周期的腫瘤細(xì)胞均有殺滅作用，但其不良反應(yīng)也制約的該藥的臨床使用，尤其是對心臟毒性，阿霉素與心肌組織的親和力明顯高于其他組織，故其對心肌細(xì)胞具有嚴(yán)重的心臟毒性并呈劑量依賴性，多出現(xiàn)于長期使用阿霉素者，這種慢性毒性作用主要是與阿霉素在體內(nèi)累積劑量有關(guān)，導(dǎo)致擴(kuò)張性心肌病和充血性心力衰竭及出現(xiàn)各種心律失常，嚴(yán)重者導(dǎo)致心源性猝死，以上不良反應(yīng)常規(guī)藥物治療效果不理想，預(yù)后很差。磷酸肌酸是人體所有細(xì)胞代謝期間最重要的能量供應(yīng)源，臨床上將磷酸肌酸作為心肌保護(hù)劑，已經(jīng)廣泛應(yīng)用于治療心肌梗死及心力衰竭。磷酸肌酸分子中所含有的高能磷酸鍵可以為心肌細(xì)胞提供能量，防止其產(chǎn)生氧自由基。心肌細(xì)胞縫隙連接（gap junction，GJ）是由相鄰心肌細(xì)胞膜之間的連接蛋間低電阻通道，決定了心肌細(xì)胞間電傳導(dǎo)和傳導(dǎo)速度。組成心室心肌細(xì)胞間隙連接通道主要由連接蛋白43（conexin 43）構(gòu)成的，連接蛋白43是心室縫隙連接的主要構(gòu)成成分，是心臟中表達(dá)最豐富的連接蛋白，其分布及功能的改變對于縫隙連接的活性有著非常重要的影響[1]。本研究通過觀察外源性磷酸肌酸鈉阿霉素所致的大鼠心肌連接蛋白43的保護(hù)作用，分析其可能的保護(hù)機(jī)制。

1　材料與方法

1.1試驗(yàn)動(dòng)物：SPF級雄性SD大鼠，由吉林大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，體質(zhì)量在180～200 g，共計(jì)60只大鼠，適應(yīng)性喂養(yǎng)后隨機(jī)分為3組，分別為阿霉素組、磷酸肌酸鈉組、正常對照組、每組大鼠均為20只。正常對照組：每2日1次于鼠尾靜脈按10 mL/kg注射生理鹽水，共10次；阿霉素組：每2日1次于鼠尾靜脈按2 mg/kg注射同容量阿霉素，共10次，磷酸肌酸鈉組：每2日1次于鼠尾靜脈按2 mg/kg注射同容量阿霉素，共10次，并從注射阿霉素第6天開始同時(shí)給予按200 mg/kg注射磷酸肌酸鈉12 d。使用合適的鼠網(wǎng)，將大鼠固定并露出鼠尾，將加壓感應(yīng)器置于大鼠尾根處合適位置，在大鼠安靜和清醒狀態(tài)下數(shù)秒后開始測量大鼠血壓，每只大鼠測量3次血壓，取記錄3次結(jié)果后把平均值作為測量結(jié)果。

1.2心肌組織病理取材及切片制作：全部大鼠給藥完成后，從各組大鼠中分別隨機(jī)選取15只活大鼠，脫頸椎處死后，沿腹中線剪開皮膚，在無菌狀態(tài)下將大鼠左肋剪開，摘除心臟后用生理鹽水沖洗干凈剪取上1/3心臟組織放入4%多聚甲醛溶液固定12 h后，行乙醇脫水、石蠟包埋、蠟塊心肌組織連續(xù)切片，厚度為5 μm，然后脫蠟、二甲苯透明處理，切片行HE常規(guī)染色，于光鏡下觀察心臟結(jié)構(gòu)改變及膠原纖維增生情況。

1.3免疫組織化學(xué)法檢測心室肌組織Cx43表達(dá)：將包埋大鼠心肌組織的石蠟塊連續(xù)切成5 μm厚的薄片，制作組織病理片，以PBS代替一抗設(shè)陰性對照，結(jié)果示陰性。分析方法：對大鼠心肌組織免疫組化染色病理切片圖片進(jìn)行分析，每張大鼠心肌組織切片均為隨機(jī)選取5個(gè)不重復(fù)的高倍視野（×400）觀察，染色結(jié)果采用 Motic Images Advanced 3.2圖像分析軟件測灰度值，灰度值與陽性表達(dá)意義呈負(fù)相關(guān)。應(yīng)用免疫沉淀技術(shù)實(shí)現(xiàn)對連接蛋白 43抗體的監(jiān)測。

1.4數(shù)據(jù)分析：應(yīng)用統(tǒng)計(jì)學(xué)分析軟件SPSS12.0軟件包進(jìn)行描述分析，所有數(shù)據(jù)均以（）表示，組間均數(shù)比較采用t檢驗(yàn)，變量間相關(guān)分析采用直線相關(guān)分析，檢驗(yàn)水準(zhǔn)為0.05，若P<0.05，則認(rèn)為組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié) 果

磷酸肌酸鈉治療組大鼠的一般狀況明顯好于阿霉素組，阿霉素組大鼠在注射阿霉素后第5天開始部分大鼠出現(xiàn)精神萎靡，活動(dòng)減少，進(jìn)而出現(xiàn)皮毛無光澤，毛蜷縮，大鼠對外來刺激反應(yīng)遲鈍，并逐漸出現(xiàn)進(jìn)食量減少，實(shí)驗(yàn)開始第8天出大鼠死亡的情況，阿霉素組共死亡3只大鼠，磷酸肌酸鈉組及治療組均無大鼠死亡。大鼠血壓測量：入選大鼠均使用softron 能無創(chuàng)血壓計(jì)BP-98A測量血壓，正常組平均動(dòng)脈壓（96±15）mm Hg，阿霉素組大鼠平均動(dòng)脈壓為（76±14）mm Hg，兩組比較差異有顯著性（P＜0.05）；磷酸肌酸鈉治療組大鼠平均動(dòng)脈壓力為（89±17）mm Hg，與阿霉素組大鼠平均動(dòng)脈壓比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.05）。

3　討 論

阿霉素進(jìn)入體內(nèi)與心肌組織的親和力明顯高于與其他組織的親和力，腫瘤患者需要長期使用阿霉素，阿霉素對心臟的毒性也是逐漸產(chǎn)生的，是慢性過程，其毒性作用主要表現(xiàn)在與累積劑量有關(guān)的擴(kuò)張性心肌病和充血性心力衰竭，其對心臟的毒性作用限制了阿霉素臨床使用。阿霉素在體內(nèi)代謝過程中產(chǎn)生大量的自由基產(chǎn)物，主要包括超氧化物歧化酶、過氧化氫酶、脂質(zhì)過氧化物等物質(zhì)，該產(chǎn)物能夠改變了心肌細(xì)胞細(xì)胞膜的通透性，導(dǎo)致心肌細(xì)胞細(xì)胞膜的脂質(zhì)過氧化，而心肌本身清除自由基的能力非常有限，這些物質(zhì)的堆積最終導(dǎo)致心功能降低和各種心律失常的發(fā)生[2]。阿霉素導(dǎo)致心肌損傷與其半醌自由基介導(dǎo)的氧自由基損傷有關(guān)[3]。國內(nèi)學(xué)者趙力等[4]研究統(tǒng)計(jì)結(jié)果表明肌酸激酶干預(yù)阿霉素處理大鼠后，可以升高心肌損傷大鼠心肌細(xì)胞內(nèi)及血清內(nèi)的超氧化物歧化酶（SOD）、過氧化氫酶（CAT）濃度，及降低脂質(zhì)過氧化物（LPO）的濃度，LPO是體內(nèi)氧自由基攻擊細(xì)胞膜中的多不飽和脂肪酸生成的代謝產(chǎn)物，故其水平的減輕心肌細(xì)胞的損傷作用。SOD、CAT在大鼠心肌細(xì)胞及血清中的升高，對損傷心肌具有保護(hù)作用，心室的間隙連接通道主要由連接蛋白43構(gòu)成，是心臟中表達(dá)最為豐富的蛋白，其正常表達(dá)與分布是間隙連接通道電耦聯(lián)功能正常、心臟正常電生理活動(dòng)以及協(xié)調(diào)舒縮的重要基礎(chǔ)。國內(nèi)學(xué)者沈繼龍[5]通過不同劑量磷酸肌酸鈉預(yù)處理對大鼠心肌缺血再灌注損傷的保護(hù)作用研究結(jié)果表明不同劑量磷酸肌酸鈉預(yù)處理對大鼠心肌缺血再灌注損傷均具有很好的保護(hù)作用，且具有濃度依賴性。連接蛋白43是心室縫隙連接的主要構(gòu)成成分，其分布及功能的改變對于縫隙連接的活性有重要影響，連接蛋白43合成的減少是阿霉素所致心肌損傷大鼠并發(fā)心律失常的一個(gè)非常重要原因。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，阿霉素?fù)p傷大鼠心肌CX43分布與正常心肌組相比解剖結(jié)構(gòu)發(fā)生了改變，這可能與阿霉素?fù)p傷大鼠心肌并至心律失常的發(fā)生有一定的關(guān)系。磷酸肌酸鈉能明顯提高阿霉素所致心肌損傷大鼠急性期心肌組織Cx43蛋白表達(dá)并對阿霉素?fù)p傷大鼠所造成Cx43分布不規(guī)則，具有保護(hù)作用。本結(jié)論也支持磷酸肌酸鈉作為一種高效供能物質(zhì)對心肌細(xì)胞在代謝和功能上具有保護(hù)作用，對阿霉素?fù)p傷大鼠并發(fā)心律失常的發(fā)生具有抑制作用，能夠減輕阿霉素引起的心肌損傷，改善心功能，為磷酸肌酸鈉臨床有效治療阿霉素引起的心律失常提供理論依據(jù)。

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