陳 宏,張博文,周 揚(yáng),黃永震(西北農(nóng)林科技大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院,陜西省農(nóng)業(yè)分子生物學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,陜西楊凌712100)
論 壇
中國肉牛繁殖技術(shù)的演變
陳 宏,張博文,周 揚(yáng),黃永震
(西北農(nóng)林科技大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院,陜西省農(nóng)業(yè)分子生物學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,陜西楊凌712100)
繁殖技術(shù)是肉牛產(chǎn)業(yè)發(fā)展的核心,其在一定程度上體現(xiàn)了我國不同社會(huì)發(fā)展階段肉牛產(chǎn)業(yè)的發(fā)展水平。本文總結(jié)了中國肉牛發(fā)展過程中繁殖技術(shù)的發(fā)展演變,對傳統(tǒng)的本交繁殖技術(shù)以及目前較為廣泛應(yīng)用的人工授精、同期發(fā)情、超數(shù)排卵和胚胎移植等繁殖技術(shù)做了系統(tǒng)的分析,并討論了具有巨大應(yīng)用價(jià)值的試管動(dòng)物,動(dòng)物克隆和轉(zhuǎn)基因技術(shù)在將來中國肉牛產(chǎn)業(yè)中的應(yīng)用。
繁殖技術(shù);肉牛;演變
我國有著悠久的養(yǎng)牛歷史。我國的養(yǎng)牛模式逐漸由分散型的農(nóng)牧戶飼養(yǎng)轉(zhuǎn)向?qū)I(yè)化、規(guī)模化的肉牛養(yǎng)殖場、育肥場飼養(yǎng)。2014年,我國黃牛實(shí)際存欄達(dá)到約6000多萬頭。在肉牛產(chǎn)業(yè)的發(fā)展過程中,繁殖技術(shù)起著關(guān)鍵作用。牛為單胎動(dòng)物,并且繁殖周期較長,這嚴(yán)重制約著肉牛產(chǎn)業(yè)的發(fā)展。因此,繁殖技術(shù)的發(fā)展和演變在一定程度上記載了我國不同社會(huì)發(fā)展階段肉牛業(yè)發(fā)展歷程。近幾十年,隨著科學(xué)技術(shù)的進(jìn)步,肉牛繁殖技術(shù)得到長足發(fā)展。已從傳統(tǒng)的本交繁殖技術(shù)發(fā)展到人工授精、同期發(fā)情、超數(shù)排卵和胚胎移植及體細(xì)胞克隆等現(xiàn)代繁殖技術(shù),并且隨著肉牛產(chǎn)業(yè)發(fā)展的需求被不斷的應(yīng)用和創(chuàng)新。
在20世紀(jì)中期之前,我國生產(chǎn)力低下,養(yǎng)牛主要用來代替人力耕種,并且農(nóng)牧戶養(yǎng)牛分散,飼養(yǎng)數(shù)量較少,本交是唯一的牛繁殖方式。
本交是指發(fā)情母牛和公牛直接交配,繁殖能力主要取決于牛的發(fā)情周期。牛屬于全年多次發(fā)情動(dòng)物,平均21.9±4.9d就會(huì)發(fā)情一次[1],其發(fā)情周期受環(huán)境的影響較大[2],在溫暖季節(jié)里,發(fā)情周期正常,發(fā)情表現(xiàn)顯著;在寒冷地區(qū),特別是粗放飼養(yǎng)情況下,發(fā)情周期也會(huì)停止。在生產(chǎn)力低下的情況下,惡劣的環(huán)境會(huì)嚴(yán)重影響母牛的發(fā)情周期和公牛的精液質(zhì)量。因此,在以本交為牛主要繁殖方式的年代,牛的飼養(yǎng)很難形成一定的規(guī)模,并且本交繁殖技術(shù)不夠規(guī)范,沒有形成一定的體系,生產(chǎn)技術(shù)和生產(chǎn)力嚴(yán)重的限制了養(yǎng)牛業(yè)的發(fā)展。隨著人們生活水平的提高和人們對肉類觀念的改變,牛肉逐漸成為中國餐桌上的一道菜品。以放養(yǎng)為主的飼養(yǎng)方式不能夠滿足人們對牛數(shù)量的需求,本交繁殖技術(shù)逐漸變得規(guī)范,并形成體系。
應(yīng)用本交的方法,通常采用公牛一次或多次與多頭母牛配種的手段提高牛群整體的繁殖能力。受牛本身生理?xiàng)l件的限制,各地區(qū)每頭公牛每月配種數(shù)均未超過20頭。在利用本交技術(shù)進(jìn)行肉牛飼養(yǎng)時(shí),除了要考慮公牛精液的質(zhì)量,還要考慮公牛和母牛的體格,并且在自然交配的情況下,牛的喜好也嚴(yán)重的限制了本交的成功率。一般情況下,一定數(shù)目的母牛就要配備一頭公牛。為保證公牛品質(zhì),公牛的飼養(yǎng)環(huán)境要求苛刻,成本較高。對于沒有公牛的飼養(yǎng)場,由于地域的限制其本交的成功率和成本都會(huì)受到影響。此外,本交還容易導(dǎo)致生殖道疾病和其它疾病的傳播,這會(huì)嚴(yán)重影響母牛的受胎率和產(chǎn)仔數(shù)。
社會(huì)的發(fā)展推動(dòng)了肉牛養(yǎng)殖業(yè)的進(jìn)步,本交繁殖技術(shù)已經(jīng)遠(yuǎn)遠(yuǎn)不能滿足人們對肉牛量的需求。隨著肉牛養(yǎng)殖規(guī)模的不斷擴(kuò)大,現(xiàn)代繁殖技術(shù)被不斷創(chuàng)新和引入。目前常見的肉牛現(xiàn)代繁殖技術(shù)有:人工授精、同期發(fā)情、超數(shù)排卵和胚胎移植、體外授精和試管動(dòng)物、體細(xì)胞克隆等。
2.1人工授精與冷凍精液技術(shù)
人工授精技術(shù)興起于上世紀(jì)30年代,在60~70年代,在我國得到了廣泛的推廣。這種技術(shù)需要將優(yōu)良公牛的精液預(yù)先儲(chǔ)存,在母牛適配期內(nèi),利用非性交的方式,將優(yōu)良公牛的精液間接的導(dǎo)入母牛子宮,從而達(dá)到使母牛受孕的目的。
使用人工授精技術(shù),大大提高了優(yōu)秀種公牛的使用率,這項(xiàng)技術(shù)使我國的肉牛繁殖能力提高到一個(gè)新的層次,其不僅適用于散戶飼養(yǎng),也適用于規(guī)模化的肉牛飼養(yǎng),這對我國肉牛業(yè)的發(fā)展起到重要的推動(dòng)作用。
人工授精技術(shù)可以提高優(yōu)良種公牛的配種效能和種用價(jià)值,擴(kuò)大配種母牛的頭數(shù),加速牛品種改良,促進(jìn)育種工作進(jìn)程;克服了公、母牛體格差異造成的交配不易,利用人工采精和輸精的方式增加了公牛和母牛的選擇性,在很大程度上降低了本交容易導(dǎo)致生殖道疾病和其它疾病傳播的幾率。另外,人工授精技術(shù)中的凍精技術(shù)打破了公、母牛交配所受的地域限制,增加了各個(gè)養(yǎng)殖場之間的交流,不但減少了公牛整體的飼養(yǎng)數(shù)量和費(fèi)用,而且可以充分利用優(yōu)良公牛的遺傳資源,提高母牛的受胎率[34]。
2.2同期發(fā)情技術(shù)
同期發(fā)情又稱同步發(fā)情,是人工授精技術(shù)之后,發(fā)展起來的一個(gè)新的家畜繁殖技術(shù),該技術(shù)是利用激素制劑人為地控制并調(diào)整一群母畜的發(fā)情周期,使之在預(yù)定時(shí)間內(nèi)集中發(fā)情。母牛的發(fā)情周期由多種激素相互調(diào)節(jié)控制,包括下丘腦分泌的促性腺激素釋放激素(GnRH),垂體分泌的促卵泡素(FSH)和促黃體素(LH),卵巢分泌的雌激素、孕激素、抑制因子和其它的一些因子和子宮分泌的前列腺素(PG)。同期發(fā)情的處理方法主要可以分為兩類,首先可以通過誘導(dǎo)溶黃體作用的藥物(如:PG)使發(fā)情周期的黃體期縮短,促使新的卵泡出現(xiàn),從而縮短發(fā)情期;另外也可以通過利用孕激素類物質(zhì)處理動(dòng)物延長黃體期,延長發(fā)情期[5-6]。
同期發(fā)情技術(shù)在上世紀(jì)60年代開始得到人們的認(rèn)識和研究,在70年代才開始逐漸的應(yīng)用于實(shí)踐。當(dāng)時(shí)我國的養(yǎng)牛業(yè)正處在從散戶飼養(yǎng)到規(guī)?;B(yǎng)殖的過渡時(shí)期,同期發(fā)情技術(shù)的同期化處理使規(guī)?;B(yǎng)殖成為可能。同期發(fā)情技術(shù)的處理方法也在隨著社會(huì)的發(fā)展不斷的得到了改進(jìn)和創(chuàng)新。目前,同期發(fā)情技術(shù)廣泛應(yīng)用于各大牛場。因此,可以說同期發(fā)情技術(shù)是肉牛飼養(yǎng)史上從散戶飼養(yǎng)到規(guī)?;曫B(yǎng)轉(zhuǎn)變的體現(xiàn)。
利用同期發(fā)情技術(shù),可以使母牛大部分個(gè)體在預(yù)定的時(shí)間內(nèi)集中發(fā)情、集中配種、集中妊娠和集中分娩,這樣使母牛產(chǎn)下的后代年齡整齊,飼養(yǎng)可以實(shí)現(xiàn)同期化,這大大的節(jié)約了管理時(shí)間、管理人員以及管理費(fèi)用。同期發(fā)情技術(shù)適用于規(guī)?;图s化的肉牛飼養(yǎng),其極大的提高了肉牛飼養(yǎng)的管理水平,但肉牛的繁殖能力則沒有發(fā)生本質(zhì)上的改善。因此,在實(shí)際肉牛飼養(yǎng)過程中,同期發(fā)情技術(shù)多與人工授精等技術(shù)聯(lián)合使用,在提高繁殖能力的同時(shí),對肉牛進(jìn)行集中管理,增加經(jīng)濟(jì)效益[7-8]。
2.3超數(shù)排卵和胚胎移植技術(shù)
超數(shù)排卵技術(shù)是現(xiàn)代肉牛繁殖的又一新技術(shù)。這一技術(shù)在擴(kuò)大優(yōu)秀母畜的作用上發(fā)揮了重要作用。它是在母牛發(fā)情周期的適當(dāng)時(shí)期,應(yīng)用外源性促性腺激素誘發(fā)卵巢多個(gè)卵泡發(fā)育,可以促進(jìn)母牛排出多個(gè)具有受精能力的卵子。但值得注意的是,牛為單胎動(dòng)物,并且極易發(fā)生難產(chǎn)。所以在實(shí)際應(yīng)用的時(shí)候并不主張通過增加母牛懷胎數(shù)目來增加牛群整體的繁殖能力,而是結(jié)合胚胎移植技術(shù),利用優(yōu)良母牛超排得到的卵子,通過受精得到的胚胎被移植到同種的、生理狀態(tài)相同的其他雌性動(dòng)物體內(nèi),使之繼續(xù)發(fā)育為新個(gè)體。因此,超數(shù)排卵被普遍當(dāng)做是胚胎移植技術(shù)中的一個(gè)必要的環(huán)節(jié)[9]。
胚胎移植技術(shù)早在1890年就在兔子上試驗(yàn)成功,直到1977年才開始在發(fā)達(dá)國家應(yīng)用于生產(chǎn)。在我國肉牛飼養(yǎng)中,胚胎移植已經(jīng)發(fā)展成熟,并逐步實(shí)現(xiàn)了商業(yè)化應(yīng)用。相對于同期發(fā)情和人工授精技術(shù),胚胎移植技術(shù)使人類由被動(dòng)的飼養(yǎng)肉牛轉(zhuǎn)向了主動(dòng)地生產(chǎn)肉牛,是現(xiàn)代畜牧業(yè)中又一次巨大飛躍,其充分發(fā)揮優(yōu)良母畜繁殖潛力,并代表了我們國家科技的發(fā)展水平[10-11]。
超數(shù)排卵和胚胎移植技術(shù)一方面人為的增加了母牛產(chǎn)生的可受精卵子數(shù)目,因而增加了后代群體數(shù)目;另一方面通過在體外鑒定胚胎的活性,增加了母牛的受孕率和產(chǎn)仔率。此外,胚胎移植還可以選擇性的對一頭母牛植入2顆胚胎,進(jìn)一步的增加了胎兒的成活率,同時(shí)也進(jìn)一步增加了母牛的產(chǎn)仔率[12]。
2.4胚胎切割與冷凍技術(shù)
牛的胚胎分割是牛胚胎工程技術(shù)的組成部分,是通過對胚胎顯微操作,一分為二、一分為四或更多人工制造同卵雙胎或同卵多胎的方法。胚胎分割是擴(kuò)大胚胎來源的一條重要途徑。可獲得一卵雙生或多生,避免牛的異性孿生不育。通過分割胚的冷凍保存,可先移植一半,另一半冷凍保存,待移植的那半胚產(chǎn)仔證實(shí)是優(yōu)秀的個(gè)體后,再將冷凍保存的半胚解凍和移植。胚胎分割為性別鑒定也提供了可能性。通過胚胎分割而產(chǎn)生的同卵雙生后代,四分胚在牛相繼成功。
胚胎冷凍保存一般是指在干冰和液氮中保存胚胎。其最大優(yōu)點(diǎn)是胚胎可以長期保存,而對其活力無影響。牛的胚胎冷凍技術(shù)體系已經(jīng)建立,冷凍胚胎分割在牛也已取得成功。
2.5體外培養(yǎng)和體外受精
體外受精(IVF)技術(shù)是在人工控制的環(huán)境中完成精子和卵子的結(jié)合,從而達(dá)到使畜群迅速擴(kuò)繁的目的。上世紀(jì)八十年代體外受精技術(shù)開始獲得成功,其中在以牛為代表的家畜中迅速發(fā)展。體外受精不僅成本低廉,并且效果穩(wěn)定。其包括卵母細(xì)胞和精液的采集、體外受精和胚胎培養(yǎng)等過程。由于雌性動(dòng)物的特殊性,卵母細(xì)胞的采集相對比較復(fù)雜,其通常包括三種方式:超數(shù)排卵、從活體卵巢中或從屠宰后的家畜卵巢上采集卵母細(xì)胞。對于超數(shù)排卵所得到的卵母細(xì)胞不需要進(jìn)一步培養(yǎng)就可以直接進(jìn)行授精,然而對于未成熟的卵母細(xì)胞而需要進(jìn)一步體外培養(yǎng)。精液的獲得較為簡單,通常在獲得后用肝素和鈣離子載體對其處理使精子獲能,與成熟卵子共同培養(yǎng)使卵子受精進(jìn)行后續(xù)的篩選和培養(yǎng)。但體外受精受外界環(huán)境影響較大,其受精效率較低;并且成熟卵子和胚胎發(fā)育的分子機(jī)制目前還不清楚。因此,對分子機(jī)制的研究以及與其它生物技術(shù)結(jié)合成為提高體外受精效率的必經(jīng)之路[13-16]。
2.6性別鑒定與性別控制
家畜早期性別鑒定和性別控制在畜牧業(yè)的發(fā)展中具有重要的意義,它可以有目的的對畜群結(jié)構(gòu)進(jìn)行控制,減少資源浪費(fèi),因此在畜牧業(yè)中廣泛應(yīng)用[17~19]。早期胚胎鑒定的方法很多[20-21],主要包括:細(xì)胞遺傳學(xué)方法、生物化學(xué)方法、免疫學(xué)方法和分子生物學(xué)方法。P C R技術(shù)在早期胚胎的性別鑒定中具有重要的作用,其根據(jù)Y染色體特異序列設(shè)計(jì)引物,根據(jù)PCR擴(kuò)增產(chǎn)物的分型狀況對早期胚胎性別進(jìn)行判斷[22]。這種技術(shù)具有其操作簡單,成本低廉,結(jié)果準(zhǔn)確的特點(diǎn)。除此之外,人們可以通過對精液進(jìn)行處理[23-24],來實(shí)現(xiàn)對性別進(jìn)行控制的目的。性控精液的出現(xiàn)推動(dòng)了畜牧業(yè)的發(fā)展[25-26]。其結(jié)合超數(shù)排卵和胚胎移植技術(shù),可以使畜群的遺傳率提高0.4%~1.4%。對青年的母畜輸入X精子可以大大的降低難產(chǎn)率,并且這項(xiàng)技術(shù)的生物安全系數(shù)較高。性控精液在奶牛產(chǎn)業(yè)的應(yīng)用價(jià)值很高,利用這項(xiàng)技術(shù)可以使母牛的出生率達(dá)到90%以上,從而促進(jìn)奶牛業(yè)的快速發(fā)展。
2.7人工誘導(dǎo)雙胎技術(shù)
牛是單胎動(dòng)物,在自然狀態(tài)下,牛的雙胎率為0.5%~4.5%,自本世紀(jì)30年代以來,國內(nèi)外學(xué)者利用各種途徑展開了對人工誘導(dǎo)母牛雙胎的研究[2728]。尤其是近年來隨著人們對母牛繁殖機(jī)理研究的深入和胚胎生物技術(shù)的快速發(fā)展,人工誘導(dǎo)母牛雙胎已成為可能。在這一方面,我國的科研工作者也做了很多方面的研究與探索。楊利國等[29-30]在他們的研究中認(rèn)為母牛經(jīng)PMSG+ITC+HCG處理后,黃牛的受胎數(shù)和受胎率、妊娠雙胎數(shù)、妊娠多胎數(shù)都明顯的增加了。應(yīng)用胚胎移植誘導(dǎo)雙胎可以使一頭母牛的繁殖力提高一倍,母牛產(chǎn)犢效率提高,降低了每頭犢牛的成本,對于發(fā)展肉牛業(yè)具有重要的意義。
2.8牛的體細(xì)胞克隆技術(shù)
體細(xì)胞克隆技術(shù)是現(xiàn)在生物學(xué)發(fā)展的重要產(chǎn)物,其通過將一個(gè)二倍體細(xì)胞核移入一個(gè)去核的卵細(xì)胞,在特定的條件下進(jìn)行核卵重組,然后植入代孕母體中發(fā)育成新個(gè)體。近年來,在牛體細(xì)胞克隆方面進(jìn)行了大量研究[31-36],并且將體細(xì)胞克隆技術(shù)與轉(zhuǎn)基因結(jié)合起來,已取得了許多可喜的成果,生產(chǎn)出轉(zhuǎn)基因牛,加快了牛育種的進(jìn)程。由于供體細(xì)胞可以為高度分化的體細(xì)胞,體細(xì)胞克隆資源充足。但體細(xì)胞克隆對環(huán)境及生物技術(shù)要求較高,操作過程復(fù)雜,并且成本較高,很難在實(shí)際生產(chǎn)中實(shí)現(xiàn)規(guī)?;僧a(chǎn)。2003年我國成功利用體細(xì)胞克隆技術(shù)生產(chǎn)了3頭克隆牛,標(biāo)志著我國的生物技術(shù)在畜牧業(yè)的應(yīng)用登上了新的臺(tái)階[37]。但實(shí)現(xiàn)體細(xì)胞克隆技術(shù)在畜牧業(yè)中的廣泛應(yīng)用還需要對操作過程進(jìn)行進(jìn)一步的優(yōu)化,使其適應(yīng)工廠規(guī)?;牟僮鳌?/p>
2.9干細(xì)胞與性細(xì)胞誘導(dǎo)技術(shù)
干細(xì)胞是沒有充分分化,具有再生成各種組織器官潛能的體細(xì)胞。對于哺乳動(dòng)物而言,其分為兩大類:成體干細(xì)胞和胚胎干細(xì)胞。通過對干細(xì)胞和性細(xì)胞的誘導(dǎo),使其按照人們的意愿進(jìn)行分化和結(jié)合,并最終發(fā)育成為完整的個(gè)體,這極大地體現(xiàn)了人類通過生物技術(shù)對生物的調(diào)控能力。但目前,對干細(xì)胞誘導(dǎo)的研究還處于初步階段。干細(xì)胞誘導(dǎo)分化的分子機(jī)制尚不明確,并且干細(xì)胞誘導(dǎo)分化的重復(fù)性差、穩(wěn)定性低,對環(huán)境及誘導(dǎo)劑的要求較高。目前,將細(xì)胞誘導(dǎo)技術(shù)應(yīng)用到畜牧業(yè)的生產(chǎn)中還很難實(shí)現(xiàn)。但這為畜牧業(yè)的發(fā)展提供了方向,增強(qiáng)了人類對畜產(chǎn)品需求的潛在主動(dòng)性。
胚胎生物技術(shù)是指對卵子、精子和胚胎在體外條件下進(jìn)行的各種操作和處理。除上述有關(guān)精子冷凍、胚胎切割、冷凍保存外,還出現(xiàn)了卵子的體外培養(yǎng)和體外受精,性控精液,體細(xì)胞克隆等技術(shù),這些高新技術(shù)近幾年來一些已應(yīng)用于肉牛的繁殖實(shí)踐,一些可以最大限度地挖掘動(dòng)物的繁殖潛力,可以預(yù)測這些技術(shù)的應(yīng)用將為人類創(chuàng)造更大的效益。
我國肉牛業(yè)近幾十年發(fā)展迅速,目前產(chǎn)肉量已經(jīng)躋身世界前三,其在我國農(nóng)業(yè)發(fā)展中占有重要的地位。繁殖技術(shù)作為肉牛生產(chǎn)的核心技術(shù),隨著社會(huì)的發(fā)展將會(huì)不斷的改進(jìn)和創(chuàng)新,將會(huì)有更多的繁殖新技術(shù)應(yīng)用到肉牛生產(chǎn)中。從最原始的本交到目前廣泛應(yīng)用的人工授精、同期發(fā)情、超數(shù)排卵和胚胎移植等現(xiàn)代繁殖技術(shù),逐步突破了公、母牛的生理阻隔,使肉牛的生產(chǎn)從被動(dòng)的飼養(yǎng)肉牛到主動(dòng)地生產(chǎn)肉牛。試管牛突破了體內(nèi)受孕的限制,克隆牛突破了生殖細(xì)胞的限制,為肉牛的生產(chǎn)開辟了新的途徑并提供了豐富的來源。轉(zhuǎn)基因??梢源蚱屏藗€(gè)體甚至是物種的限制,為生產(chǎn)優(yōu)良肉牛提供了又一次質(zhì)的飛躍。雖然這些技術(shù)還沒有充分的應(yīng)用到肉牛的實(shí)際生產(chǎn)中,但這些技術(shù)預(yù)示著肉牛繁殖技術(shù)將在不久的將來會(huì)有一次巨大的轉(zhuǎn)折,新的肉牛繁殖技術(shù)將會(huì)使肉牛產(chǎn)業(yè)從生產(chǎn)肉牛轉(zhuǎn)向制造肉牛,將會(huì)對肉牛業(yè)的發(fā)展起到巨大的推動(dòng)作用
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Evolution of Reproductive Technique in Chinese Beef Cattle
CHEN Hong,ZHANG Bo-wen,ZHOU Yang,HUANG Yong-zhen
(College of Animal Science and Technology,Northwest A&F University,Shaanxi Key Laboratory of Molecular Biology for Agriculture,Yangling,Shaanxi 712100,China)
Reproductive technique is the core of the development of beef cattle industry.It embodies the development level of beef cattle industry in different social stage to some extent.This article summarized the evolution of reproductive technique in the process of Chinese cattle industry development.We also systematically analyzed the traditional reproductive technique and the widely applied methods like artificial insemination, estrus synchronization,super ovulation and embryo transfer,and discussed the applications of the vitro fertilization,animal clone and gene transfer technologies in Chinese beef cattle industry in the future.
reproductive technique;cattle;evolution
S8-1
A
1001-9111(2015)06-0001-05
2015-06-20 修改日期:2015-06-22
本研究由國家肉牛牦牛產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系專項(xiàng)(CARS-38)、國家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(No.31272408),陜西省科技統(tǒng)籌創(chuàng)新工程計(jì)劃項(xiàng)目(2015KTCL 02-08,2014KTZB 02-02-02-02)資助完成。
陳宏(1955-),男,陜西西安人,教授,博士生導(dǎo)師,主要從事分子遺傳與家畜育種,E-mail:chenhong 1212@ 263.net