王嬌嬌 高衛(wèi)萍

干眼的實驗模型及針刺治療研究進展

王嬌嬌 高衛(wèi)萍

干眼影響人們的工作學習，發(fā)病呈上升趨勢，目前尚無有針對性的療法，探究有效的治療方法是近年來研究的熱點。針刺治療干眼在臨床上取得滿意療效，其機制研究尚處在起步階段。現(xiàn)對干眼的實驗模型及針刺治療進行綜述，系統(tǒng)介紹動物實驗研究的造模方法、常見分類以及針刺對干眼動物模型的影響，以期對針刺治療干眼的實驗研究及機理研究提供參考和思路。

干眼；針刺；動物實驗；綜述

干眼是一種因淚液質或量異?；騽恿W異常，導致淚膜穩(wěn)定性下降，并伴有眼部不適和潛在眼表組織病變，淚液滲透壓升高和眼表炎癥反應〔1〕的常見眼表疾病，可由多種因素引起。根據(jù)諸多文獻記載，中醫(yī)針刺治療干眼效果明顯〔2-4〕，其作用機理有待動物實驗的進一步闡釋?，F(xiàn)將干眼實驗模型及針刺治療研究進展綜述如下。

1 干眼的動物模型

目前在動物實驗中，干眼模型的建立也是通過多種方法進行。干眼動物模型可分為淚液缺乏型和蒸發(fā)過強型2種。1.1淚液缺乏型干眼模型

1.1.1 藥物造模:藥物制造干眼模型是實驗中常用的方法。據(jù)文獻報道，包括阿托品造模法〔5-6〕、東莨菪堿造模法〔7-8〕、高滲鹽水造模法和局部點用防腐劑造模法等。阿托品為副交感神經(jīng)阻斷劑，可阻斷副交感神經(jīng)的興奮性傳導，而副交感神經(jīng)興奮可使淚液分泌增加，因此，阿托品可通過阻斷副交感神經(jīng)的興奮性傳遞減少淚液分泌而制造干眼模型。施煒等〔9〕運用1%的硫酸阿托品滴眼液，4次/d滴眼，檢測兔淚流量，實驗結果證實阿托品滴眼能夠制作兔干眼模型。東莨菪堿與阿托品的藥理作用不同，有較強的外周抗膽堿作用，可以誘導兔淚液分泌減少。仇晶晶等〔10〕通過皮下注射氫溴酸東莨菪堿，給藥1 h后檢測兔淚流量，結果證實氫溴酸東莨菪堿可以減少淚液分泌量。李晶等〔11〕采用高滲鹽水滴眼對照試驗的方法，觀察高滲鹽水對小鼠淚液分泌量及角膜上皮細胞的影響。結果表明高滲鹽水實驗使淚液滲透壓升高，在小鼠眼表造成類似干眼的病理損害。熊翠菊等〔12〕用0.1%的潔爾滅滴眼液滴一側眼，對側眼做空白對照組，分別于給藥前及給藥后第3、5、7和14天行Schirmer試驗、1%熒光素鈉染色（FL），1%虎紅染色（RB），結果顯示給藥后第7天起實驗組Schirmer試驗值減少（P＜0.001）并逐漸下降，第5天起FL染色計分增加（P＜0.001）并逐漸上升，第3天起RB染色計分增加（P＜0.001）并逐漸上升，實驗表明局部應用潔爾滅滴眼液可構建兔干眼模型。

1.1.2 維生素A缺乏造模:維生素和微量元素在視力改變和眼部疾病的發(fā)病中占有重要地位〔13〕。維生素A是眼的重要營養(yǎng)來源，參與維持視力和免疫系統(tǒng)功能的正常。維生素A缺乏也可以導致干眼。國內學者〔14〕運用完全不含維生素A的飼料喂養(yǎng)干眼模型兔，采用隨機對照實驗的方法觀察兔角膜的變化。實驗結果表明維生素A缺乏可導致淚腺腺體萎縮，使角膜上皮及結膜干燥引發(fā)干眼。

1.1.3 手術造模:睪酮作為一種性激素，它的含量降低可以對眼部產生重要影響。睪酮含量降低可以導致淚腺上皮細胞萎縮，杯狀細胞減少，淚液分泌量減少而致干眼?；诖?，在目前實驗研究中，常用“去勢”法制作干眼模型。張月梅等〔15〕用手術切除雄兔睪丸及附睪，結扎精索靜脈及輸精管，成功制成去勢干眼模型。姚小磊等〔16〕采用分組對照的方法，經(jīng)腹腔手術行兔雙側卵巢切除術進行比較觀察，實驗結果證實該法可成功制作兔干眼模型。李森等〔17〕通過摘除大鼠眶外淚腺和眶內淚腺的方法觀察術后大鼠淚液分泌量，成功制造干眼模型。施煒等〔18〕采用第三眼瞼及部分哈氏腺聯(lián)合板層角膜切開成功制作反射缺乏型干眼兔模型。謝漢平等〔19〕運用手術摘除淚腺及第三眼瞼，并用三氯醋酸對結膜表面的副淚腺及杯狀細胞進行燒灼破壞，成功制作干眼癥狀程度更為嚴重的兔干眼模型。

1.2 蒸發(fā)過強型干眼模型

1.2.1 藥物造模:有文獻報道有學者采用腎上腺素阻塞法〔20〕和氫氧化鈉燒灼法〔21〕制造干眼模型，這兩種方法都造模成功，但存在諸多不足，實際應用較少。

1.2.2 減少瞬目頻率造模:劉盛春等〔22〕采用固定家兔眼瞼控制瞬目次數(shù)的方法，加快淚液蒸發(fā)，使眼部長期干澀導致角膜上皮細胞壞死制作干眼模型。實驗結果表明該模型主要通過減少瞬目頻率，使淚液蒸發(fā)過多，淚液中黏蛋白缺乏，眼表組織繼而干燥失活，角膜上皮細胞壞死缺損，由此引起角膜上皮屏障功能的損害而出現(xiàn)干眼的表現(xiàn)。

1.2.3 環(huán)境誘導造模:陳蔚等〔23〕通過創(chuàng)建智能環(huán)境控制系統(tǒng)（ICES），有效調控環(huán)境的濕度、溫度和氣體流量，并在ICES中創(chuàng)建一個單純環(huán)境因素誘導的小鼠干眼模型，結果表明，低濕、高氣體流量的環(huán)境會導致正常小鼠淚液分泌量減少，并出現(xiàn)眼表上皮病變以及凋亡標志物的高表達。

總之，根據(jù)不同的發(fā)病機制，許多干眼動物模型被建立起來。實驗者應根據(jù)自己的實驗目的及實驗條件選取合適的干眼模型。

2 針刺對干眼動物模型的影響

劉雪等〔24〕運用阿托品滴眼法制造家兔干眼模型，采用對照法觀察針刺、中藥及針藥結合對干眼模型兔淚液分泌量及淚腺中乙酰膽堿含量的影響。針刺取穴睛明、攢竹、絲竹空、太陽、瞳子髎。結果顯示針刺、中藥以及針刺結合中藥均可以提高干眼模型兔淚液分泌量。實驗第10、17天針藥組淚腺中乙酰膽堿的含量顯著高于模型組（P＜0.05）。該結果表明針刺可以促進干眼模型兔淚腺的分泌，提高淚腺中乙酰膽堿的含量，對干眼模型兔具有治療作用。張月梅等〔25〕將新西蘭兔隨機分為正常組、干眼組和針刺組，干眼組和針刺組摘除雙側睪丸，去勢2周后兔干眼模型建立，并對針刺組穴位選取睛明、攢竹、絲竹空、瞳子髎、太陽針刺治療，后觀察實驗兔淚流量、角膜熒光染色、淚腺組織病理學以及淚腺上皮細胞凋亡相關蛋白Fas、FasL的變化。淚流量觀測表明針刺可以促進淚液分泌，在針刺4周后達到正常水平，針刺組和干眼組相比有顯著差異；角膜熒光染色觀察結果顯示針刺組從針刺開始染色評分下降，到去勢后6周趨于正常水平；干眼組從去勢1周后角膜熒光染色積分大幅上升，去勢4周后上升幅度趨于平緩；正常組角膜熒光染色基本不變。淚腺組織病理觀察顯示干眼組淚腺上皮細胞萎縮，細胞內物質減少；針刺組淚腺上皮細胞未見萎縮，胞漿充盈。而對Fas、FasL的觀察結果顯示Fas/FasL的表達在針刺組和干眼組中均上調，在干眼組中多為較強表達，而在針刺組中表達較低，且多為較弱表達，干眼組與針刺組有明顯差異（P＜0.05），針刺組與正常組無統(tǒng)計學意義的差異（P＞0.05）。以上觀察結果表明，針刺可以增加干眼模型兔的淚液分泌量，改善干眼對角膜和淚腺的病理損害，減緩淚腺上皮細胞的凋亡，對干眼具有控制和治療作用。龔嵐等〔26〕針刺兔右側眼部攢竹、絲竹空、太陽穴，進針后行提插捻轉手法，針刺得氣后留針20 min，觀察該療法對兔淚液分泌的影響及淚腺形態(tài)的變化。結果發(fā)現(xiàn)針刺能刺激淚腺分泌淚液，且可維持一定時間，針刺后的淚腺組織結構完整，腺上皮結構清晰，腺小葉中腺泡內物質大量排空，腺體分泌旺盛，表明針刺可以促進淚液分泌，進而改善干眼癥狀。在隨后的實驗中他們證實針刺可以增加淚腺組織中神經(jīng)肽血管活性腸肽（vasoactive intestinal polypeptide，VIP）濃度來刺激腺體的分泌，且能維持較長時間〔27〕，該實驗為針刺治療干眼提供了理論基礎。張義彪等〔28-29〕采用阿托品滴眼液造模，觀察針刺對干眼模型兔淚液分泌量的影響，并采用電鏡微觀觀察針刺前后淚腺的形態(tài)結構變化，結果顯示針刺能促進淚腺腺體的分泌，改善淚腺腺體形態(tài)，針刺后淚腺中乙酰膽堿的含量有所增加，作者認為神經(jīng)反射和神經(jīng)遞質在針刺治療干眼中發(fā)揮了一定作用。以上這些研究從多個角度展示了針刺對干眼的治療作用，并對其作用機理進行初步探析。

3 討論

干眼在中醫(yī)中屬“白澀癥”“神水將枯病”等范疇。《黃帝內經(jīng)》認為眼目之所以能視萬物，全靠五臟六腑精氣的濡養(yǎng)，若經(jīng)絡不通，氣血不能上榮于目，則雙目干澀，眼目不舒。目前，西醫(yī)對干眼治療主要依靠局部應用人工淚液〔30-31〕，其治療目的是緩解其癥狀，并非針對其病因的有效治療，停藥后易復發(fā)。淚點栓塞等手術療法〔32-33〕有一定的療效，但也存在不足。中醫(yī)對干眼是針對病因病機進行治療，采用的方法主要有辨證內服中藥、針刺等，既往文獻〔34-36〕顯示均有較好療效。針刺可以促進淚腺主動分泌淚液，改善干眼癥狀，療效穩(wěn)定。近年來隨著干眼動物實驗研究不斷發(fā)展，造模方法日趨完善，人們對于針刺治療干眼的作用機制做了一些探索，包括從分子水平，或圍繞調節(jié)細胞凋亡、改善淚腺的形態(tài)與功能、調節(jié)性激素等方面從不同角度探討了針刺治療干眼的機理。已有的實驗結果表明針刺可以提高淚液分泌，降低干眼對角膜的損害和淚腺腺體的損傷，改善干眼癥狀。目前針刺治療干眼的實驗研究仍處于起步階段，有很多問題尚不明確，但有理由相信隨著動物實驗的深入，針刺治療干眼的作用機制會逐步被解釋，為臨床治療干眼不斷提供新的科學依據(jù)。

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Experimental model of dry eye and research progress of acupuncture treatment

WANG Jiaojiao，GAO Weiping.Nanjing Uni-versity of TCM，Nanjing 210029，Jiangsu，China

Dry eye influences people's work and study a lot，the morbidity is on the rise and there are no direct methods for therapy.To explore the effective treatment is the research hotspot in recent years.Acupuncture treatment for dry eye is satisfactory，yet its mechanism is still in its infancy.This paper summarized the experimental research of acupuncture treatment for dry eye，introduced the essence of the animal experiment research building method systematically，the common classification and the mechanism，in the hope of providing reference and ideas for the experimental research，mechanism research and acupuncture treatment of dry eye.

dry eye；acupuncture；animal experiments；review

R777.3

A

1002-4379（2015）04-0300-03

10.13444/j.cnki.zgzyykzz.2015.04.021

國家自然科學基金（81373746），江蘇省自然科學基金（BK2012856）

南京中醫(yī)藥大學，南京210029

高衛(wèi)萍，E-mail:gao-weiping@163.com