桑雷 孫世坤 陳冬金 陳巖峰 謝喜平 （福建省農(nóng)業(yè)科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所 350013）

母牛妊娠早期診斷技術(shù)簡(jiǎn)介

桑雷 孫世坤 陳冬金 陳巖峰 謝喜平 （福建省農(nóng)業(yè)科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所 350013）

妊娠早期診斷技術(shù)能縮短母?？諔褧r(shí)間，是提高繁殖效率的手段，關(guān)系到養(yǎng)殖場(chǎng) （戶）的切身利益。本文從診斷時(shí)間、診斷技術(shù)難度、診斷真確率、成本等方面比較分析直腸檢測(cè)、B超妊娠診斷、早孕因子、孕酮和妊娠相關(guān)蛋白免疫學(xué)診斷技術(shù)。

母牛；妊娠診斷；早期診斷；綜述

母牛的繁殖效率影響到奶業(yè)生產(chǎn)，決定了一個(gè)奶牛場(chǎng)是否盈利。母牛繁殖率是由產(chǎn)犢間隔時(shí)間決定的，其影響因素包括繁殖疾病造成的屢配不妊和空懷時(shí)間太長(zhǎng)，目前常規(guī)方法對(duì)奶牛進(jìn)行診斷一般要等到配種后的2～3月，而新技術(shù)的出現(xiàn)能有效的縮短時(shí)間[1]，提高生產(chǎn)效益，本文就目前的一些妊娠早期診斷技術(shù)進(jìn)行介紹。

1 直腸檢查法

該種方法一般是在配種后兩月進(jìn)行，技術(shù)員徒手或戴手套將手通過(guò)母牛肛門(mén)伸進(jìn)直腸內(nèi)，隔著直腸觸摸子宮角、子宮中動(dòng)脈和卵巢，依據(jù)手的觸覺(jué)判斷母牛是否懷胎及懷胎時(shí)間，該種技術(shù)優(yōu)點(diǎn)不需要任何設(shè)備，快捷簡(jiǎn)便，準(zhǔn)確率高，目前廣大養(yǎng)殖戶和養(yǎng)殖小區(qū)大部分采用該種技術(shù)，然而直腸檢查也存在缺點(diǎn)：①操作技術(shù)不易掌握，配種員實(shí)際操作經(jīng)驗(yàn)影響摸胎的準(zhǔn)確率；②母牛的懷胎時(shí)間長(zhǎng)短影響判斷空懷與否的準(zhǔn)確率；③操作不當(dāng)易引起母牛間的交叉感染及母牛流產(chǎn)[2]。

2 B超妊娠法

應(yīng)用B超掃描可對(duì)母牛早期胚胎進(jìn)行觀察，并根據(jù)其不同時(shí)期的圖像特征做出準(zhǔn)確妊娠診斷。B超的原理：通過(guò)向母牛機(jī)體發(fā)射2萬(wàn)赫茲以上的超聲波，由于母牛各組織有聲學(xué)的特異差異，超聲波在兩種不同組織界面處發(fā)生反射、折射、散射、繞射、衰減以及聲源與接收器相對(duì)運(yùn)動(dòng)產(chǎn)生多普勒頻移等物理特性，應(yīng)用不同類(lèi)型的B超儀接受這些反射、散射信號(hào)，顯示各種組織形態(tài)。

利用B超監(jiān)測(cè)胚胎及胎兒發(fā)育情況：配種后12～14d子宮出現(xiàn)不連續(xù)無(wú)反射小區(qū)，判斷子宮中出現(xiàn)胎水，為聚有液體的胚泡，不斷擴(kuò)張；至20d，胚胎在子宮中啟動(dòng)發(fā)育，胚泡中出現(xiàn)短直線狀配體；并于22d能監(jiān)測(cè)到胎心搏動(dòng)等生命跡象；22～30d，B超檢測(cè)到子宮區(qū)域內(nèi)胎測(cè)出現(xiàn)明顯的囊胚和胚斑，此作為懷孕與否的診斷標(biāo)準(zhǔn)[3,4]。賈國(guó)慧等對(duì)126頭奶牛配種后20～60d進(jìn)行B超妊娠檢查發(fā)現(xiàn)，20～25d妊娠診斷準(zhǔn)確率較低，26～28d準(zhǔn)確率相對(duì)較高，29～31d妊娠準(zhǔn)確率能達(dá)到100%，同時(shí)還發(fā)現(xiàn)青年牛20～28dB超妊娠診斷準(zhǔn)確率好于經(jīng)產(chǎn)牛[5]。B超診斷的優(yōu)點(diǎn)在于能在活體實(shí)時(shí)影像觀察早孕的子宮及其中的發(fā)育胚胎，感覺(jué)直觀；對(duì)母牛機(jī)體無(wú)損傷性不會(huì)引起母牛間的交叉感染；判定母牛懷胎時(shí)間上早，能減少母牛的空懷時(shí)間，降低養(yǎng)殖成本。然而該種對(duì)操作人員的直腸檢查水平要求很高，母牛產(chǎn)科疾病對(duì)超聲妊娠診斷的陽(yáng)性符合率有一定的影響，如胚胎死亡、胚胎吸收和流產(chǎn)、子宮肌瘤和積水等疾病[6]。

3 早孕因子檢測(cè)法

早孕因子檢測(cè)法 （Early pregnancy factor，EPF）是一種具有免疫抑制和生長(zhǎng)因子特性的胚胎生長(zhǎng)及存活所必需的分泌性蛋白，在胚胎著床前后數(shù)小時(shí)至數(shù)天內(nèi)可檢測(cè)到，是哺乳動(dòng)物受精后最早在血清中檢測(cè)到的妊娠相關(guān)蛋白，是目前最早確認(rèn)妊娠的生化標(biāo)志之一[7]。玫瑰花環(huán)抑制試驗(yàn)檢測(cè)法（Rosette inhibition titre，RIT）是檢測(cè)EPT的經(jīng)典方法，但是存在實(shí)驗(yàn)操作復(fù)雜、重復(fù)性差、判斷客觀性差等問(wèn)題，因此該方法難以推廣。由于對(duì)早孕因子的化學(xué)本質(zhì)及免疫學(xué)效果研究未有突破性進(jìn)展，一直未形成的快速、高效檢測(cè)早孕手段。

4 孕酮檢測(cè)法

孕酮 （Progesterone，P4）主要由黃體及胎盤(pán)產(chǎn)生。母牛性周期中孕酮水平呈規(guī)律性變化，發(fā)情期孕酮水平較低，黃體期孕酮水平較高，妊娠期孕酮水平一直維持在較高。1971年，Laing等采用放射性免疫技術(shù) （Radioimmunoassay，RIA）檢測(cè)發(fā)現(xiàn)發(fā)情期乳汁中孕酮濃度變化與直腸檢查卵巢的評(píng)估結(jié)果基本一致 （Milk Progesterone，MP4）[8]。 史遠(yuǎn)剛等在母牛配后18～24d通過(guò)RIA技術(shù)檢測(cè)母牛乳汁中的孕酮濃度判斷配種效果，懷孕確診率達(dá)到90%以上，未孕確診率為100%[9]。鑒于孕酮-放免檢測(cè)法需要實(shí)驗(yàn)設(shè)備昂貴，且具有放射性污染，在生產(chǎn)推廣具有一定的難度，孕酮-酶免法（EIA）則被應(yīng)用于配種效果檢測(cè)能通過(guò)顏色反應(yīng)判定孕酮濃度。楊國(guó)林等報(bào)道運(yùn)用目視ELISA孕酮檢測(cè)法檢測(cè)乳樣只需30～45min判斷配種效果，19～23d早期妊娠診斷正確率為81.25%[10]。萬(wàn)積成等報(bào)道采用膠體金技術(shù)研制了孕酮早孕診斷試紙，能在5min內(nèi)完成妊娠檢測(cè)，此種方法操作要求低，反應(yīng)迅速、易保存，成本低，但是這種方法無(wú)法準(zhǔn)確確定母牛是否妊娠，適用于妊娠初篩[11]。

5 妊娠相關(guān)糖蛋白測(cè)定

妊娠相關(guān)糖蛋白 （Pregnancy associated glycoproteins，PAG）又稱妊娠特異蛋白 B（Pregnancy specific protein B，PSPB），是妊娠母牛胎盤(pán)滋養(yǎng)層雙核細(xì)胞表達(dá)。研究表明，母牛妊娠后，外周血液中PAG濃度開(kāi)始緩慢上升，妊娠22d達(dá)到2ng/mL以上，與空懷母牛體內(nèi)的PAG濃度差異顯著[12]?；谀概Ｈ焉锲赑AG的特點(diǎn)，目前檢測(cè)PAG主要采用放免法 （RIA）、酶免法 （ELISA）方法。放免法 （RIA）由于存在核污染等問(wèn)題，在生產(chǎn)上不適合推廣應(yīng)用，目前只是作為實(shí)驗(yàn)室的檢測(cè)手段。而基于此原理檢測(cè)母牛配種28d后PAG濃度的ELISA已被商業(yè)化開(kāi)發(fā)，準(zhǔn)確率達(dá)到93%以上[13]。王建勇等2013年1～3月份對(duì)上海地區(qū)9個(gè)牧場(chǎng)3400個(gè)血樣進(jìn)行檢測(cè)發(fā)現(xiàn)奶牛配后28～33d空懷檢出準(zhǔn)確率達(dá)到98%，對(duì)懷孕牛檢出準(zhǔn)確率達(dá)到94%[14]。

6 小結(jié)

妊娠早期診斷對(duì)母牛繁殖管理有著極其重要的意義，快速、準(zhǔn)確、簡(jiǎn)便、低價(jià)是理想妊娠早期診斷方法必須具備的條件。目前大多數(shù)妊娠早期診斷方法只能具備其中一種或幾種條件，需要進(jìn)一步的科研創(chuàng)新以研制出更優(yōu)化的診斷技術(shù)滿足生產(chǎn)。

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桑雷 （1981-），男，漢族，博士，助理研究員，從事草食動(dòng)物遺傳育種與繁殖工作。