魏潤

（新疆沙灣縣草原工作站832100）

致犢牛腹瀉大腸桿菌的分離鑒定及藥敏試驗(yàn)

魏潤

（新疆沙灣縣草原工作站832100）

對農(nóng)七師123團(tuán)牛場犢牛所發(fā)生的一種以急性腹瀉、脫水及虛脫為主要特征的傳染病進(jìn)行了病原的（病料：心血、肝、脾淋巴）分離、培養(yǎng)和鑒定，觀察了對兔血的溶血情況，并對兩株分離株進(jìn)行小白鼠感染試驗(yàn)，確定引起此次發(fā)病的病原菌為大腸桿菌。通過對兩株分離株做藥敏試驗(yàn)，表明該分離菌對硫酸鏈霉素、慶大霉素、恩諾沙星敏感，對土霉素中敏，對其他藥物有抗藥性。確定引起該牛場犢牛腹瀉的病原，為臨床預(yù)防和治療提供了依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 病原來源

農(nóng)七師123團(tuán)牛場病死犢牛的心血、肝、脾、淋巴結(jié)。

1.1.2 培養(yǎng)基

LB培養(yǎng)基、麥康凱培養(yǎng)基、SS培養(yǎng)基、三糖鐵瓊脂培養(yǎng)基、鮮血平板、生化鑒定培養(yǎng)基。

1.1.3 藥敏紙片

慶大霉素、卡那霉素、硫酸鏈霉素、恩諾沙星、土霉素等。

1.1.4 生化試劑

1.1.4.1 革蘭氏染色試劑

碘化鉀、草酸銨、堿性復(fù)紅、95%乙醇、碘片、結(jié)晶分析純化學(xué)試劑，自配。

1.1.4.2 生化鑒定試劑

葡萄糖、乳糖、麥芽、甘露醇、蔗糖、靛基質(zhì)、硫化亞鐵、硫酸鈉、α-萘酚、氫氧化鉀、甲基紅、無水乙醇、硫化氫。

1.1.5 實(shí)驗(yàn)動物

5只18～20g健康小白鼠。

1.2 方法

1.2.1 流行病學(xué)調(diào)查

了解飼養(yǎng)管理，消毒，天氣，發(fā)病過程，發(fā)病率，死亡率，發(fā)病癥狀以及大體解剖學(xué)的病變，以便于進(jìn)一步了解其發(fā)病特征。

1.2.2 病料的采集及鏡檢

無菌操作，采集病死牛的心血、肝、脾、淋巴結(jié)，并進(jìn)行涂片、染色、鏡檢。

1.2.3 病原菌的分離、培養(yǎng)

分別接種于LB肉湯中37℃培養(yǎng)24h，并進(jìn)行革蘭氏染色，鏡檢、觀察。

1.2.4 病原菌的純化

細(xì)菌分離培養(yǎng)將肺臟、肝臟、脾臟和淋巴結(jié)分別接種新鮮兔血營養(yǎng)瓊脂平板，每種臟器接種4份平板，2份進(jìn)行普通需氧培養(yǎng)，2份進(jìn)行普通厭氧培養(yǎng)，置于37℃恒溫箱內(nèi)24h后觀察結(jié)果，對培養(yǎng)出的細(xì)菌進(jìn)行革蘭氏染色及鏡檢，將培養(yǎng)出的細(xì)菌純培養(yǎng)，將純培養(yǎng)物接種LB、麥康凱、三糖鐵斜面（穿刺），培養(yǎng)基37℃需氧培養(yǎng)，24h后觀察結(jié)果。

1.2.5 生化鑒定

1.2.5.1 糖類分解試驗(yàn)

取分離菌的24h純培養(yǎng)物分別接種于葡萄糖、乳糖、麥芽甘露醇培養(yǎng)基內(nèi)，37℃培養(yǎng)24h，觀察結(jié)果。

1.2.5.2 MR/VP試驗(yàn)

取分離菌的24h純培養(yǎng)物分別接種在葡萄糖蛋白胨水溶液中，培養(yǎng)37℃24～48h，加入指示劑。

1.2.5.3 硝酸鹽還原試驗(yàn)

取分離菌的純培養(yǎng)物接種到硝酸鹽培養(yǎng)基中，37℃培養(yǎng)24h，在加試劑甲和乙，30s內(nèi)變紅即為陽性，若無顏色出現(xiàn)，加少量鋅粒，隨后出現(xiàn)紅色則是真正的隱形試驗(yàn)。

1.2.6 藥敏試驗(yàn)

用藥敏紙片法（主要為常用的青霉素類和四環(huán)素類）來檢測對抗生素藥物的敏感性。

1.2.7 動物試驗(yàn)

動物致病性試驗(yàn)，將分離到的大腸桿菌接種到營養(yǎng)肉湯，37℃培養(yǎng)10h，取其培養(yǎng)液接種實(shí)驗(yàn)動物，設(shè)置對照組。

1.2.8 溶血試驗(yàn)

采用平板辦法測定分離溶血特性，將大腸桿菌菌種接種到5%兔鮮血LB平板，37℃培養(yǎng)48h后觀察溶血情況，菌落周圍出現(xiàn)溶血圈者判為溶血陽性。

2 小結(jié)與討論

（1）通過流行病學(xué)調(diào)查、臨床癥狀、病理變化、病原分離鑒定和動物試驗(yàn)，確定該牛場犢牛死亡原因?yàn)榇竽c桿菌感染所致。

（2）藥敏試驗(yàn)結(jié)果表明，菌株對各種藥物的敏感性存在明顯的差異，所有菌株均對硫酸鏈霉素和慶大霉素敏感，對新霉素和四環(huán)素耐藥。由于臨床上長期盲目用藥所造成，建議各地區(qū)治療牛大腸桿菌病時要定期輪換用藥，最好先進(jìn)行藥敏試驗(yàn)，選出敏感藥物進(jìn)行有效治療，避免因盲目用藥造成經(jīng)濟(jì)損失。

（3）防治本病要采用綜合性的防治措施，避免各種應(yīng)激因素；平時應(yīng)加強(qiáng)對犢牛的飼養(yǎng)管理，逐步改善牛舍的通風(fēng)條件；認(rèn)真落實(shí)牛場獸醫(yī)衛(wèi)生保健措施；另外在要勤洗犢牛喂奶用具，因?yàn)楸静〉膫魅九c環(huán)境密切相關(guān)。

（4）通過本試驗(yàn)，為微生物實(shí)驗(yàn)室提供了兩只犢牛腹瀉大腸桿菌株兩株，以便進(jìn)一步研制預(yù)防該病的疫苗。