■呂子君 謝少林 王 超 周愛國，2 鄒記興

（1.華南農(nóng)業(yè)大學(xué)動物科學(xué)學(xué)院，廣東廣州 510642；2.清遠(yuǎn)市北江水產(chǎn)科學(xué)研究所，廣東清遠(yuǎn) 511510）

消化酶是指由消化系統(tǒng)和消化腺分泌的，起營養(yǎng)和消化作用的酶類[1]。不同的消化酶在魚類各消化器官內(nèi)的分布存在差異，同一種酶在不同消化器官中的分布也存在明顯差異。消化酶活力可以反映魚類消化系統(tǒng)的發(fā)育狀況和基本的消化生理特征，也可以據(jù)此來看魚類對餌料的吸收情況[2-4]。目前，對魚類消化酶的研究主要是集中于蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶三大類。魚類的胃中最強(qiáng)的消化酶是胃蛋白酶[5]，胰臟也是魚體內(nèi)分泌蛋白酶的主要器官[6]。另外，腸內(nèi)也有來源于幽門垂和肝胰臟的胰蛋白酶。魚類的脂肪酶主要是在肝胰臟中分泌的?，F(xiàn)有的研究表明，脂肪酶幾乎存在于魚類所有的消化組織器官中，且其活性與魚攝食的食物脂肪含量正相關(guān)。肝胰臟是大部分魚類的淀粉酶分泌器官，還有部分魚類的腸道也起著分泌淀粉酶的功能。目前，國內(nèi)對烏鱧消化酶的研究報道相對于斑鱧和雜交鱧較多，但對三者的雜交組合研究仍未有報道。

烏鱧（Channa argus）和斑鱧（C.maculate）均屬于鱸形目（Perciformes）、鱧科（Channidae）、鱧屬（Chan?na）。雜交鱧是以烏鱧(♂)×斑鱧(♀)雜交獲得的F1代。由于烏鱧的養(yǎng)殖主要以動物性餌料為主，所以養(yǎng)殖成本偏高，而常常帶來病害，對自然環(huán)境也造成了破壞。斑鱧的人工馴化取得一定成效，但其品種本身抗病能力差、生長慢，導(dǎo)致種質(zhì)退化嚴(yán)重。到2002年后，珠三角地區(qū)最先開始了雜交鱧[烏鱧(♂)×斑鱧(♀)]的養(yǎng)殖，因其生長快、適應(yīng)性強(qiáng)、馴化容易、產(chǎn)量高等優(yōu)勢，得到了很大的養(yǎng)殖推廣[7-8]。但近幾年也出現(xiàn)生長速度下降和病害頻發(fā)等問題。因此，篩選優(yōu)質(zhì)、高產(chǎn)的鱧科魚類新品種是中國鱧科魚類養(yǎng)殖業(yè)迫切需要解決的問題。本文對以烏鱧、斑鱧和雜交鱧各自進(jìn)行近交、回交、反交及雜交繁殖出的九種鱧的生長和消化酶進(jìn)行比較研究，以選育出生長速度快、成活率高、餌料轉(zhuǎn)化率高的鱧。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

養(yǎng)殖試驗(yàn)于廣東省中山市三角鎮(zhèn)裕榮水產(chǎn)繁殖場進(jìn)行。用于試驗(yàn)的九種組合鱧來源于烏鱧、斑鱧及雜交鱧[斑鱧(♀)×烏鱧(♂)]作為親魚彼此之間交配繁殖的同一批次的F1代，每組設(shè)三個平行，每個平行放養(yǎng)50尾魚，網(wǎng)箱規(guī)格：2 m×2 m×1.5 m，網(wǎng)箱水位1 m左右，每組的體重(68.34±6.26)g，養(yǎng)殖期為90 d，養(yǎng)殖期間定期對每組魚進(jìn)行過篩分養(yǎng)，以減少組內(nèi)殘食。

1.2 樣品收集與測定

1.2.1 生長指標(biāo)

采樣前禁食24 h，再進(jìn)行樣品采集。清點(diǎn)每個平行的魚數(shù)量并進(jìn)行稱重，計算成活率、總增重、特定生長率和餌料系數(shù)。

成活率（Survival rate，SR）(%)=100×終末魚尾數(shù)/初始魚尾數(shù)；

特定生長率（Specific growth rate，SGR）（%/d）=100×(Ln終末平均體重-Ln初始平均體重)/飼養(yǎng)天數(shù)；

餌料系數(shù)（Feed coefficient，F(xiàn)E）=總攝食量（g）/魚凈增重（g）。

1.2.2 消化酶指標(biāo)

每個網(wǎng)箱隨機(jī)取8尾魚，迅速在冰上解剖魚體，采集肝胰臟、胃、幽門盲囊、前腸、后腸等消化組織，于-80℃冰箱中保存?zhèn)溆?。測定消化酶活性前，在組織樣品中加入9倍0.8%生理鹽水，用電動勻漿器在冰浴條件下充分勻漿，勻漿液在4℃、4 000 r/min條件下離心8 min，吸取上清液，于-80℃冰箱中保存?zhèn)溆?。本試?yàn)測試腸道、胃、肝臟消化酶指標(biāo)包括：胃蛋白酶、胰蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶。按照南京建成試劑盒說明書的測定方法進(jìn)行操作。

①淀粉酶單位定義：組織中每毫克蛋白在37℃與底物作用30 min，水解10 mg淀粉定義為1個淀粉酶活力單位。

② 胰蛋白酶單位定義：在pH值8.0，37℃條件下，每毫克蛋白中含有的胰蛋白酶每分鐘使吸光度變化0.003即為一個酶活力單位。

③胃蛋白酶單位定義：每毫克組織蛋白37℃每分鐘分解蛋白生成1 μg氨基酸相當(dāng)于1個酶活力單位。

④脂肪酶單位定義：在37℃條件下，每克組織蛋白在本反應(yīng)體系中與底物反應(yīng)1 min，每消耗1 μmol底物為一個酶活力單位。

1.3 數(shù)據(jù)處理

數(shù)據(jù)采用SPSS18.0軟件進(jìn)行one-way ANOVA分析，組間數(shù)據(jù)用Duncan's法比較。結(jié)果用“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差(Mean±SE)”表示，P＜0.05表示差異顯著。

2 試驗(yàn)結(jié)果

2.1 九種交配組合鱧的生長指標(biāo)比較(見表1)

由表1可知，九組合中G1的成活率最高，達(dá)到82.33%，且顯著高于其他組。G5的成活率最低，僅為70.69%。G2、G4、G6、G8、G9之間無顯著差異(P＞0.05)，均顯著高于G3、G5、G7(P＜0.05)；G3、G5、G7各組之間無顯著差異(P＞0.05)。

從總增重的數(shù)據(jù)可看到，G2增重最多，其次為G1、G4，最少的是G5，G1、G2顯著高于G3、G5、G8、G9，但與G4、G6、G7之間差異不顯著。

表1 九種交配組合鱧部分生長指標(biāo)

G2的特定生長率最大，其次為G1、G4。特定生長率的大小順序?yàn)?G2＞G1＞G4＞G7＞G6＞G3＞G8＞G9＞G5。G2顯著大于G5，但與其他各組之間差異不顯著；其余各組之間差異不顯著（P＞0.05）。

九種組合中餌料系數(shù)最高的為G6，其次是G7，最低的為G5，G6比G5高42.6%，G6、G7之間差異不顯著，顯著高于其他各組。G2、G3、G8、G9之間差異不顯著，顯著高于G1、G4、G5。G1、G4、G5之間差異不顯著。

2.2 九種交配組合鱧消化酶活性比較

2.2.1 淀粉酶活性（見表2）

表2 九種交配組合鱧各組織淀粉酶活性（U/ml）

由表2中可知，在前腸中G7的淀粉酶活性最低，G2最高，比G7高25.8%。前腸淀粉酶的活性的大小順序?yàn)?G2＞G5＞G1＞G4＞G9＞G3＞G6=G8＞G7。G2、G5顯著高于G3、G6、G7、G8、G9，與G1、G4之間差異不顯著；G1與G3、G4、G6、G8、G9之間差異不顯著，顯著高于G7。G3、G4、G6、G7、G8、G9各組間差異不顯著。

在后腸中，G1的淀粉酶活性最高，其次為G2，G8最低，分別比G1、G2低33.3%、30.6%。G1、G2、G5與G3、G4之間差異不顯著，顯著高于G6、G7、G8、G9。G3、G4與G7、G9之間差異不顯著，顯著高于G6、G8。G6、G7、G8、G9各組間差異不顯著。

在肝胰臟中，淀粉酶的活性大小為G1＞G2＞G5＞G3＞G4＞G7＞G9＞G6＞G8，G1的淀粉酶活性最高，G8最低。G1與G2、G3、G4、G5各組間的差異不顯著，顯著高于G6、G7、G8、G9。G2、G5顯著高于G6、G8、G9，與G3、G4、G7各組間差異不顯著。G3、G4、G6、G7、G8、G9各組間差異不顯著。

在胃中，淀粉酶的活性大小為 G1＞G2＞G5＞G6＞G3＞G4＞G7＞G9＞G8，G1中淀粉酶活性最高，G8最低。G1、G2、G5之間差異不顯著，顯著高于G3、G4、G6、G7、G8、G9。G3、G4、G6之間差異不顯著，顯著高于G7、G8、G9。G7、G9顯著高于G8，G7、G9之間差異不顯著。

在幽門盲囊中，淀粉酶活性大小為G5＞G2＞G1＞G4＞G3＞G9＞G8＞G7＞G6，G5中淀粉酶活性最高，G2、G1其次，G6中最低，比G1、G2、G5分別低27.2%、29.4%、31.42%。G1、G2、G5 與G4間差異不顯著，顯著高于G3、G6、G7、G8、G9。G4顯著高于G6、G7、G8，與G3、G9之間差異不顯著。G3、G6、G7、G8、G9各組之間差異不顯著。

2.2.2 胰蛋白酶活性（見表3）

由表3可知，在前腸中各組胰蛋白酶活性最高的是G1，其次為G2、G5，G7最低，G1、G2、G5分別比G7高46.5%、31.5%、31.4%。G1顯著高于G6、G7、G8，與G2、G3、G4、G5、G9之間差異不顯著。G2、G3、G4、G5、G9與G6、G8之間差異不顯著，顯著高于G7。G6、G7、G8各組間差異不顯著。

表3 九種交配組合鱧各組織胰蛋白酶活性（U/ml）

在后腸中，G5的胰蛋白酶活性最高，G1、G2次之，G7最低，胰蛋白酶活性的大小為G5＞G1＞G2＞G9＞G6＞G4＞G8＞G3＞G7。G1、G2、G5、G9與G4、G6之間差異不顯著，顯著高于 G3、G7、G8。G4、G6顯著高于G7，與G3、G8之間差異不顯著。G3、G7、G8之間差異不顯著。

在肝胰臟中，胰蛋白酶的活性大小為G1＞G2＞G5＞G4＞G3＞G7＞G8＞G6＞G9，G1 的胰蛋白酶活性最高，G9最低，比G1低36.2%。G1顯著高于其他各組。G2、G4、G5之間差異不顯著，顯著高于G3、G6、G7、G8、G9。G3、G7、G8之間差異不顯著，顯著高于G6、G9。G6、G9之間差異不顯著。

在胃中，G5胰蛋白酶活性最高，G1、G2次之，G7最低。G5顯著高于G3、G4、G6、G7、G8、G9，與G1、G2之間差異不顯著。G1與G2、G4、G5之間差異不顯著，但顯著高于G3、G6、G7、G8、G9。

在幽門盲囊中，胰蛋白酶活性在G2中最高，G1、G5次之，G7中最低。大小順序?yàn)镚2＞G1＞G5＞G9＞G4＞G3＞G8＞G6＞G7，G1、G2、G5各組間差異不顯著，顯著高于G3、G4、G6、G7、G8、G9；G3、G4與G9之間差異不顯著，顯著高于G6、G7、G8；G6、G7、G8組間差異不顯著。2.2.3 胃蛋白酶活性（見表4）

表4 九種交配組合鱧胃蛋白酶活性（U/ml）

由表4可知，胃蛋白酶在前腸中的活性大小順序G1＞G5＞G2＞G4＞G3＞G6＞G9＞G8＞G7，胃蛋白酶的活性在G1中最高，G7中最低。G1顯著高于G3、G6、G7、G8、G9，與G2、G4、G5各組間差異不顯著。G5顯著高于 G7、G8、G9，與 G2、G3、G4、G6之間差異不顯著。G2顯著高于G7，與其他各組間差異不顯著。G4與其他各組間差異不顯著。G3、G6、G7、G8、G9各組間差異不顯著。

在后腸中，胃蛋白酶活性最高的是G2，其次是G4、G5，最低的是G7，G2比G7高52.9%。G1、G2、G3、G4、G5顯著高于G7，G2、G4顯著高于G7、G8，G1、G2、G3、G4、G5、G6、G9各組間差異不顯著。G1、G3、G5顯著高于G7，與G6、G8、G9各組間差異不顯著。G6、G7、G8、G9各組間差異不顯著。

胃蛋白酶的活性在肝胰臟中相對于其他組織來說是最小的，其中G1最高，G2、G5次之，G8中最低。胃蛋白酶的活性的大小順序?yàn)镚1＞G2＞G5＞G4＞G3＞G6＞G9＞G7＞G8，G1與G2、G5差異不顯著，顯著高于G3、G4、G6、G7、G8、G9。G2、G5顯著高于G7、G8、G9，與G3、G4、G6各組之間差異不顯著。G3、G4、G6、G7、G8、G9各組間差異不顯著。

胃蛋白酶在胃中的活性遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于其他組織中的活性，在九個組合中活性最高的是G5，最低的是G6，G5比G6高90.64%。G5與G1、G2、G4各組間差異不顯著，但顯著高于G3、G6、G7、G8、G9。G6和G7又顯著低于G9。胃蛋白酶的活性的大小順序?yàn)镚5＞G4＞G1＞G2＞G9＞G8＞G3＞ G7＞G6。

在幽門盲囊中，胃蛋白酶的活性大小為G5＞G2＞G1＞G6＞G7＞G8＞G9＞G3＞G4。G5 與 G1、G2 之間差異不顯著，顯著高于G3、G4、G6、G7、G8、G9。G1、G2與G5、G6、G7差異不顯著，但顯著高于G3、G4、G8、G9。G6與G7差異不顯著，但顯著低于G5。G3、G4、G6、G7、G8、G9各組間差異不顯著。

2.2.4 脂肪酶活性（見表5）

表5 九種交配組合鱧各組織脂肪酶活性（U/ml）

由表5知，在前腸中脂肪酶活性大小為G1＞G5＞G2＞G6＞G9＞G4＞G8＞G3＞G7，脂肪酶活性最高的為G1，最低的為G7。G1顯著高于G2、G3、G4、G6、G7、G8、G9，與G5之間差異不顯著。G5顯著高于G3、G4、G7、G8、G9，與G2、G6之間差異不顯著。G2顯著高于G7、G3、G4、G8，與G6、G9差異不顯著。G6顯著高于G7，與其他各組之間差異不顯著（G1除外）。G3、G4、G7、G8、G9各組之間差異不顯著。

脂肪酶在后腸中活性比在其他組織中的要低，九組合中活性最高的為G2，其次是G5、G1，最低的為G7。G2顯著高于G4、G6、G7、G8，與G1、G3、G5、G9各組間差異不顯著。G1、G5顯著高于G6、G7，與其他各組間差異不顯著。G3、G4、G6、G7、G8、G9各組之間差異不顯著，其中G3、G9與其他各組之間差異均不顯著。

在肝胰臟中脂肪酶活性最高的為G5，最低的為G7，G5比G7高38.13%，九組合中大小順序?yàn)镚5＞G1＞G2＞G9＞G3＞G8＞G6＞G4＞G7。G1、G2、G5之間差異不顯著，顯著高于G3、G4、G6、G7、G8、G9。G3、G4、G6、G7、G8、G9各組之間差異不顯著。

在胃中，脂肪酶的活性大小順序?yàn)镚1＞G2＞G5＞G8＞G3＞G4＞G9＞G6＞G7，最高的為G1，G2、G5次之，最低的為G7。G1、G2、G5之間差異不顯著，顯著高于G3、G4、G6、G7、G8、G9。G8顯著高于G7,與G3、G4、G6、G9各組之間差異不顯著。G3、G4、G6、G7、G9各組之間差異不顯著。

在幽門盲囊中脂肪酶活性最高的為G1，G2、G5次之，最低的為G7，G1、G2、G5分別比G7高74.5%、71.5%、65.6%。G1、G2、G5之間差異不顯著，顯著高于G3、G4、G6、G7、G8、G9。G3顯著高于G4、G6、G7、G8，與G9之間差異不顯著。G9顯著高于G4、G6、G7、G8。G4、G6、G7、G8各組間差異不顯著。

3 討論

3.1 九種交配組合鱧生長指標(biāo)

成活率的高低對產(chǎn)值有巨大的影響，本試驗(yàn)中的G1成活率最高，比其他雜交組合有顯著的優(yōu)勢?？傇鲋卦黾拥拇笮【褪菍Ξa(chǎn)量的體現(xiàn)，特定生長率是衡量生長狀況的一個常用指標(biāo)，特定生長率越大，體重增長越快。本試驗(yàn)中G5總增重顯著低于其他組合，特定生長率顯著低于G2，說明該組合在此養(yǎng)殖階段生長緩慢。餌料系數(shù)是能效轉(zhuǎn)換的體現(xiàn)，試驗(yàn)中G1、G4和G5的餌料系數(shù)較小，生長效率高。綜合上述分析可知，G1[斑鱧（♀）×斑鱧（♂）]的成活率最高，可能試驗(yàn)的場地比較接近斑鱧的自然棲息地環(huán)境。但是從總增重、特定生長率這兩個指標(biāo)上來看，G1、G2、G4、G6和G7都顯示了較大的優(yōu)勢，體現(xiàn)出一定的“雜種優(yōu)勢”。結(jié)合餌料系數(shù)來看，G1和G4的生長效果優(yōu)于其他組合。G5[烏鱧（♀）×烏鱧（♂）]中成活率、總增重和特定生長率均顯著低于其它組合，這可能與馴化投喂膨化飼料的效果不好所致。

3.2 九種交配組合鱧消化酶指標(biāo)

消化酶活性是反映魚類消化機(jī)能的一項(xiàng)重要指標(biāo)。根據(jù)消化對象的不同，魚類的消化酶主要分為淀粉酶、蛋白酶及脂肪酶等幾類。消化酶活性隨魚的種類、健康狀況和生長階段等不同而異[9]。

3.2.1 九種交配組合鱧淀粉酶活性

淀粉酶普遍存在于魚類的各種消化器官中，但是不同消化器官中的活性差別比較大，不同魚類也有差異[10]。一般認(rèn)為魚類的唾液腺會隨著進(jìn)化而逐漸退化，肝胰臟是主要的淀粉酶分泌器官[11，5]，在胃內(nèi)淀粉酶的活性較低，明顯低于腸、肝胰臟和幽門垂等器官淀粉酶活性。本試驗(yàn)的研究發(fā)現(xiàn)，不同的組織中九種交配組合鱧都有淀粉酶活力，但有一定的差異。從結(jié)果來看，G1、G2、G5在本試驗(yàn)所測的組織中都具有較高的淀粉酶活力，相互之間無顯著差異。綜上分析可知，G1[斑鱧（♀）×斑鱧（♂）]、G2[斑鱧（♀）×烏鱧（♂）]和G5[烏鱧（♀）×烏鱧（♂）]相對其他組來說淀粉酶活性較強(qiáng)。

3.2.2 九種交配組合鱧胰蛋白酶活性

胰蛋白酶一般需要在腸激活酶的作用下才能成為有活性的蛋白酶，而且要在最適pH值下才可以發(fā)揮最大的活性，腸液有增強(qiáng)胰蛋白酶活性的功能[12]。莫桑比克羅非魚的肝胰臟蛋白酶的活性比腸蛋白酶活性高[13]。本試驗(yàn)的九種交配組合鱧在不同組織中的胰蛋白酶活力有較大差異。G1[斑鱧（♀）×斑鱧（♂）]和G2[斑鱧（♀）×烏鱧（♂）]在不同的組織中具有較高的胰蛋白酶活力。G2[斑鱧（♀）×烏鱧（♂）]和G5[烏鱧(♀)×烏鱧(♂)]除了在肝胰臟中的胰蛋白酶活力較低之外，在其他組織中也有著較高的胰蛋白酶活力。

3.2.3 九種交配組合鱧胃蛋白酶活性

魚類的蛋白酶主要來自胃部（或幽門盲囊）和肝胰臟，胃蛋白酶活性以胃黏膜中的最大，其它組織器官中活性很弱。對于有胃魚類來說，胃和前腸是魚類對食物進(jìn)行消化的主要場所[14]，本文的研究中，胃蛋白酶活性順序：胃＞前腸＞幽門盲囊＞后腸＞肝胰臟。胃蛋白酶一般在強(qiáng)酸性的pH值下發(fā)揮最大活性。G1[斑鱧（♀）×斑鱧（♂）]、G2[斑鱧（♀）×烏鱧（♂）]和G5[烏鱧（♀）×烏鱧（♂）]在不同的組織中都有著很高的胃蛋白酶活性。

3.2.4 九種交配組合鱧脂肪酶活性

脂肪在脂肪酶的作用下，分解成甘油酯和自由脂肪酸的混合物而被魚類吸收。在魚類很多消化器官都有脂肪酶發(fā)現(xiàn)，目前一般認(rèn)為肝胰臟是分泌脂肪酶的主要器官，而主要消化部位則是腸道[15-16]。根據(jù)試驗(yàn)數(shù)據(jù)可知，G1[斑鱧（♀）×斑鱧（♂）]和G5[烏鱧（♀）×烏鱧（♂）]在不同的組織中都有最高的脂肪酶活性。G2[斑鱧（♀）×烏鱧（♂）]除了在前腸中的活性較低之外，在其他組織都與G1、G5的活性相當(dāng)。

從九種交配組合鱧的生長性能和消化酶活性分析，發(fā)現(xiàn)G1[斑鱧（♀）×斑鱧（♂）]、G2[斑鱧（♀）×烏鱧（♂）]和G4[烏鱧（♀）×斑鱧（♂）]在生長和消化酶方面與其他各組相比有較大的優(yōu)勢。G5[烏鱧（♀）×烏鱧（♂）]有較高的消化酶活性，但在實(shí)驗(yàn)階段的生長緩慢，沒有表現(xiàn)出優(yōu)勢，但廣東地區(qū)的養(yǎng)殖效果表明烏鱧比斑鱧的生長快，這可能因?yàn)檫@種組合的魚在前期生長緩慢，在養(yǎng)殖后期才會有較高的生長率。綜上所述，在本研究的魚種階段，九種交配組合鱧中，以G1[斑鱧（♀）×斑鱧（♂）]、G2[斑鱧（♀）×烏鱧（♂）]和G4[烏鱧（♀）×斑鱧（♂）]組合最好，但是否適宜作為主要養(yǎng)殖品種進(jìn)行大面積推廣，還需要對后期的生長情況進(jìn)行研究；而雜交鱧的自交及回交后代在本實(shí)驗(yàn)中的結(jié)果顯示，各方面的指標(biāo)反而比親本的要差，而且這些品種對環(huán)境的適應(yīng)能力比較差，不宜大面積推廣，但雜交鱧[斑鱧（♀）×烏鱧（♂）]自身的生長表現(xiàn)出較大的優(yōu)勢。