蔡 艷，車曉俠，趙 宇，王 娜，席枝俠，丁 綺（西安交通大學第二附屬醫(yī)院藥劑科，西安 710004）

·藥理·

化生平膠囊對大鼠胃潰瘍的療效研究

蔡 艷，車曉俠，趙 宇，王 娜，席枝俠＊，丁 綺（西安交通大學第二附屬醫(yī)院藥劑科，西安 710004）

目的 研究化生平膠囊對胃潰瘍大鼠模型的治療作用。方法 采用鹽酸－乙醇法制造大鼠胃潰瘍模型，研究化生平膠囊對其潰瘍指數(shù)、潰瘍抑制率、血清及胃組織NO含量的影響，并通過光鏡和電鏡觀察各組大鼠胃黏膜的病理變化。結(jié)果 化生平膠囊可降低胃潰瘍大鼠潰瘍指數(shù)、提高抑制率，提高血清及組織中NO含量；光鏡和電鏡結(jié)果顯示，化生平膠囊可明顯改善大鼠胃組織的潰瘍變化。結(jié)論 化生平膠囊對大鼠胃潰瘍有明顯的保護作用。

化生平膠囊；胃潰瘍；胃黏膜；NO

胃潰瘍是消化系統(tǒng)常見病之一，可導致胃穿孔、出血、幽門梗阻等嚴重并發(fā)癥，部分患者可出現(xiàn)潰瘍惡變，嚴重影響患者身體健康和生活質(zhì)量。目前臨床上最常用的治療方式主要為藥物保守治療，其中中藥由于其毒副作用較低，在胃潰瘍治療中占有重要地位［1］?；侥z囊是由黃芪、白及、白花蛇舌草、莪術(shù)等益氣補血、收斂止血、去腐生肌、清熱解毒的中藥組成［2］。本實驗以鹽酸－乙醇制造急性胃潰瘍模型，研究其治療急性胃潰瘍的療效，為其臨床應用提供依據(jù)。

1 儀器與材料

1.1 儀器 CX21生物顯微鏡，日本OLYMPUS；超薄切片機，瑞典LKB公司；游標卡尺，廣州廣卓精密儀器有限公司；H－600透射式電子顯微鏡，日本日立公司；樣品處理機，德國Leica公司。

1.2 試藥 化生平膠囊，由西安交通大學第二附屬醫(yī)院藥劑科制劑室制備。鹽酸雷尼替丁：阿特維斯（佛山）制藥有限公司；NO試劑盒，購自南京建成生物工程研究所。

1.3 實驗動物 SD大鼠，SPF級，雄性，體質(zhì)量180 ±20g。由西安交通大學動物實驗中心提供（SCXK（陜）2007－001）。

2 實驗方法

2.1 動物分組及給藥 SD大鼠48只，隨機分為6組：正常對照組、胃潰瘍模型組、雷尼替丁組、化生平膠囊高、中、低劑量組。造模前各組禁食不禁水48 h。按照文獻方法進行胃潰瘍造模［3］：正常對照組給予7.5mL·kg－1生理鹽水，其余各組7.5mL·kg－1給予鹽酸－乙醇混合液，1日1次，連續(xù)3d。造模后30min，化生平膠囊高、中、低劑量組分別給予化生平膠囊內(nèi)容物1.92，0.96和0.48g·kg－1，雷尼替丁組給予雷尼替丁0.05g·kg－1，給藥體積均為10mL。對照組和模型組給予等體積生理鹽水。每天灌服1次，連續(xù)9d。

2.2 觀察指標

2.2.1 潰瘍指數(shù)及潰瘍抑制率測定 化生平膠囊治療9d后，禁食不禁水24h，處死大鼠，將大鼠沿腹白線切開，常規(guī)無菌操作暴露全胃，將胃的幽門和賁門用手術(shù)線扎緊，取出全胃，收集胃液后，沿胃大彎側(cè)處剪開，用冰生理鹽水沖洗干凈，將胃自然展開，用濾紙吸干，放冰臺上觀察胃黏膜表面，觀察潰瘍點，用游標卡尺量取潰瘍最大徑和最小徑，根據(jù)下列公式，分別計算潰瘍指數(shù)和潰瘍抑制率［4］。

潰瘍指數(shù)＝（潰瘍最大徑－潰瘍最小徑）／2

2.2.2 靜脈血及胃組織中NO含量的測定 標本采集：大鼠禁食不禁水24h后，用乙醚麻醉，從腹腔靜脈取血4～5mL，置于不抗凝試管中，靜置2～3h，以3 500r·min－1離心10min，分離血漿，取上層血清置于－20℃低溫保存。將光鏡、電鏡取材后所剩余胃組織收集，加9倍生理鹽水勻漿，以2 500 r·min－1離心10min后，取上清放入EP管中，－20℃低溫保存。NO含量測定采用硝酸還原酶法，操作按照試劑盒說明書進行。

2.2.3 胃黏膜光鏡及電鏡觀察 光鏡樣本制作：取胃小彎側(cè)近胃幽門部的胃組織，將其切成不超過0.4cm組織塊后，置于100mL·L－1甲醛溶液中，固定24h。用純水漂洗3次，每次15min，然后進行乙醇梯度脫水，石蠟包埋，HE染色，在光學顯微鏡下觀察。電鏡樣品采用常規(guī)超薄切片技術(shù)，取胃組織，用25mL·L－1戊二醛預固定2h，磷酸鹽緩沖液漂洗30min，10g·L－1四氧化鋨固定液4℃固定2h，磷酸緩沖液浸洗10min，乙醇梯度脫水，環(huán)氧丙烷置換10min；環(huán)氧樹脂Epon812浸透、包埋，聚合后作半超薄切片1～2μm，美藍染色后光學顯微鏡下定位，瑞典LKB－Ⅴ型超薄切片機進行超薄切片50～70 nm，醋酸鈾、檸檬酸鉛染色后，在日本日立H－600透射式電子顯微鏡下觀察、拍照。

2.2.4 統(tǒng)計學處理 統(tǒng)計學分析用SPSS 16.0統(tǒng)計軟件進行分析處理。計量資料采用±s表示，多樣本均數(shù)間兩兩比較采用單因素方差分析，組間樣本比較用Dunnett－t檢驗。

3 實驗結(jié)果

3.1 化生平膠囊對胃潰瘍大鼠體質(zhì)量的影響 見表1。結(jié)果表明，正常組大鼠喂養(yǎng)9d后，體質(zhì)量增長明顯，胃潰瘍模型組大鼠體質(zhì)量幾乎無增長，化生平膠囊各給藥組大鼠體質(zhì)量均有一定的增長趨勢，但與模型組相比，差異無統(tǒng)計學意義。

表1 化生平膠囊對胃潰瘍大鼠體質(zhì)量的影響Tab.1 The effect of Huashengping Capsules on the weight of gastric ulcer rats（±s，n＝8）

表1 化生平膠囊對胃潰瘍大鼠體質(zhì)量的影響Tab.1 The effect of Huashengping Capsules on the weight of gastric ulcer rats（±s，n＝8）

注：與模型組比較＊＊P＜0.01。

組別 劑量／g·kg－1造模前體質(zhì)量／g造模9d后體質(zhì)量／g體質(zhì)量差值／g對照組 165.1±6.0 182.3±8.2 17.94±3.13＊＊模型組 － 178.6±8.4 182.1±10.0 1.25±8.50雷尼替丁組 0.05 174.1±9.7 184.8±5.6 5.35±3.20 1.92 177.1±4.5 189.4±6.3 5.81±3.92化生平膠囊組0.96 176.3±6.8 183.9±7.3 3.75±3.66 0.48 166.3±2.1 174.3±9.6 3.38±5.21

3.2 化生平膠囊對胃潰瘍大鼠胃黏膜顏色形態(tài)、潰瘍指數(shù)及潰瘍抑制率的影響

見表2。結(jié)果表明，模型組與正常組比較，胃潰瘍指數(shù)明顯升高，表明造模成功。各治療組與模型組比較，胃潰瘍指數(shù)明顯低，表明化生平膠囊對大鼠胃潰瘍組織有明顯治療作用。

表2 化生平膠囊對胃潰瘍大鼠胃黏膜顏色形態(tài)、潰瘍指數(shù)及潰瘍抑制率的影響Tab.2 The effect of Huashengping Capsules on the profile of the gastric mucosa，ulcer index and inhibiting rates of gastric ulcer rats （±s，n＝8）

表2 化生平膠囊對胃潰瘍大鼠胃黏膜顏色形態(tài)、潰瘍指數(shù)及潰瘍抑制率的影響Tab.2 The effect of Huashengping Capsules on the profile of the gastric mucosa，ulcer index and inhibiting rates of gastric ulcer rats （±s，n＝8）

注：與模型組比較＊P＜0.05，＊＊P＜0.01。

組別 劑量／g·kg－1胃黏膜顏色、形態(tài)潰瘍指數(shù)／mm潰瘍抑制率／%對照組 表面光滑、顏色正常 0＊＊ －模型組 －表面粗糙、有明顯的潰爛及黃色附著物、顏色深紅2.80±0.11 0雷尼替丁組0.05 表面基本光滑、顏色淺紅1.15±0.30＊＊77.78化生平膠囊組1.92 表面基本光滑、顏色淺紅1.31±0.23＊＊67.85 0.96 表面基本光滑、顏色較高劑量組深1.94±0.34＊＊55.56 0.48表面較胃潰瘍組明顯光滑，顏色較淺，較其他組粗糙2.17±0.12＊＊48.40

3.3 化生平膠囊對胃潰瘍大鼠血清和胃組織NO含量的影響 見表3。結(jié)果顯示，胃潰瘍大鼠血清和胃組織中NO濃度較對照組明顯降低，而雷尼替丁和化生平膠囊高、中劑量組與模型組相比，差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.05或P＜0.01）。

表3 化生平膠囊對胃潰瘍大鼠血清和胃組織NO含量的影響Tab.3 The effect of Huashengping Capsules on the degree of acidity，pepsin activity，NO concentration of gastric ulcer rats

3.4 胃黏膜光鏡、電鏡觀察結(jié)果 光鏡觀察結(jié)果顯示，空白對照組大鼠胃組織結(jié)構(gòu)正常，細胞排列整齊。模型組大鼠胃黏膜上皮細胞脫落壞死，有炎性滲出，組織紊亂，毛細血管擴張，有潰瘍組織形成。雷尼替丁組大鼠胃組織有少量黏膜上皮細胞脫落、壞死，但整體排列較整齊，黏膜上皮細胞結(jié)構(gòu)基本接近正常?；侥z囊高劑量組大鼠胃組織有少量黏膜上皮細胞脫落壞死，結(jié)構(gòu)已接近正常。中劑量組胃組織比高劑量組有較多的壞死脫落上皮組織，有肉芽生成，開始愈合，少量炎細胞浸潤。低劑量組與正常組有差異，腺體結(jié)構(gòu)紊亂，有大量炎細胞浸潤，但比模型組有較整齊的結(jié)構(gòu)組織，上皮再生。見圖1。

圖1 近幽門處胃黏膜組織光鏡觀察結(jié)果（×100）A.空白對照組；B.胃潰瘍模型組；C.雷尼替丁組；D.化生平高劑量組；E.化生平中劑量組；F.化生平低劑量組Fig.1 The effect of Huashengping Capsules on the histological changes of gastric mucosa under light microscope（×100）A.control；B.model；C.ranitidine；D.Huashengping Capsules 1.92g·kg－1；E.Huashengping Capsules 0.96g·kg－1；F.Huashengping Capsules 0.48g·kg－1

電鏡結(jié)果顯示，空白對照組胃黏膜層結(jié)構(gòu)基本完整，上皮細胞呈單層柱狀排列，細胞表面可見極少量短小的微絨毛；細胞核形狀不規(guī)則，核內(nèi)染色質(zhì)分布均勻，核仁可見；細胞質(zhì)內(nèi)可見到線粒體、粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)及核糖體等細胞器結(jié)構(gòu)，細胞近腔面有豐富的電子密度較高的分泌顆粒，細胞間連接結(jié)構(gòu)清晰；胃潰瘍模型組胃黏膜結(jié)構(gòu)不完整，細胞排列紊亂，上皮細胞腫脹明顯，部分細胞脫落，形成缺損；細胞表面未見微絨毛結(jié)構(gòu)；細胞核形狀不規(guī)則，電子密度降低；細胞質(zhì)內(nèi)線粒體腫脹，部分線粒體嵴溶解、消失，粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)擴張，分泌顆粒數(shù)量不多，細胞間連接結(jié)構(gòu)不清晰。雷尼替丁陽性對照組胃黏膜結(jié)構(gòu)多數(shù)完整，部分上皮細胞腫脹、脫落，形成小的缺損；多數(shù)細胞結(jié)構(gòu)基本正常?；侥z囊高劑量組胃黏膜結(jié)構(gòu)基本完整，上皮細胞呈單層排列，部分細胞輕度腫脹，電子密度降低；細胞核形狀不規(guī)則，核內(nèi)染色質(zhì)分布均勻；細胞質(zhì)內(nèi)線粒體輕度腫脹，粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)輕度擴張，分泌顆粒豐富，細胞間連接結(jié)構(gòu)略清晰。中劑量組胃黏膜層結(jié)構(gòu)完整，基本正常，上皮細胞呈單層柱狀排列，細胞表面可見少量短小的微絨毛；細胞核內(nèi)染色質(zhì)分布均勻；細胞質(zhì)內(nèi)可見到線粒體、粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)及核糖體等細胞器結(jié)構(gòu)，分泌顆粒豐富，細胞間連接結(jié)構(gòu)清晰。低劑量組：胃黏膜結(jié)構(gòu)不完整，細胞排列紊亂，上皮細胞明顯腫脹，胃黏膜表面缺損較多；細胞核形狀不規(guī)則，體積較?。患毎|(zhì)內(nèi)可見灶狀空白區(qū)域，線粒體明顯腫脹，線粒體嵴溶解、消失，粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)輕度擴張，分泌顆粒數(shù)量較少，細胞間連接結(jié)構(gòu)不清晰。見圖2。

圖2 近幽門處胃黏膜組織電鏡觀察結(jié)果（×5 000）A.空白對照組；B.胃潰瘍模型組；C.雷尼替丁組；D.化生平高劑量組；E.化生平中劑量組；F.化生平低劑量組Fig.2 The effect of Huashengping Capsules on the histological changes of gastric mucosa under electron microscope（×5 000）A.control；B.model；C.ranitidine；D.Huashengping Capsules 1.92g·kg－1；E.Huashengping Capsules 0.96g·kg－1；F.Huashengping Capsules 0.48g·kg－1

4 討論

鹽酸－乙醇模型是大鼠胃潰瘍較為經(jīng)典的模型之一。鹽酸因直接腐蝕胃壁組織，導致胃黏膜血液循環(huán)障礙，組織壞死，誘發(fā)胃腸潰瘍，乙醇可增加細胞膜通透性，破壞胃腸黏膜的屏障而引起胃腸潰瘍，同時因刺激作用加劇胃腸蠕動，造成胃腸的機械性損傷［5］。本實驗采用鹽酸－乙醇制造急性胃潰瘍模型，經(jīng)定量（胃潰瘍指數(shù)、潰瘍抑制率、NO含量）和定性（胃組織病理切片）研究證實，胃潰瘍模型制造成功。使用化生平膠囊后，胃潰瘍大鼠潰瘍指數(shù)降低，潰瘍抑制率提高。光鏡和電鏡結(jié)果均表明，化生平膠囊不同劑量組可使胃潰瘍大鼠胃黏膜組織腫脹減輕，炎性滲出減少，肉芽組織形成，細胞超微結(jié)構(gòu)逐步趨于正常，表明化生平膠囊具有明顯的黏膜保護作用。

胃潰瘍發(fā)生的機制比較復雜，目前研究認為，黏膜損害因素與保護因素之間的平衡失調(diào)是造成胃潰瘍的重要原因［6－7］。在消化性潰瘍的發(fā)生過程中，胃黏膜血流量的正常供應是重要的保護因素之一。其中NO被認為是胃潰瘍發(fā)生中重要的胃黏膜保護性因子，它可擴張黏膜血管，增加血流量，改善黏膜血運異常［8］。本研究表明，模型組在胃潰瘍發(fā)生時，伴隨著潰瘍指數(shù)的增加，血清和胃組織NO含量均明顯降低，化生平膠囊高、中、低劑量組能使血清和胃組織NO含量均明顯升高，表明化生平膠囊的修復胃黏膜作用可能與刺激胃黏膜合成或釋放NO、增加胃黏膜血流量有關(guān)。

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Effect of Huashengping Capsules on gastric ulcer rats

CAI Yan，CHE Xiaoxia，ZHAO Yu，WANG Na，XI Zhixia＊，DING Qi（Department of Pharmacy，the Second Affiliated Hospital of College of Medicine，Xi′an Jiaotong University，Xi′an 710004，China）

Objective To study the effect of Huashengping Capsules on gastric ulcer rats.Method Hydrochloric acid and alcohol were used to make gastric ulcer model on rats and the content of Huashengping Capsules was administrated.The ulcer index，inhibiting rate of astric ulcer，NO concentration in serum and stomach，and the histological change on electron microscope were observed.Results Huashengping Capsules decreased the ulcer index and NO content in serum and stomach，meanwhile increased the inhibiting rate of astric ulcer.Histological ulcer was improved by Huashengping Capsules.Conclusion Huashengping Capsules have protective effect on gastric ulcer rats.

Huashengping Capsules；gastric ulcer；gastric mucosa；NO

10.3969／j.issn.1004－2407.2015.04.015

R965

A

1004－2407（2015）04－0373－04

2014－11－19）

陜西省中醫(yī)藥管理局基金（ZY28）

蔡艷，女，主管藥師，碩士

＊通信作者：席枝俠，女，主任藥師，碩士